Research Advances on Panax japonicus and its Approximation Varieties in Tujia Nationality

Panax japonicus and its approximation varieties,such as Rhizoma Panacis Majoris and Panax japonicus C. A. Mey. var.major （Burk.） C.Y. Wu et K.M. Feng belong to Panax,which are less commonly used traditional Chinese medicine. Because of similar traits and effectiveness,they were always used as one type of medicine for a long time. Aiming at this phenomenon,the chemical composition and contents of P. japonicus and its approximation varieties from different area were compared in order to provide a chemical basis for clarifying the classification of the genus.

珠子参愈伤组织培养与花色甙的形成

从珠子参(panax japonicus var.major)叶柄诱导的愈伤组织在暗培养条件下主要形成3种花色甙色素,且均以矢车菊素为甙元。2,4-二氯苯氧乙酸和激动素的组合能明显地促进色素的合成,色素含量可达34.14mg/g fw。

珠子参抗真菌糖蛋白的研究

珠子参(Panax japonicus C.A.Meyer var. major(Burk)Wu et Feng)根茎用盐溶液提取,透析,两次离子交换层析,凝胶过滤,分离到两个蛋白质(ZP-1,ZP-2),其中,ZP-2能明显地抑制绿色木霉、麦类赤霉菌丝的生长。经SDS-PAGE及Sephadex G-75过滤,测得ZP-2的分子量分别为55和66kD,是由分子量非常相近的两个亚基组成。PAS反应表明ZP-2是一个糖蛋白,经GLC分析,中性糖含量为28.91％,由葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、木糖、鼠李糖和半乳糖组成;糖醛酸含量经Bitter的方法测得为22.76％。用OPA柱前衍生氨基酸高压液相色谱法测定ZP-2的部分氨基酸组成,结果表明此蛋白质高含酸性氨基酸。ZP-2对人红血细胞无凝集活性,也无几丁酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。

珠子参ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的：建立珠子参的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序，为其深入研究奠定基础。方法采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取珠子参总DNA ，并用正交设计实验对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。结果提取的基因组DNA纯度和完整性较好，A260/A280值在1．8～2．0之间，DNA无降解现象，可满足ISSR-PCR扩增要求。珠子参ISSR分析的最适反应体系为：在20μL PCR反应体积中，含10 ng模板DNA、0．20 mmol·L -1 dNTPs、1．5μmol·L -1引物、3U TaqDNA 聚合酶、2μL 10× PCR Buffer、3 mmol·L -1 Mg2＋。扩增程序为：95℃预变性5 min ，94℃变性30s，58℃退火30 min ，72℃延伸1 min ，循环40次，72℃延伸10 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。结论建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究珠子参的遗传变异和遗传多样性。

珠子参表型性状变异及其与地理-土壤养分因子的相关性分析

【目的】探讨珠子参表型性状变异及其与地理-土壤养分因子的相关性。【方法】以12个珠子参天然居群为对象,采用变异系数、方差分析、相关分析与聚类分析相结合的方法进行研究。【结果】珠子参的小叶数、茎色、叶形、叶缘等性状在居群间与居群内均有明显变异;7个表型性状在居群间与居群内也存在广泛变异,居群间各性状的变异系数为20.28%~69.18%,其中茎粗和复叶柄长在居群间的变异最大,变异系数的平均值分别为69.18%和57.49%;12个居群表型性状的平均变异系数最大的居群是香格里拉普达措(PDC1)为53.61%,变异系数最小的居群是尾木尼村(WMN)为27.11%。相关性分析表明,珠子参居群的叶长、复叶柄长与纬度和海拔存在显著负相关关系;小叶柄长与经度存在显著正相关关系;株高、叶长、小叶柄长与土壤中的有效磷含量存在显著正相关关系。聚类分析表明,12个珠子参天然居群可分为4类,但性状的表型特征并没有完全依地理距离而聚类。【结论】珠子参天然居群表型性状存在丰富的变异,且与分布生境土壤中有效磷的含量有关。

珠子参挥发油的化学成份

利用气相色谱—质谱—计算机联用仪分析了云南省腾冲县产珠子参挥发油的成份,从中鉴定了27种化合物,测定了它们的相对含量,其中有10种倍半萜烯和一种倍半萜醇。

滇西北珠子参田间主要病害发生情况调查初报

为保障滇西北珠子参产业健康持续的发展,2017年在珠子参大田发病高峰期,采用五点取样法对滇西北5个连片珠子参种植基地开展病害调查,统计各调查点发病株数,计算发病率和病情指数;同时观察并记录各观测点的种植模式。滇西北珠子参主要病害有3种,分别为圆斑病、黑斑病和锈病;其他病害如灰霉病、白粉病、炭疽病和疫病也有不同程度的发生。农事措施得当的观测点病害发生情况相对较低,与重楼套种或杂草滋生的观测点的发病率相对较高。圆斑病、黑斑病和锈病是珠子参生产上危害最严重的病害,可采取选择地势较高、通风效果较好、排水条件通畅的地块进行建园,设计避雨遮阴棚,可极大限度地降低珠子参病害的发生程度。

紫外指纹图谱结合PLS-DA法鉴定不同产地珠子参

建立快速鉴别不同产地珠子参的方法,为其质量评价提供依据。采用UV指纹图谱结合PLSDA法鉴别不同产地的珠子参样品,分析珠子参的UV特征光谱存在的差异,利用PLS-DA方法分析不同珠子参样品UV特征光谱的吸光度值。结果表明,不同产地珠子参样品的UV指纹图谱的特征吸收峰的吸收波长相似,峰强度存在差异,能有效区别不同产地的珠子参样品;PLS-DA方法能把怒江、玉溪、大理和文山的珠子参样品分为4类,除了大理和文山样品相近,其余产地样品相距较远。

珠子参生产技术标准操作规程(SOP)

通过对珠子参、羽叶三七药用植物生长特性的考察和药材加工技术的总结,制定了利于珠子参药材品质形成的栽培环境选择标准、栽培技术标准、采收加工标准、质量评价标准、以及包装、运输和贮藏标准,形成了一套完善的珠子参生产技术标准规程(SOP),为今后的珠子参药材规模化和规范化生产提供参考。

羽叶三七植物性状及生长动态分析

目的:对移植的羽叶三七植物性状生长发育进行动态分析,掌握其生物学特性,应用于规范化种植生产。方法:记录两个植物生长周期各个时期生长数据,进行植物各器官生长情况的分析。结果:表明株高、主茎粗、叶柄长、叶片宽呈上升抛物线,以二年期的最高,在7月10日～20日达到最大,其后动态曲线趋于稳定;叶片数、分蘖数无明显变化。结论:移栽一年期株高的表型多样性丰富,二年期变异幅度高。

遮阴对珠子参生长发育及光合生理特性的影响

为探明遮阴对珠子参生长发育和光合生理特性的影响,对盆栽珠子参分别采取全光照、30%遮阴和50%遮阴3种处理。在珠子参生长90天后,考察各处理下珠子参植物学性状、生理指标和光合特性。结果表明,与全光照相比,30%遮阴处理下珠子参株高、主茎粗、果实数、根茎直径、叶绿素含量、SOD和POD活性增加,地下根茎节间长度和叶MDA含量减小。遮阴处理后珠子参净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr)低于全光照处理,胞间CO_2浓度(C_i)则高于全光照处理。遮阴有效地缓解了珠子参的"午休"并降低了光抑制,其中,30%遮阴处理效果最显著,为珠子参的生长提供了较为适宜的环境。

珠子参皂苷合成途径3个关键酶基因CAS、DS和β-AS时空表达分析

旨在明确环阿屯醇合成酶(CAS)、达玛烯二醇合成酶(DS)和β-香树酯合成酶(β-AS)基因在珠子参中的时空表达情况及其与总皂苷含量的关系。以珠子参叶、茎、花和根状茎为材料,采用实时荧光定量技术检测了3个酶基因在不同时期的表达情况,并分析了基因表达与总皂苷含量之间的关系。CAS、DS和β-AS均在珠子参地上部分高表达,在根状茎中低表达;5—9月间CAS在根状茎中的表达呈现出"高—低—高"的趋势,而DS和β-AS则表现出相反的趋势;珠子参总皂苷含量变化呈"S"型曲线,其前期含量与DS和β-AS的表达呈正相关关系。推测珠子参皂苷最初和主要的合成部位为叶,根状茎可能是后期部分皂苷合成的场所。

GC-MS法检测湘产扣子七、白三七挥发性成分含量研究

目的:比较扣子七、白三七中挥发油的化学成分含量。方法:分别采用水蒸气蒸馏法提取扣子七、白三七的挥发性成分,均采用GC-MS联用仪测定提取物,以峰面积归一化法测定各成分的相对含量。结果:从扣子七提取物中鉴定39种组分,占总峰面积的96.35%;从白三七提取物中鉴定41种组分,占总峰面积的97.17%。结论:两种药材共有成分在5%以上的有4种,分别为斯巴醇、棕榈酸、棕榈酸乙酯和亚油酸乙酯,该方法为扣子七和白三七的综合开发提供了参考依据。

不同栽培年限珠子参在不同生长期的光合特性及保护酶活性研究

目的:为珠子参高效优质人工栽培技术提供研究基础。方法:在一个生长周期内对不同栽培年限珠子参主要农艺性状、叶片光合特性、叶绿素和丙二醛含量、保护酶活性进行测定,用Excel与SPSS软件处理数据。结果:3年生珠子参地上部分生长旺盛,叶绿素含量和保护酶活性高,对光能的捕获、有机物的同化、以及对环境的适应能力高于2年生和苗期珠子参。结论:人工栽培珠子参,应根据栽培年限和生长阶段的不同采取相应的遮阴措施。

珠子参生殖生物学特性的研究

目的:研究珠子参开花习性,传粉方式及探索提高结实率的方法。方法:在珠子参开花期定株观察记录其开花习性;通过4种不同人工授粉处理确定珠子参的传粉方式;采用叶面施肥、喷施微量元素硼及植物生长调节剂等方法,探索提高珠子参的结实率。结果:珠子参其开花习性与同属植物人参、西洋参、三七相似;其传粉方式为常异花授粉植物;分别喷施0.5%的KH_2PO_4溶液,0.1%和0.25%的硼砂水溶液,50 mg·L^(-1)和100 mg·L^(-1)的赤霉素溶液、20 mg·L^(-1)的6-苄胺腺嘌呤溶液,可使珠子参的开花结实率分别提高15.76%、15.46%、16.97%、14.67%、14.32%及10.0%。结论:该研究为珠子参规范化栽培及良种繁育提供了理论依据。

珠子参药材中皂苷类成分的薄层色谱及HPLC特征图谱研究

目的:建立和完善珠子参药材的薄层色谱及HPLC特征图谱鉴别方法。方法:采用薄层色谱法鉴别珠子参药材中皂苷类成分;采用HPLC法对同一产地不同地块的10批次珠子参药材皂苷类成分进行指纹图谱分析,选用Waters XTerra MS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,分析时间为55 min,检测波长为203 nm。结果:珠子参药材的薄层色谱中皂苷类成分分离度好,斑点清晰,专属性强,同时建立了珠子参皂苷类成分的HPLC特征图谱方法。结论:薄层色谱及HPLC特征图谱方法稳定、可靠、重复性好,为珠子参药材的质量控制提供了科学依据。

温度对珠子参种胚生长发育的影响

[目的]了解温度对珠子参种胚生长发育的影响,掌握解除种子休眠的方法。[方法]采用不同温度条件下种子沙藏处理,定期取材,以解剖学的方法,对种胚的形态大小及发育情况进行观测。[结果]珠子参种胚属高低温型。在15℃下发育最好,约160 d即可达到满胚,后再转入5℃低温处理60 d即裂口。裂口种子10℃培养5 d就开始萌发。[结论]该研究为珠子参种子催芽育苗提供科学依据。

珍稀药用植物珠子参的转录组测序及分析

药用植物珠子参的根茎在中国西南区域已有上千年的药用历史,三萜皂苷为珠子参最主要的活性成分。为了探索珠子参根茎中皂苷物质生物合成的分子基础,该文采用Illumina Hi Seq 2000高通量测序获得珠子参根茎的转录组数据;使用Trinity和TGICL软件实现Unigene的de novo拼接;基于BLAST完成Unigene的蛋白功能注释、KOG功能注释、GO分类和KEGG代谢通路分析。最终获得了短读序15.6 Gb,通过de novo拼接注释得到Unigene 62 240个。研究发现,珠子参根茎部表达的19个Unigene与三萜碳环骨架合成相关;69个Unigene与介导三萜碳环骨架的氧化和羟基化等修饰的CYP450相关,18个Unigene与负责三萜碳环骨架的糖基化的糖基化转移酶相关。该研究发现的三萜皂苷合成相关候选基因对于阐明珠子参三萜皂苷合成方式研究提供了重要的基础。

珠子参叶化学成分研究

研究珠子参叶的化学成分。采用硅胶，Sephadex LH-20，ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据分析鉴定了7个化合物的结构5，7．二羟基-8-甲氧基黄酮（1）、人参皂苷Rs2（2）、西洋参皂苷R1（3）、人参皂苷Rs。（4）、三七皂苷Fe（5）、人参皂苷Rd：（6）和gypenosiden IX（7）。化合物1为首次从人参属植物中分离得到，2—7均为首次从该植物中分离得到。

濒危植物珠子参愈伤组织诱导因素分析

以珠子参节、节间和越冬芽萌发后的叶、根为试材,研究了不同消毒方法、外植体、植物生长调节剂及培养条件等对珠子参愈伤组织诱导的影响,以期获得愈伤组织诱导的最佳方法。结果表明:最佳消毒方法是75%酒精消毒15s后,越冬芽、节和节间分别加0.2%氯化汞消毒5、15、15min;节间为愈伤组织诱导最适宜外植体;2,4-D 2.0mg/L+KT 0.1mg/L对节间诱导愈伤组织效果最好,诱导率为96.67%;以MS为基础培养基添加浓度为5g/L的琼脂较适宜愈伤组织的诱导;温度25℃、光周期24h/d、光照强度6 200lx的条件有利于愈伤组织的诱导。