ATP处理导致PC12细胞通透性变化及NaHS的干预作用

目的:观察NaHS(H_2S供体)对ATP(三磷酸腺苷)诱导的PC12细胞存活率及膜通透性变化的影响,探讨H_2S对抗ATP致伤作用的可能机制。方法:高分化PC12细胞置于含有高浓度ATP的培养基中3 h制备细胞损伤模型。在ATP处理前30 min,把NaHS或CBX(生胃酮,Pannxin-1通道阻滞剂)加入培养基中,作为预处理。用CCK-8检测细胞存活率,Fura-2/AM荧光染料检测细胞[Ca^(2+)]_i,YO-PRO-1或Lucifer Yellow(荧光黄)荧光染料检测RFU(胞内相对荧光单位),研究NaHS干预后细胞存活率和膜通透性的变化。结果:ATP(3、5mmol/L)处理使PC12细胞存活显著降低,NaHS(200μmol/L)和CBX(10μmol/L)预处理均可显著拮抗ATP(3 mmol/L)诱导的细胞存活率下降。ATP(3、5 mmol/L)可使PC12细胞内[Ca^(2+)]_i明显增加,而NaHS(200μmol/L)和CBX(10μmol/L)预处理可使ATP(3 mmol/L)诱导的胞内[Ca^(2+)]_i的增幅明显降低。ATP(3、5mmol/L)使PC12细胞对YO-PRO-1和Lucifer Yellow通透明显增加,而NaHS(200μmol/L)和CBX(10μmol/L)预处理可显著阻遏ATP诱导的膜通透性增加。结论:Pannxin-1蛋白在ATP诱导PC12细胞膜孔形成中有重要作用,干预膜孔形成可能是NaHS拮抗ATP损伤作用的机制之一。