Research Advances on Panax japonicus and its Approximation Varieties in Tujia Nationality

Panax japonicus and its approximation varieties,such as Rhizoma Panacis Majoris and Panax japonicus C. A. Mey. var.major （Burk.） C.Y. Wu et K.M. Feng belong to Panax,which are less commonly used traditional Chinese medicine. Because of similar traits and effectiveness,they were always used as one type of medicine for a long time. Aiming at this phenomenon,the chemical composition and contents of P. japonicus and its approximation varieties from different area were compared in order to provide a chemical basis for clarifying the classification of the genus.

Preparation and antiviral effects of polysaccharides from Panax japonicus

Water-soluble polysaccharides were prepared from Panax japonicus by hot water extraction and ethanol precipitation.The polysaccharides were further purified by ion exchange chromatography to obtain neutral and acidic polysaccharides.The neutral polysaccharide fraction mainly contained Glc(90.2%),which was a glucan fraction.The acidic polysaccharide fraction mainly contained GalA(43.6%),Gal(21.7%),and Ara(15.4%),with a degree of methyl-esterification of 20.3%,which was a pectic polysaccharide.The acidic polysaccharide of Panax japonicus could effectively inhibit the replication of human seasonal influenza virus H1N1 and canine influenza virus H3N2 in MDCK cells and A549 cells and significantly reduce the virus titer in infected cells.It also effectively inhibited the number of infected cells of the SARS-CoV-2 South Africa strain and the Omicron strain.The acid polysaccharide of Panax japonicus showed good efficacy against influenza virus and COVID-19 infection,which could be used as a potential antiviral candidate drug molecule in the future.

Triterpenoid Saponins from Tu Jia Ethnomedicine Bai San Qi and Their Cytotoxicity on Hep G2 and BGC-823 Cell Lines

Objective Tu Jia ethnomedicine is a unique medical system inherited and adhibited by Tu Jia minority living in central-south China. Panax japonicus C. A. Mey.(Bai San Qi,白三七) is recognized as an effective and rare medicinal plant to treat weakness, fatigue and rheumatism in Tu Jia ethnomedicine. This paper is to discover more substance evidence for the application of Tu Jia ethnomedicine. Methods Column chromatography and preparative high performance liquid chromatography (HPLC) was applied for isolation and purification;1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H COSY, HSQC and HMBC NMR spectra were applied for structure identification;Methyl thiazolyl tetrazolim (MTT) assays were applied for cytotoxicity evaluation. Results Totally 12 known compounds were isolated by column chromatography and preparative HPLC from rhizomes of Panax japonicus C. A. Mey.(Bai San Qi,白三七). Structures of these compounds were identified by their NMR spectra. All the 12 compounds were triterpenoid saponins. Five of them were oleanolic acid type, and the remaining 7 were dammarane type. Eleven compounds were assayed for their cytotoxic activity against Hep G2 human liver cancer cell lines and BGC-823 human gastric cancer cell lines. Three of the 11 showed relatively dominant cytotoxicity against these cell lines. Conclusions A total of 12 known compounds have been identified from Panax japonicus C. A. Mey.(Bai San Qi,白三七);NMR spectra of compounds with similar skeletons showed regular characteristics;3 compounds showed relatively dominant cytotoxicity against Hep G2 and BGC-823 cancer cell lines, and the result can be valued as weak while setting the taxol as a positive control.

珠子参ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的：建立珠子参的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序，为其深入研究奠定基础。方法采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取珠子参总DNA ，并用正交设计实验对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。结果提取的基因组DNA纯度和完整性较好，A260/A280值在1．8～2．0之间，DNA无降解现象，可满足ISSR-PCR扩增要求。珠子参ISSR分析的最适反应体系为：在20μL PCR反应体积中，含10 ng模板DNA、0．20 mmol·L -1 dNTPs、1．5μmol·L -1引物、3U TaqDNA 聚合酶、2μL 10× PCR Buffer、3 mmol·L -1 Mg2＋。扩增程序为：95℃预变性5 min ，94℃变性30s，58℃退火30 min ，72℃延伸1 min ，循环40次，72℃延伸10 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。结论建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究珠子参的遗传变异和遗传多样性。

GC-MS法检测湘产扣子七、白三七挥发性成分含量研究

目的:比较扣子七、白三七中挥发油的化学成分含量。方法:分别采用水蒸气蒸馏法提取扣子七、白三七的挥发性成分,均采用GC-MS联用仪测定提取物,以峰面积归一化法测定各成分的相对含量。结果:从扣子七提取物中鉴定39种组分,占总峰面积的96.35%;从白三七提取物中鉴定41种组分,占总峰面积的97.17%。结论:两种药材共有成分在5%以上的有4种,分别为斯巴醇、棕榈酸、棕榈酸乙酯和亚油酸乙酯,该方法为扣子七和白三七的综合开发提供了参考依据。

竹节参总皂苷预处理对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血损伤的影响

目的:研究竹节参总皂苷预处理对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血损伤的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:实验大鼠随机分为假手术组、模型组和竹节参总皂苷组;治疗组大鼠给予竹节参总皂苷,预防性给药7 d后,行结扎大鼠冠状动脉术制作急性心肌缺血损伤模型,术后12 h进行大鼠心电图和血流动力学检测,然后取血进行血液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量分析;取心脏,分别进行心肌组织2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色和HE染色。结果:竹节参总皂苷能明显改善心功能,对抗冠脉结扎诱导的心电图T波降低,显著降低心肌梗死面积,减少心肌缺血性损伤;降低血清中CK、LDH活性和MDA含量,增加血清中SOD、CAT活性。结论:竹节参总皂苷对冠脉结扎致急性心肌缺血损伤具有较好的保护作用,抗氧化损伤可能是其作用机制之一。

竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。

从内质网应激途径探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用

目的:研究竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法:将40只18月龄雄性SD大鼠随机分为4组,即自然衰老组及竹节参总皂苷低、中、高剂量组,以6月龄大鼠作为青年对照组,每组10只。竹节参总皂苷低、中、高剂量组大鼠从18月龄开始分别灌胃给予10、30、60 mg/kg的竹节参总皂苷,青年对照组和自然衰老组大鼠灌胃等体积生理盐水。灌胃持续6个月,每周连续灌胃6 d,停药1 d。HE染色观察大脑皮层的形态,TUNEL法检测各组大鼠大脑皮层中细胞凋亡情况,Western blot检测大脑皮层中GRP78、p-JNK、JNK、CHOP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与自然衰老组比较,竹节参总皂苷各剂量组大脑皮层组织形态结构有所改善,且细胞凋亡数量减少;竹节参总皂苷还能显著升高自然衰老组大脑皮层中Bcl-2蛋白表达,抑制GRP78、CHOP、Bax和p-JNK蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,减少脑细胞凋亡有关。

分析比较竹节参两种不同提取方法所得挥发性成分

目的分析比较不同的竹节参挥发性成分。方法采用挥发油提取器法和索氏提取器法提取竹节参挥发性成分,使用GC-MS联用仪进行测定。依据C9-C30正构烷烃在HP-5MS柱上的保留时间计算各峰保留指数,用峰面积归一化法测定各成分相对含量。结果从正己烷索氏提取液中鉴定了13种组分,占总峰面积的93.7%;从挥发油提取器法提取物中鉴定了14种组分,占总峰面积的70.4%。结论两种提取方法得到的挥发性成分主成分变化较大,本研究为竹节参的进一步开发提供了科学依据。

竹节人参角鲨烯合成酶基因的克隆与生物信息学分析

人参（Panax ginseng C．A．Mey．）属于五加科（Araliaceae）人参属（Panax）植物，是传统的名贵中药材，人参属的所有植物均具有较高的药用价值，其主要活性成分是皂苷[1-2]。人参根的总皂苷含量为2％～7％，而竹节人参（Panax japonicus C．A．Mey．）根的总皂苷含量高达15％以上，约为前者的2—7倍、西洋参的3倍，是总皂苷含量最高的人参属植物[2-3]。。

竹节参粗多糖的初步纯化工艺研究

先用乙醇对竹节参粗多糖进行分步醇沉以脱除色素,利用Sevag法、TCA法和木瓜蛋白酶法对其进行脱蛋白,以多糖回收率和蛋白损失率为考察指标,比较三种方法对竹节参粗多糖脱蛋白的效果。实验结果表明,进行5次醇沉,最终乙醇浓度为50%时沉淀出乳白色的粗多糖。Sevag法脱蛋白率80.5%,多糖回收率24%;TCA法脱蛋白率59.8%,多糖回收率47.3%;木瓜蛋白酶法脱蛋白率86.7%,多糖回收率为87.9%。可见,木瓜蛋白酶法能有效去除竹节参粗多糖中的蛋白质。

竹节参主要病虫害及其防治

主要阐述了竹节参栽培中常见病害、虫害的种类、发生规律、危害特征及其防治方法。

人参果中水溶性多糖的分离、纯化及鉴定

从人参果渣中提取的水溶性粗多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、木糖，半乳糖醛酸，半乳糖，葡萄糖组成。经酸性乙醇分级，得四个级份。Ｆ２级份经纯化后，得一杂多糖Ｆ，经纯度鉴定为均一杂多糖。分子量约为１９０万。Ｆ经Ｓｍｉｔｈ降解分析，Ｆ含β－（１→３）－Ｄ聚半乳糖，β－消除反应证明，Ｆ含Ｏ－糖苷键。

羽叶三七植物性状及生长动态分析

目的:对移植的羽叶三七植物性状生长发育进行动态分析,掌握其生物学特性,应用于规范化种植生产。方法:记录两个植物生长周期各个时期生长数据,进行植物各器官生长情况的分析。结果:表明株高、主茎粗、叶柄长、叶片宽呈上升抛物线,以二年期的最高,在7月10日～20日达到最大,其后动态曲线趋于稳定;叶片数、分蘖数无明显变化。结论:移栽一年期株高的表型多样性丰富,二年期变异幅度高。

竹节人参中氨基酸和皂甙特征组分的分析鉴别

建立了利用高效液相色谱法和红外光谱法分析鉴别竹节人参中氨基酸和皂甙的特征组分的方法。分离了竹节人参中的皂甙和水溶性氨基酸,并对其中的Rb1和Rg1两种人参皂甙以及17种氨基酸进行了定性分析;粗皂甙红外图谱的主要特征峰与Rb1一致。通过与指定的粗皂甙的红外图谱相比较,可鉴定药品的真伪;分析样品色谱图中氨基酸和皂甙等成分的比例,可对该产品进行内在品质的鉴定。该方法简便、快速,所得实验结果代表性强,重现性良好。

基于竹节参转录组的SSR分子标记开发和鉴定

目的:开发鉴定竹节参SSR分子标记,深入研究竹节参的遗传多样性。方法:基于竹节参转录组数据,利用MISA软件进行SSR序列的查找及特征分析;并根据SSR两翼序列设计引物,优化反应体系,以5种不同居群的竹节参为模板检测SSR引物的多态性。结果:在竹节参转录组的66 403条unigenes中找到12 244个SSR位点,共分布于10 299条unigenes中,SSR发生频率为15.51%;SSR重复基序则以2、3、5、6重复类型为主,各自最多的重复单位分别为:AT/AT(44.87%)、AAG/CTT(24.00%)、AAAAT/ATTTT(19.28%)、AAAAAT/ATTTTT(6.54%)。设计30对SSR引物进行PCR扩增,24对可扩增得到特异性条带;通过竹节参样品检测引物多态性,最终获得18对稳定的多态性SSR引物。结论:竹节参的SSR位点类型丰富,分布密集,将为竹节参及其近缘种的分子鉴定和遗传多样性研究奠定分子基础。

竹节参雌配子体发育的研究

本文报道了竹节参(Panax japonicus C.A.Mey)雌配子体(胚囊)的发育过程。竹节参大孢子母细胞减数分裂产生线形排列的大孢子四分体。胚囊发育属蓼型,由合点端大孢子发育而成。游离核胚囊时期,胚囊珠孔端的细胞器种类和数量都较胚囊合点端多;胚囊合点端相邻的珠被细胞中有含淀粉粒的小质体,与胚囊珠孔端相邻的退化中的非功能大孢子中则有含淀粉粒的大质体和大类脂体。成熟胚囊中,反足细胞较早退化;极核融合成次生核;卵细胞高度液泡化,细胞器数量较少;助细胞则有丰富的细胞器和发达的丝状器。PAS反应表明,受精前的成熟胚囊中积累淀粉粒。次生核受精后,很快分裂产生胚乳游离核,到几十至数百个核时形成胚乳细胞。卵细胞受精后则要经过较长的休眠期。

正交试验优选人参多糖的提取工艺

目的优选人参多糖的最佳提取工艺。方法以多糖提取率、糖醛酸提取率和相对分子质量为指标,比较3种不同提取方法(水提、酸提和碱提)的提取效果,并采用正交试验优选最佳提取工艺。结果人参多糖的最佳提取工艺为15倍量水,100℃水浴提取3次,每次3 h。结论该工艺操作简单、稳定性好,可用于产业化生产。

竹节参总皂苷对H_2O_2致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:通过建立H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤模型,观察竹节参总皂苷(SPJ)对心肌细胞的保护作用。方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常组,模型组(H2O2),SPJ低剂量组(50 mg.L-1),SPJ高剂量组(100 mg.L-1)。H2O2诱导心肌细胞氧化损伤2 h后SPJ孵育24 h,显微镜下观察细胞搏动频率,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量。结果:SPJ(50,100 mg.L-1)可明显增加心肌细胞搏动频率,降低H2O2所致乳鼠心肌细胞LDH释放量,升高SOD,CAT,GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.01或P<0.05)。结论:SPJ对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用。