低钙腹透液对持续性腹膜透析患者高钙血症的影响

目的观察低钙腹透液(PD4,钙离子浓度为1.25mmol/L)对高钙血症持续性腹膜透析(CAPD)患者钙磷代谢的影响。方法45例使用标准钙腹透液(PD2,钙离子浓度为1.75mmol/L)后出现高钙血症的CAPD改用PD4透析,监测患者治疗前后血钙、磷、全段甲状旁腺激素(PTH)的变化,同时分析影响血钙水平变化的相关因素。结果完成6个月观察的41例患者2个月后即出现血钙、磷水平明显降低,PTH较前明显升高(P<0.05)。血钙下降幅度与患者的年龄呈负相关,而与透析剂量和超滤量呈正相关(P<0.05)。结论PD4可有效调节CAPD患者的高钙血症,缓解低转运性骨病的发生和发展。

赋能教育模式对血液透析患者钙磷代谢及营养状态的影响

目的观察赋能教育模式对血液透析伴矿物质及骨代谢异常患者钙磷代谢及营养状态的影响。方法组建赋能教育模式团队,选择2015年6月至2016年6月我院透析中心维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者60例,赋能教育模式干预12周后,采用自身前后对照的方法,比较患者血钙、血磷、钙磷乘积、全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone,i PTH)、血红蛋白(hemoglobulin,Hb)、血浆白蛋白(albumin,Alb)、前白蛋白(pre albumin PAB)、肱三头肌皮褶厚度(triceps skinfold thickness,TSF)和上臂中段肌肉周径(mid-arm muscle circumference,MAMC)。结果赋能教育模式后患者血钙、血磷、钙磷乘积、赋能教育模式后患者血钙(t=0.017,P=0.002)、血磷(t=0.368,P=0.005)、钙磷乘积(t=3.089,P≤0.001)、i PTH降低(t=4.216,P=0.004),Hb(t=-1.267,P=0.039)、Alb升高(t=-1.051,P=0.045),TSF升高(t=-2.546,P=0.009),MAMC有升高趋势,但差异尚无统计学意义(t=-1.056,P=0.736)。结论赋能教育模式可改善血液透析伴矿物质及骨代谢异常患者钙磷代谢及营养状态。

人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的构建及表达

构建人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的表达载体,并表达得到该融合蛋白。通过设计强特异性的引物,利用重叠PCR技术,定向定量的拼接得到hPTH(1-34)二联体-HSA融合蛋白的基因;将构建好的融合基因插入表达载体pPIC9K,大量扩增重组质粒,并用SalI线性化,电击转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷和G418抗性双重筛选得到阳性转化子;挑选阳性转化子进行甲醇诱导表达。测序结果表明得到的重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)二联体-HSA与目标设计完全一致;基因组PCR鉴定结果证明成功构建了hPTH(1-34)二联体-HSA融合基因的毕赤酵母(GS115)表达系统;SDS-PAGE电泳表明融合蛋白获得了表达,尿微量白蛋白试剂盒测定甲醇诱导表达3d后融合蛋白的产量为127 mg/L。

高通量血液透析联合血液灌流对血清PTH和ALB的影响

目的探讨高通量血液透析(HFHD)联合血液灌流(HP)对血清甲状旁腺素(PTH)和血清白蛋白(ALB)的影响。方法选取30例维持性低通量血液透析合并继发性甲状旁腺功能亢进的患者,随机分为LFHD和HFHD+HP两组,每组各15例,LFHD组予常规低通量血液透析,每周三次;HFHD+HP组予每两周5次常规低通量透析,每两周一次HFHD+HP治疗,于0个月、12个月分别检测两组的血清Ca2+、P3+、i PTH、ALB的浓度。结果治疗12个月后,两组比较发现:HFHD+HP组的i PTH明显下降,ALB明显升高(P<0.05),LFHD组的i PTH、ALB无明显变化(P>0.05);两组治疗后比较,HFHD+HP组的P3+,hs-CRP明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),Ca2+差异无统计学意义。结论 HFHD联合HP治疗能有效清除MHD患者的PTH,长期应用可以升高血清ALB,改善营养状态。

甲状旁腺激素-人血清白蛋白融合蛋白在CHO细胞中的表达

人甲状旁腺激素是由人甲状腺旁腺主细胞分泌合成的一种单链多肽激素,成熟的甲状旁腺激素含84个氨基酸残基,其活性区域为N-末端1-34氨基酸片段,目前已上市的PTH药物也以34个氨基酸残基的多肽为主,主要用于治疗老年骨质疏松以及绝经后妇女骨质疏松。但是PTH的稳定性较差,导致体内半衰期短,难以形成有治疗作用的稳态血药浓度,从而限制了其临床应用。因此,设计稳定并能保持原有生物活性的PTH药物分子至关重要。构建含有融合蛋白基因PTH-HSA的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中,利用p MH3质粒所携带的NEO基因进行筛选,最终得到能稳定表达目的蛋白的重组细胞,并在5L发酵罐中进行表达,融合蛋白PTH-HSA表达量达到155mg/L。Western blot检测显示,该融合蛋白同时具有HSA和PTH双重免疫原性。

维持性血液透析患者血镁水平与腹主动脉钙化程度的相关性研究

目的探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清镁(serum magnesium,Mg)水平与腹主动脉钙化(abdominal aortic calcification,AAC)程度的相关性。方法选取2021年1—3月暨南大学附属顺德医院收治的76例MHD患者作为本研究对象,根据患者的腹主动脉钙化评分(abdominal aortic calcification score,AACs)将所有患者分为Ⅰ组(0分≤AACs≤4分),Ⅱ组(5分≤AACs≤15分)和Ⅲ组(AACs≥16分);以1.065 mmol/L浓度的Mg作为临界值,将所有患者分为高Mg水平组和低Mg水平组。收集所有患者的一般临床资料、血清各项生化指标的水平值以及AACs具体评分情况。结果通过分析得出,MHD患者中存在AAC的患者共有36例,占比为47.37%;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组患者年龄、空腹血糖、血清白蛋白(serum albumin,ALB)、Mg、血磷(serum phosphorus,Pi)、血清甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)水平值以及钙磷乘积比较,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ组患者的Mg水平值明显较Ⅱ、Ⅲ组患者更高(P<0.05);Ⅱ组患者Mg水平值明显较Ⅲ组患者更高,差异有统计学意义(P<0.05);经Logistic多因素回归分析得出,Mg是AAC的保护因素,空腹血糖是AAC的影响因素;MHD患者中,高Mg水平组患者共有33例,其中AAC患者10例,占比为30.30%;低Mg水平组患者共有43例,AAC患者26例,占比为60.47%,差异有统计学意义(P<0.05);高Mg水平组患者Pi、PTH水平值、钙磷乘积均较低Mg水平组更低,而血钾(serum potassium,K)水平值相比低Mg水平组更高,差异有统计学意义(P<0.05);通过分析显示,血清Mg浓度与年龄、空腹血糖等均无相关性(P>0.05),与AAC,Pi、PTH指标,钙磷乘积均呈负相关(P<0.05),与K指标呈正相关(P<0.05)。结论MHD患者发生AAC的概率较高,患者血清中Mg浓度与AAC、Pi、K、钙磷乘积以及PTH水平均具有一定的相关性。

慢性肾脏病患者血清25羟维生素D的影响因素

目的探讨非透析慢性肾脏病(CKD)患者血清25羟维生素D [25(OH)D]水平的变化及其影响因素。方法选取我院2019年1—10月住院的非透析CKD3~5期患者92例,健康体检者作为对照组90例,分别测定各组的血清25(OH)D水平及相关实验室指标,并分析其相关性。结果 98.6%的CKD患者血清25(OH)D水平低于30 ng/mL,而对照组的比例为48%。CKD患者血清25(OH)D水平低于对照组,[(16.54±5.80)ng/mL vs (37.79±3.58)ng/mL,P <0.01]。25(OH)D与年龄、BMI和eGFR均无显著相关性。血清25(OH)D水平与血钙呈正相关(r=0.337,P <0.01),25(OH)D与血磷、iPTH、尿酸和尿白蛋白/肌酐比(ACR)呈负相关(r=-0.44、-0.679、-0.724、-0.781,P <0.01)。多元线性回归分析结果表明血钙、血磷、iPTH、尿酸和ACR是25(OH)D的独立影响因素(β=-0.089、-0.228、-0.255、-0.315、-0.33,P <0.01)。结论非透析CKD患者25(OH)D水平较健康体检者显著降低。ACR和尿酸是非透析CKD患者25(OH)D水平的最重要的独立影响因素。

CRP、PTH、Alb及Hb水平变化与尿毒症周围神经病变程度的相关性

目的:探讨C反应蛋白(CRP)、甲状旁腺素(PTH)、血清白蛋白(Alb)及血红蛋白(Hb)水平变化与尿毒症周围神经病变程度的相关性。方法:选取我院2019年4月到2022年4月收治的340例需要进行维持性血液透析治疗的尿毒症患者作为研究对象,依照是否存在周围型神经病变的情况分为非神经病变组(n=132)和神经病变组(n=208)。对比两组患者的临床相关资料,CRP、PTH、Alb及Hb水平变化,其他血清指标变化,并分析CRP、PTH、Alb及Hb水平变化与尿毒症周围神经病变程度的相关性。结果:两组患者高血压患病人数对比无差异(P>0.05),两组患者的糖尿病患病人数、血液透析频率以及血液透析时间对比差异显著(P<0.05);神经病变组患者的CRP、PTH水平明显高于非神经病编组(P<0.05),神经病变组患者的Alb、Hb水平明显低于非神经病变组(P<0.05);两组患者血浆胆固醇(CHO)、红细胞(RBC)、三酰甘油(TG)、血肌酐(SCr)水平对比无显著差异(P>0.05),神经病变组患者血清前白蛋白(PA)、二氧化碳结合力(CO_(2)CP)水平低于非神经病变组,神经病变组患者血清BUN、FBG水平高于非神经病变组(P<0.05);Spearman相关分析结果显示:CRP、PTH与尿毒症周围神经病变程度呈正相关(P<0.05),Alb、Hb与尿毒症周围神经病变程度呈负相关(P<0.05)。结论:CRP、PTH、Alb及Hb水平变化与尿毒症周围神经病变程度具有明显关系,可以用于判断尿毒症患者的周围神经病变程度。而且尿毒症周围神经病变患者多数原发疾病为糖尿病,血液透析频率较低,维持血液透析时间较长。

全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性

目的在毕赤酵母中表达全长甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)(1-34)与人血清白蛋白(Human serumalbumn,HSA)的融合蛋白PTH(1-34)-HSA,并检测其活性。方法在质粒pPIC9K-PTH(1-34)2-HSA的基础上设计引物,引入6His标签及肠激酶酶切位点,从该质粒中扩增6His-EK-PTH(1-34)-HSA基因,插入pPIC9K载体中,构建重组表达质粒pPIC9K-6His-EK-PTH(1-34)-HSA,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达;表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白通过两步亲和层析纯化和肠激酶酶切,获得全长的PTH(1-34)-HSA融合蛋白;检测融合蛋白对UAMS-32P成骨细胞增殖活力、碱性磷酸酶活性以及RANKL和OPG基因转录水平的影响。结果重组表达质粒经测序证实构建正确;表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白相对分子质量约70 000,可与PTH抗体和HSA抗体特异性结合,发酵获得的融合蛋白的浓度为200 mg/L;纯化的融合蛋白可与抗PTH、HSA和6His标签抗体特异性结合,经肠激酶酶切后,该蛋白失去了与6His抗体反应的能力,保持了与PTH和HSA抗体结合的能力;酶切后的全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白保持了PTH的生物活性,能促进UAMS-32P成骨细胞的增殖活力,提高细胞的碱性磷酸酶的活性,上调细胞RANKL基因的转录水平以及抑制OPG基因的转录水平。结论成功在毕赤酵母中表达了全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白,有望提高PTH的成药性。

白蛋白修饰的人甲状旁腺激素的表达、纯化及活性鉴定

采用构建的含人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白(PTH-HSA)的酵母工程菌Pichiapastoris进行表达条件研究,发酵上清中PTH-HSA表达量为171mg/L。发酵液经超滤浓缩。