Parasiticein诱导烟草细胞凋亡的形态及生化特征

【目的】研究烟草细胞对parasiticein的反应,了解parasiticein诱导烟草细胞的PCD的发生机制。【方法】用浓度约100nmol·L-1的parasiticein处理烟草悬浮细胞,相差显微镜下观察细胞的形态变化。【结果】发现烟草细胞的细胞膜收缩,与细胞壁间形成空隙,原生质浓缩等;用trypanblue染色后观察到类似现象。对诱导处理的悬浮细胞经DAPI(4,6-diamino-2-phenylindole)染色后,通过荧光显微镜观察,发现细胞核先后表现染色质凝集、形成颗粒状等特征;对处理的悬浮细胞提取基因组DNA并进行琼脂糖凝胶电泳,可观察到梯状的DNA条带(DNA laddering)。研究还发现,parasiticein诱导的烟草细胞死亡可被蛋白激酶信号通路抑制剂K252-a部分抑制。【结论】parasiticein诱导的烟草细胞死亡具有细胞凋亡的典型形态及生化特征,是一种主动的细胞死亡过程。

Elicitin诱导烟草微敏反应和防卫基因的表达

研究了一种α型elicitin—parasiticein对烟草微敏反应（microscopic hypersensitive response，micro-HR）和防卫反应分子表征基因表达的诱导作用。用150nmol/L的parasiticein喷洒烟草叶片12h后，经曲利本蓝（trypanblue）染色，光镜下可观察到有细胞坏死，说明parasiticein引起了micro—HR，而水和低浓度的parasiticein不能引起micro—HR。用parasiticein注射叶片可引起肉眼可见的HR，注射用parasiticein浓度远比喷洒引起micro-HR的浓度低。Parasiticein还可诱导对TMV的抗性，浓度在30nmol/L时比150nmol/L的效果好。用parasiticein注射烟草30min，HR表征基因hsr203J和hin1开始表达，在9h内逐渐降低，12—16h肉眼可观察到HR。Parasiticein喷洒烟草后，病程相关蛋白（pathogenesis-related，PR）基因PR-1b易在诱导的第1d到第5d都有一定量的表达。可见，parasiticein能同步诱导过敏反应和抗病性及其分子表征基因的表达。