Dose-dependent effect of parathyroid hormone 1-34 fragment and its influence mechanism on the functional activity of isolated heart

The present investigation is the continuation of our prior clinical studies on the content of parathyroid hormone (PTH), its paracrine analog, parathyroid hormone-related protein (PTHrP) and electrolytes in blood of patients with heart failure. The results of these studies formed the basis for the nomination of the hypothesis on PTH and PTHrP compensatory-modulating effect on the contractile activity of heart. The objective of this study is to elucidate the mechanism of the compensatory-modulating effect of PTH on heart functional activity, which is realized by the study of effective doses of PTH by pharmacological analysis, using different inhibitors. The dose-dependent effect of PTH on the heart contraction rate and amplitude is studied on the frog isolated heart by the method of non-invasive registration of heart contractile activity. The method is based on the photoelectric principle of the reflected from the contractile object light ray transformation into an electric signaling. It is shown that the most effective dose that has positive chronotropic and inotropic effects on heart is 10–10 M hormone. To clarify the mechanism of PTH physiological dose action on the contractile activity of heart PTH 1-34 is combined with Ca-channel as well as phosphodiesterase blockers. The mentioned substances are applied based on the fact that PTH effect on target cells is mediated by secondary messengers, particularly calcium ions and cAMP. Based on the data obtained by combination of hormone with Verapamil (10–5 M) and Theophylline (10–4 M), we concluded on the involvement of calcium ions in the realization of chronotropic and cAMP in the inotropic effects on the heart.

甲状旁腺激素(1-34)对老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者的疗效

目的:探究甲状旁腺激素(1-34)联合空心钉在老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者中的临床疗效。方法:选取2020年7月至2021年7月济源市人民医院收治的老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者80例,随机分为观察组和对照组,各40例。对照组患者给予空心钉治疗,观察组患者采用甲状旁腺激素(1-34)联合空心钉治疗。观察并比较两组患者骨折愈合时间、出院时间、疼痛评分、髋关节功能评分、骨密度水平及生活质量评分。结果:观察组患者骨折愈合时间、出院时间短于对照组,疼痛评分低于对照组,髋关节功能评分及骨密度水平高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:甲状旁腺激素(1-34)联合空心钉治疗方案应用于老年股骨颈骨折合并骨质疏松症患者可获得较好的临床疗效,相较于单用空心钉治疗,患者康复的时间更短,治疗后疼痛症状缓解显著,髋关节功能及骨密度水平改善效果好。

人甲状旁腺激素片断1-34对去卵巢大鼠骨量和骨生物力学特性的作用

目的探讨人甲状旁腺激素1-34[human parathyroid hormone(1-34),hPTH1-34]对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法 分别予去卵巢6周的Wister大鼠hPTH1-34(40μg·kg-1·d-1,sc每周5次)或生理盐水干预8周,假手术大鼠不予治疗。留取 腰椎1-6(L1-6)、右侧股骨及血、尿标本分别进行骨密度、骨生物力学和生化指标的测定。结果 hPTH1-34组L1-6、股骨远端和股 骨干骨密度值明显高于去卵巢对照组,且L1-6和股骨干的骨密度值与假手术组无差异;凹入试验中hPTH1-34组Can．Load和 Can．Stiff明显高于去卵巢对照组,和假手术组无差异;三点弯曲实验中hPTH1-34组E．Modulus值与对照组无统计学差异;hPTH1-34 组血ALP和UDpd／Cr水平低于去卵巢对照组,但高于假手术组。结论 hPTH1-34可以明显增加去卵巢骨质疏松大鼠的骨量和 骨生物力学特性。

甲状旁腺激素(1-34)对老年骨质疏松性肱骨近端骨折术后影响的临床研究

目的分析PTH在老年骨质疏松性肱骨近端骨折术后患者中的应用。方法选取老年骨质疏松性肱骨近端骨折患者100例,将100例患者随机分为治疗组(n=50)和对照组(n=50)。治疗组在锁定钢板内固定手术后加用PTH,对照组仅予锁定钢板内固定手术。对比分析治疗组与对照组术后各项指标差异,分析锁定钢板内固定手术联合PTH在骨质疏松性肱骨近端骨折老年患者中的应用。结果术后1周、2周时2组患者疼痛情况比较,治疗组NRS评分明显低于对照组(P<0.05),随访12个月时治疗组患者肩关节功能恢复情况明显优于对照组(P<0.05),治疗组术后并发症发生率明显低于对照组(P<0.05),治疗组骨折愈合时间、骨痂出现时间、住院时间及肿胀消退时间均短于对照组(P<0.05)。结论 PTH对老年骨质疏松性肱骨近端骨折患者术后安全有效,能够有效减轻患者疼痛,缩短病程,改善患者肩关节功能,降低术后并发症的发生率。

人甲状旁腺素(1-34)的合成与聚乙二醇化修饰

目的合成人甲状旁腺素(1 34) [hPTH(1-34) ]并进行聚乙二醇化修饰。方法应用固相多肽合成方法合成并经高效液相色谱纯化得hPTH(1-34) ,Cys-hPTH(1- 34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 。Cys hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 在水溶液(pH 7～8)中分别与平均相对分子质量为5 0 0 0的单甲氧基马来酰亚胺基聚乙二醇(mPEG50 0 0 MAL)反应,经高效液相色谱纯化得Cys(mPEG50 0 0 MAL)- hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys(mPEG50 0 0- MAL) -NH2 。结果hPTH(1-34) ,Cys(mPEG50 0 0 MAL) hPTH(1 34)和hPTH(1 34) Cys(mPEG50 0 0 MAL) NH2 的质谱和氨基酸组成分析结果均与理论值一致。hPTH(1-34) -Cys(mPEG50 0 0-MAL) NH2 保持了较好的体外活性,Cys(mPEG50 0 0- MAL) hPTH(1-34)保持了较好的体内活性。结论采用一种简便的方法成功实现了对hPTH(1-34)

重组人甲状旁腺激素(1-34)对体外培养成骨细胞骨形成的作用

目的 体外观察重组人甲状旁腺激素[recombinant human parathyroid hormone（1-34），rhPTH（1-34）]对成骨细胞骨形成的刺激作用。方法采用酶消化法分离获得大鼠成骨细胞，间隙加药方法给予rhPTH（1-34），观察药物对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。结果 10^-12～10^-8mol／L浓度对成骨细胞的增殖、分化和矿化功能均显示刺激作用。10^-11～10^-8mol／L浓度组的MTT、ALP的A值及矿化结节形态计量结果与对照组比较，具有显著性增加（P〈0．05），增加率以10^-9mol／L浓度组为最高，并呈剂量一效应关系。结论 rhPTH（1-34）对体外培养成骨细胞的增殖、分化和矿化功能具有明显促进作用。

注射用重组人甲状旁腺素(1-34)的Ⅰ期临床耐受性研究

目的:评价中国健康志愿者皮下注射重组人甲状旁腺素(1-34)的安全性和耐受性。方法:将40例18～40岁的健康受试者随机分为10,20和40μg 3个剂量组,腹部皮下注射,观察临床症状体征并严密观察记录试验期间发生的不良反应事件。结果:各组受试者体检及实验室检查各项指标均在正常范围,具较好的可比性。给药后生命体征和实验室检查均未见有临床意义的改变,试验中未见严重不良反应发生。结论:健康受试者皮下注射甲状旁腺素(1-34)40μg以内安全性和耐受性较好。

注射用重组人甲状旁腺素(1-34)在健康人体的药代动力学

目的研究注射用重组人甲状旁腺素(1-34)[rhPTH(1-34)](激素)在中国健康人体内的药代动力学特征。方法30名健康受试者随机分为10,20,40μg3个剂量组,每组10人,用免疫放射测定法(IRMA)测定人血浆中甲状旁腺激素(PTH)浓度。结果药代动力学参数:tmax分别为(32.5±9.5),(24.0±9.7)和(35.0±13.5)min;Cmax分别为(0.14±0.04),(0.20±0.05)和(0.30±0.04)ng.mL-1;t1/2分别为(47.7±12.1),(50.1±16.4)和(53.6±14.4)min;AUC(0-240)分别为(9.79±1.46),(15.42±1.66)和(32.72±3.16)ng.min.mL-1。结论单次皮下注射重组人甲状旁腺素(1-34)在低、中、高3个剂量内,Cmax和AUC呈线性增长,与剂量呈正相关;体内代谢呈线性代谢特征,与国外报道基本一致。

人甲状旁腺素(1-34)对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性影响

目的：研究外源性ｈＰＴＨ（１３４）对原代培养成骨细胞ＡＬＰ活性影响。方法：新生大鼠头盖骨中取成骨细胞，改良Ｇｏｍｏｒｉ氏钙钴法染色鉴定，磷酸苯二钠法测定ＡＬＰ活性，ＲＴＰＣＲ检测ＡＬＰｍＲＮＡ表达。结果：１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１ｈＰＴＨ（１３４）以４８ｈ为一循环，在每一循环的前１２ｈ作用于细胞时，可使成骨细胞ＡＬＰ活性较对照组增加最明显，ｈＰＴＨ（１３４）４８ｈ作用组，与对照相比细胞ＡＬＰ活性无显著差异。ｈＰＴＨ（１３４）１２ｈ作用组，成骨细胞ＡＬＰｍＲＮＡ表达最高。结论：ｈＰＴＨ（１３４）刺激成骨细胞内ＡＬＰ活性升高与给药方式及药物浓度有关，间歇性给药成骨细胞内ＡＬＰ活性升高。

甲状旁腺激素(1-34)和阿仑膦酸钠治疗骨质疏松症合并类风湿关节炎疗效的对比研究

目的比较甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)和阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)治疗骨质疏松症合并类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)女性患者的疗效。方法选取98例于2017年2月至2017年11月在我院就诊诊断为骨质疏松症合并RA的绝经后女性患者。按照治疗方案将患者分为PTH组和ALN组,两组患者分别接受特立帕肽或阿仑膦酸钠治疗,观察治疗6个月后两组患者骨密度和骨代谢指标的改变。结果在两组治疗6个月后,腰椎的骨密度较治疗前均有显著增加(P<0.05)。与ALN组相比,PTH组治疗6个月腰椎骨密度的平均变化百分比显然更高;而股骨颈骨密度仅在PTH组显著增加。结论甲状旁腺激素(1-34)在短期治疗骨质疏松症合并类风湿女性患者时,效果较阿仑膦酸钠更佳。

重组人甲状旁腺素1-34治疗绝经后骨质疏松症的临床研究

目的观察重组人甲状旁腺素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34)应用于绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)患者的临床疗效。方法筛选出68例绝经后骨质疏松症患者,所有患者入组后均口服元素钙500 mg/d和维生素D 200 U/d,连续服用26周后加用皮下注射重组人甲状旁腺素1-34(特立帕肽)20μg/d,再连续治疗26周,于应用特立帕肽治疗前及治疗后的13和26周测定腰椎(L_(1-4))和股骨近端骨密度(BMD),采静脉血测定血清骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(AKP)水平,应用疼痛视觉模拟评分法(VAS评分)评价患者的疼痛程度,并记录不良反应情况。结果 68位患者均完成全疗程治疗。应用特立帕肽治疗13周时,腰椎L_(1-4)、股骨颈、大粗隆和股骨干骨密度改善不明显(P>0.05),血清骨钙素和碱性磷酸酶较治疗前升高(P<0.05),疼痛缓解明显(P<0.05);治疗26周时,腰椎L_(1-4)和股骨颈骨密度较治疗前明显增高(P<0.05),而大粗隆和股骨干骨密度改善不明显(P>0.05),血清骨钙素和碱性磷酸酶呈持续升高趋势(P<0.05),疼痛明显减轻(P<0.05)。治疗期间不良反应的情况均较轻微,没有给予特殊处理即自行缓解。结论连续26周使用重组人甲状旁腺素1-34能有效地促进患者骨形成,缓解骨质疏松症患者疼痛症状,提高患者腰椎、股骨骨密度。

重组人甲状旁腺激素1-34多次皮下注射给药的人体药动学特征

目的研究健康志愿者多次皮下注射重组人甲状旁腺激素1-34[(rhPTH(1-34)]后体内的药动学特征。方法8名健康志愿者多次皮下注射rhPTH(1-34)后,采用放射免疫法测定血浆中rhPTH(1-34)浓度,评估它的药动学特性。结果rhPTH(1-34)的主要药动学参数如下:d 1,AUC0→t为(17103.3±2243.3)ng.min.L-1,AUC0→∞为(20471.3±2444.6)ng.min.L-1,ρmax为(171.2±34.2)ng.L-1,tmax为(38.1±15.1)min,t12为(55.7±3.9)min;d 7,AUC0→t为(17759.6±3781.5)ng.min.L-1,AUC0→∞为(20698.4±3374.6)ng.min.L-1,ρmax为(184.6±36.8)ng.L-1,tmax为(35.0±16.0)min,t12为(51.6±7.6)min,蓄积系数R为1.02±0.18。结论多次皮下注射rhPTH(1-34)后,与单次给药相比它在人体内的吸收、消除不随连续给药变化,药物在体内没有蓄积作用。rhPTH(1-34)的安全耐受性良好。性别对药动学参数没有影响。

人甲状旁腺素(1-34)对新生鼠成骨细胞钙含量及钙化结节形成的影响

目的研究外源性ｈＰＴＨ（１－３４）对新生大鼠成骨细胞基质钙含量及钙化结节形成的影响。方法新生大鼠成骨细胞原代培养，原子吸收分光光度法测细胞基质钙含量，ｖｏｎＫｏｓｓａ染色鉴定钙化结节。结果１０－１０～１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ｈＰＴＨ（１－３４）持续作用于细胞，基质钙含量与对照相比显著降低；１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１ｈＰＴＨ（１－３４）在以４８小时为一循环的前１２小时给药循环８次时基质钙含量达最高峰，与对照组相比增加５７６％，且形成钙化结节最多。结论ｈＰＴＨ（１－３４）刺激成骨细胞基质钙含量及钙化结节形成与给药方式及药物浓度有关，低浓度间歇性给与ｈＰＴＨ（１－３４）能提高成骨细胞基质钙及促进钙化结节形成。

纳升电喷雾串联质谱鉴定重组人甲状旁腺素(1-34)

用先进的纳升电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱鉴定重组人PTH(1-34)。通过ESI-MS测定重组人PTH(1-34)分子量及MS/MS对其胰蛋白酶酶解后的肽段的序列和数据库查询进行结构鉴定。重组PTH(1-34)测定分子量为4115.21,与理论值相比测定相差0.06%。MS/MS测定出其中双电荷离子峰m/z728.4肽段序列为VSEIQLMHNLG,以及其他3个单电荷离子峰的序列。数据库检索后确定重组表达的PTH(1-34)一级结构完全正确,纳升电喷雾串联质谱以其灵敏、快速和准确为蛋白质鉴定提供了有效的手段。

甲状旁腺素1-34对新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的观察人甲状旁腺素1-34(hPTH)对原代培养新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,通过细胞内钙离子([Ca^(2+)]i)的变化,探讨诱导CFs增殖的发生机制。方法培养新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞,根据加入不同浓度的hPTH(10^(-10)、10^(-9)、10^(-8)mol/L)分组、同时设维拉帕米(L型钙通道拈抗剂)组。四氮唑盐比色法(MTT)、~3H-TdR掺入法检测细胞增殖；激光共聚焦显微镜(LSCM)测定细胞内[Ca^(2+)]i。结果①CFs增殖活性组间比较,差异有统计学意义(F=9．20,P＜0．01)。随着hPTH的增加,CFs增殖活性呈明显递增性升高,10^(-10)、10^(-9)、10^(-8) mol/L组CFs增殖活性分别为(0．408±0．016)、(0．518±0．019)、(0．778±0．034),与对照组(0．365±0．013)比较,差异有统计学意义(P＜0．01)。②~3H-TdR的掺入量组间比较差异有统计学意义(F=8．82,P＜0．01)；~3H-TdR的掺入量也随着hPTH的升高而呈递增趋势,10^(-10)、10^(-9)、10^(-8) mol/L组分别为(36．79±2．03)、(39．13±1．98)、(45．51±2．64)Bq,与对照组(24．08±1．23)Bq比较,差异有统计学意义(P＜0．01)；维拉帕米组~3H-TdR掺入量(41．68±2．72) Bq,明显低于10^(-8) mol/L组(P＜0．01)。③CFs内[Ca^(2+)]j组间比较,差异有统计学意义(F=9．16,P＜0．01)；10^(-10)、10^(-9)、10^(-8) mol/L组CFs内[Ca^(2+)]i(38．28±4．40、63．78±5．15、78．39±6．87)也明显高于对照组(36．18±3．57)；维拉帕米组CFs内[Ca^(2+)]i为(52．14±4．69),明显低于单独应用hPTH 10^(-8) mol/L组。结论PTH能刺激CFs增殖,增殖活性与PTH浓度有关,L型钙通道开放引起的细胞外钙内流增加为其重要的机制之一。

人甲状旁腺激素1-34对大鼠牙本质形成和矿化的影响

目的:观察人甲状旁腺激素1-34(human parathyroid hormone1-34,hPTH1-34)对牙本质的形成和矿化的影响,探讨PTH影响牙本质形成和矿化的机制。方法:切除大鼠甲状旁腺,建立牙本质发育不全的动物模型后,再人工给予不同剂量的hPTH1-34,检测血钙水平的变化,42d后处死大鼠,取下颌切牙制作切片,HE染色,光镜观察并进行图像分析。结果:切除甲状旁腺的大鼠血钙水平下降,牙本质矿化缺陷。在给予hPTH1-34皮下注射后可以检测到血钙水平上调,光镜观察和图像分析结果发现牙本质的形成和矿化发生逆转,10nmol/kg组和20nmol/kg组作用效果优于5nmol/kg组(P<0.05)。结论:PTH可能通过调节血钙或其自身直接作用影响牙本质的形成和矿化。

人甲状旁腺激素1-34对培养的人牙髓细胞PTH-PTHrP受体mRNA表达的影响

目的:观察人甲状旁腺激素1-34(hum an Parathyroid hormone 1-34,hPTH1-34)对PTH-PTHrP(Parathyroid hormone-Parathyroid hormone related prote in)受体mRNA在体外培养的人牙髓细胞中表达的影响,探讨PTH影响牙本质形成和矿化的机制。方法:将培养的第4代牙髓细胞分为两组:实验组培养基加入含33.3 nmol/L hPTH1-34,在其培养的第5,10,15,20天提取总RNA,以RNA为模板在逆转录酶作用下合成cDNA,加入特异引物进行PCR扩增,同时扩增β-肌动蛋白的cDNA作为半定量RT-PCR的内参照,对PCR产物进行半定量分析。结果:在人牙髓细胞培养的5、10 d,对照组和实验组的PTH-PTHrP受体mRNA水平均较低,10 d以后PTH-PTHrP受体mRNA水平开始升高,实验组高于对照组,差异有统计学意义。结论:PTH-PTHrP受体的表达与牙髓细胞的分化密切相关;hPTH1-34可以促进PTH-PTHrP受体的表达,PTH可能通过促进PTH-PTHrP受体的表达或与PTH-PTHrP受体结合影响牙本质的形成和矿化。

人甲状旁腺素(1-34)对新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究外源性人甲状旁腺素(1-34)hPTH(1-34)对原代培养新生Wistar鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及胶原合成的影响。方法:分离、培养Wistar乳鼠心肌成纤维细胞,加入不同浓度的hPTH(1-34)共培养,四氮唑盐比色法(MTT)、3H-TdR掺入法检测细胞增殖;3H-Proline掺入法测定胶原合成。结果:随着一定浓度hPTH(1-34)的升高,CFs MTT法A490值及3H-TdR的掺入量、3H-脯氨酸掺入率呈明显的递增趋势(P<0.01);维拉帕米预处理组与单独应用组10-8mol/L hPTH相比,以上指标均显著降低(P<0.01)。结论:PTH可显著刺激成纤维细胞增殖及胶原合成,L型钙通道开放引起的细胞外钙内流增加为其重要机制之一。

甲状旁腺激素(1-34)对大鼠下颌骨骨折愈合的短期和长期影响的实验研究

目的探究甲状旁腺激素(1-34)(PTH_(1-34))对大鼠下颌骨骨折愈合的短期和长期影响。方法选择60只雄性SD大鼠构建下颌骨骨折模型,并根据随机数字表法分为5组:阴性对照组、地塞米松组、PTH_(1-34)低剂量组、PTH_(1-34)中剂量组和PTH_(1-34)高剂量组,每组各12只。阴性对照组肌内注射等剂量0.9%氯化钠溶液,地塞米松组肌内注射1 mg/kg地塞米松,3个PTH_(1-34)剂量组分别肌内注射15、30和60μg/kg,共连续治疗28 d。分析各组第1、2、3、4周骨折愈合处平均骨密度值、骨折愈合平均灰度值、骨小梁面积百分比和骨小梁厚度、骨痂形成评分、骨痂区骨保护素(OPG)水平以及血清骨形态发生蛋白(BMP-7)、转化生长因子β1(TGF-β1)和碱性成纤维生长因子(bFGF)浓度。结果随着时间的延长,3个PTH_(1-34)剂量组不同时间段骨折愈合处平均骨密度值、骨折愈合平均灰度值、骨小梁面积百分比和骨小梁厚度、骨痂形成评分、骨痂区OPG水平以及血清BMP-7、TGF-β1及bFGF浓度均显著高于阴性对照组和地塞米松组,差异均有统计学意义(P<0.05),且中剂量PTH_(1-34)的影响效果最显著。结论PTH_(1-34)对促进大鼠下颌骨骨折愈合效果显著,从短期效果来讲,PTH_(1-34)可促进骨密度和骨保护素水平增加;从长期效果来讲,PTH_(1-34)可促进骨痂和骨小梁的形成,这可能与促进血清BMP-7、TGF-β1及bFGF生长因子有关,但其作用效果存在最适剂量(30μg/kg),低于或超过该剂量作用效果均会下降。

重组人甲状旁腺素(1-34)临床研究进展

骨质疏松症是常见的代谢性骨病之一。作为第一个被批准使用的促骨形成药物,重组人甲状旁腺素(1-34)小剂量具有增加骨密度,改善骨结构,减少脊椎和椎外骨折发生率的作用,成为骨质疏松症治疗的新热点。新近的临床研究还证实它还可与抗骨吸收药序贯治疗。现分别从药代动力学、药理机制、临床应用和不良反应等四方面对重组人甲状旁腺素(1-34)进行阐述。