Determination of 10 Kinds of Inorganic Elements in Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.(and Polygerm Varieties)

[Objectives] To determine the content of 10 kinds of inorganic elements(Pb,Cu,As,Cd,Hg,Zn,Fe,Mn,Sr and Cr) in samples of Paris polyphylla Smith var. yunnanensis( Franch.) Hand.-Mazz.( and polygerm varieties) produced in different areas. [Methods] The wet digestion and technique of inductively coupled plasma optical emission spectrometry( ICP-OES) were used. [Results] Under the experimental conditions,elements were not related to each other,and several kinds of elements could be measured at the same time. The content of Pb exceeding the standard only in sample S4 of P. polyphylla Smith var. yunnanensis( and polygerm varieties),Hg was not detected in all samples,and the rest heavy metals did not exceed the limit. [Conclusions] This study was expected to provide a certain reference for the development and utilization of P. polyphylla Smith var. yunnanensis( and polygerm varieties).

Identification of Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.(Polygerm Varieties) Produced in Gaoligong Mountain Areas

[Objectives] To make original plant and microscopic identification and study the traits of Paris polyphylla Smith var. yunnanensis( Franch.) Hand.-Mazz.( polygerm varieties) produced in Gaoligong Mountain areas,and provide experimental data for their identification and application. [Methods] The original plant powder was used,and paraffin sections and physicochemical properties were identified. [Results]P. polyphylla Smith var. yunnanensis( polygerm varieties) produced in Gaoligong Mountain areas showed obvious microscopic features and physicochemical properties. [Conclusions] This study was expected to provide certain reference for identification of original plant and medicine and formulation of quality standard for P. polyphylla Smith var. yunnanensis( polygerm varieties) produced in Gaoligong Mountain areas,and provided basis for their further research and development.

滇重楼的化学成分研究

目的研究滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis根茎中的化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从醋酸乙酯层中分离得到了7个化合物,分别鉴定为豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、1-O-(β-D-葡萄糖基)-(2S,3S,4E,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基十六酰氨基]-4(E),8(E)-十八二烯-1,3-二醇(Ⅱ)、β-蜕皮激素(Ⅲ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ)。结论化合物Ⅱ为首次从该属植物中分离得到。

云南重楼种子萌发过程内源激素含量及酶活性变化研究

为探讨云南重楼种子萌发不同阶段的酶和内源激素的变化,本研究采用生理生化方法测定云南重楼种子萌发不同阶段超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、苹果酸脱氧酶(MDH)和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PDH)活性,以及吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA_3)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、反玉米素(TZ)、茉莉酸(JA)6种内源激素的含量,并分析比较其差异。结果表明,云南重楼种子在即将出苗阶段的SOD、POD活性迅速升高,CAT、MDH和G-6-PDH活性降低;IAA、GA_3含量均在即将出苗阶段显著高于其他阶段,种子休眠解除后ABA含量迅速下降。胚根刚突破种皮阶段,其SA、TZ、JA含量均最高,SOD、POD、IAA、GA_3间呈极显著正相关(P<0.01),MDH与G-6-PDH呈极显著正相关(P<0.01),ABA与GA_3呈显著负相关(P<0.05),SA、TZ、JA间呈极显著正相关(P<0.01),IAA/ABA、GA_3/ABA、SA/ABA在种子休眠解除和出苗阶段均呈上升趋势。综上,SOD、POD、GA_3是种子出苗阶段的关键物质,TZ、SA和JA对种子休眠解除具有重要的影响,IAA/ABA、GA_3/ABA及SA/ABA增大对种子休眠解除和出苗均有促进作用。本研究结果为云南重楼种子繁殖提供了理论依据和实践指导。

AM真菌对滇重楼根际土壤微生物数量及酶活性的影响

目的:研究接种AM真菌后滇重楼根际土壤微生物和酶活性的变化规律,为人工栽培滇重楼提供技术基础。方法:通过室温盆栽接种试验与室内分析相结合的方法,观察灭菌土壤条件下接种28种丛枝菌根(AM)真菌对滇重楼根际土壤微生物和土壤酶活性的影响。结果:滇重楼与AM真菌之间存在一定的相互选择性。AM真菌诱导处理后,不同AM真菌对滇重楼根际土壤微生物的数量、微生物生物量碳和土壤酶活性的影响有所差异,AM真菌的施用降低了滇重楼根际土壤中可培养真菌的数量,而对可培养细菌、放线菌数量呈现出增加的趋势,并提高了根际土壤微生物多样性指数、微生物生物量碳含量以及蛋白酶、脲酶、磷酸酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性。结论:滇重楼人工栽培中施用AM真菌能促使滇重楼根际微生物区系从低肥力的"真菌型"向高肥力的"细菌型"转化的趋势,提高根际土壤微生物多样性和酶活性,有助于维持滇重楼根际微生态系统的稳定性与和谐性,证明了田间人工栽培滇重楼施加AM菌剂的有效性及可能性。

滇重楼内生真菌的生物学性状及其甾体化合物含量

从滇重楼根状茎中分离到133株内生真菌,对其中的7株真菌进行了生物学性状观察和甾体化合物含量测定。结果表明,2号、8号和12号真菌能合成大量的甾体化合物,培养液中甾体化合物的产率分别为208.62,144.97和198.79 mg/L。

滇重楼不同部位氨基酸测定及营养评价

【目的】研究了滇重楼茎、叶、花和根茎的氨基酸组成、含量以及营养价值,为滇重楼资源的综合利用提供理论依据。【方法】滇重楼茎、叶、花和根茎的氨基酸测定采用日立L-8800氨基酸自动分析仪,营养评价采用氨基酸比值系数法。【结果】滇重楼茎、叶、花和根茎中均检测出17种常见氨基酸(色氨酸被水解破坏未检出),其氨基酸总量叶(13.96%)>花(10.92%)>茎(4.54%)>根茎(4.02%);滇重楼茎、叶、花和根茎中富含药效氨基酸,且均检出γ-氨基丁酸;滇重楼的茎、叶、花和根茎中均含有8种呈味氨基酸,其含量分别为2.86%、8.21%、6.18%、2.34%;滇重楼的茎、叶、花和根茎中必需氨基酸与总氨基酸的比值(E/T)分别为0.35、0.39、0.39、0.38,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(E/N)分别为0.53、0.65、0.65、0.61,氨基酸配比较为合理;滇重楼植株的必需氨基酸含量接近FAO/WHO推荐的标准模式谱,有较高的营养价值;滇重楼茎、叶、花和根茎中蛋氨酸+胱氨酸均为第一限制氨基酸,营养价值从高到低依次为根茎>叶>茎>花。【结论】滇重楼地上部分具有较高的营养价值和保健作用,可作为动物饲料对其进行开发利用。

鄂西北地区重楼药材中皂苷含量比较

目的分析鄂西北地区重楼药材中重楼皂苷的含量。方法收集鄂西北地区相同产区和不同产区的重楼药材样品,进行重楼皂苷的含量分析。结果不同产区、相同产区不同批次的样品中重楼皂苷含量差别较大。结论生长环境和年限都是影响重楼药材质量的重要因素;要实现中药现代化必须大力推进重楼人工种植,鄂西北地区具备推行重楼人工种植的地理条件。

滇重楼新品种选育研究进展

对滇重楼新品种选育研究现状,滇重楼新品种选育目标和方法进行了总结,分析了滇重楼育种中存在的问题,提出单株混合选择和集团混合选择是目前简单有效快速的滇重楼育种方法,加速滇重楼遗传变异规律的研究可提高育种效率,加速性状相关性及组织培养技术的研究。

滇重楼内生真菌抗菌活性的筛选和菌株鉴定

以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)为指示菌种,采用滤纸片法对分离自滇重楼〔Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.〕的10株内生真菌进行抗菌活性检测。结果发现,10株被测菌株的发酵物乙醇提取物中有3株无抗菌活性,另外7株均只对金黄色葡萄球菌有抑制作用。其中菌株YL0401发酵物乙醇提取物具有较高的抗菌活性,抑菌圈直径为30.7 mm,抑菌效果为72.7%。结合形态学特征和ITS-rDNA序列分析确定菌株YL0401为墙粘鞭霉(Gliomastix murorum)。

滇重楼茎秆软腐病病原鉴定

【目的】明确滇重楼茎秆软腐病的病原,以期为该病的防治提供依据。【方法】通过田间调查采样,初步掌握滇重楼茎秆软腐病的发生规律,通过稀释分离、柯赫氏法则验证获得病原菌,基于形态特征和16S r DNA、gyr B、rpo B基因序列特征对病原菌进行鉴定。【结果】从发病植株上分离出1株细菌,经柯赫氏法则验证为滇重楼茎秆软腐病病原菌,基于形态和分子生物学特征将其鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum。【结论】胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种P.carotovorum subsp.carotovorum是滇重楼茎秆软腐病的病原菌。

栽培滇重楼种子采收期研究

目的明确滇重楼种子适宜采收期,为滇重楼的科学采种提供参考。方法通过室内分析、发芽和播种试验,分别比较了两个滇重楼种植基地采收的橙色、红色和深红色外种皮种子的大小、千粒重、发芽率、成苗率及种苗农艺性状。结果深红色外种皮种子大小和千粒重的数据高于其它两种颜色外种皮种子;深红色外种皮种子的发芽率和成苗率明显高于其它两种颜色外种皮的种子,且差异有统计学意义;深红色外种皮种子繁殖种苗的主要农艺性状优于其它两种颜色外种皮种子的种苗。结论滇重楼种子的最适宜采收期为果实裂开后外种皮为深红色时。

水分胁迫下丛枝菌根真菌对滇重楼品质的初步影响

目的:研究水分胁迫下丛枝菌根(AM)真菌对滇重楼根茎品质及其根茎甾体皂苷类成分的影响。方法:采用盆栽实验,接种AM真菌,观察滇重楼根茎的品质和根茎中甾体皂苷的含量。结果:与对照组(CK)相比,水分胁迫下接种AM真菌对滇重楼根系的菌根侵染率无影响,但能增强菌根侵染强度和改善滇重楼根茎的品质,根茎中甾体皂苷组分的相对比例也有不同程度的改变。结论:水分胁迫下接种AM真菌,有利于提高滇重楼根系侵染强度、改善滇重楼根茎的品质,并影响滇重楼根茎甾体皂苷数量和主要组分的含量。

1株滇重楼内生真菌的研究——抑真菌活性及分离鉴定

目的分离滇重楼内生真菌,研究其抑制病原性真菌的作用并进行分类鉴定.方法从滇重楼植株中分离培养内生真菌.在体外,用指示菌株金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及白色念株菌进行抑菌活性筛选.对具有抑制白色念珠菌的内生真菌菌株进行培养,观察显微形态特征,确定其分类地位.结果从滇重楼的根中分离到一株内生真菌菌株,对白色念株菌有较强抑制作用,鉴定为无孢菌群.结论滇重楼内生真菌无孢菌群菌株LRF4具有抑制白色念珠菌的作用.

滇重楼内生真菌转化万古霉素的研究

目的利用滇重楼内生真菌生物转化万古霉素.方法分离滇重楼内生真菌并筛查它们的生物转化能力.鉴定具有转化能力的内生真菌.结果有2株内生真菌可以转化万古霉素.经鉴定为产黄青霉和Fusarium nematophilum.菌株G01和G03在添加万古霉素的液体培养基中培养6 d后,HPLC(High Performance Liquid Chromatography)分析发现,万古霉素的峰面积下降并有新吸收峰出现.结论内生真菌发酵产生了某些新成分.

不同处理对滇重楼种子萌发的影响

为研究不同浓度的赤霉素(GA3)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)和稀硫酸结合超声波处理对滇重楼种子萌发的影响。用不同浓度的试剂浸种滇重楼种子,采用托盘沙藏,并观察记录种子萌发率、胚根长度,筛选出促进滇重楼种子萌发的最适浸种试剂和浸种浓度。结果表明:50~600 mg/L的GA_3、0.2~0.4 mg/L的2,4-D、20 mg/L的NAA及10%的稀H_2SO_4均可促进滇重楼种子的萌发,4种试剂最佳浸种浓度对比中,500 mg/L的GA3浸种处理萌发率(82.36%)显著高于对照(40.45%),且胚根在90 d时最长的能达到5.08 cm。500 mg/L的GA_3对滇重楼种子的萌发和胚根生长具显著的促进作用,低于或高于500 mg/L的GA3促进作用则会相应的减小,而高于0.4 mg/L的2,4-D、20 mg/L的NAA及10%的稀H_2SO_4则对种子的萌发具有抑制作用。

滇重楼最佳授粉期的研究

[目的]优选滇重楼的最佳授粉期。[方法]采用TTC法测定花粉的活力,并采用联苯胺-过氧化氢法测定柱头可授性,根据研究滇重楼花粉活力变化规律及柱头可授性优选滇重楼的最佳授粉期。[结果]滇重楼花粉囊开裂时活力最高为68.2%,前2 d内,花粉活力下降不明显。第4天开始,活力明显下降,但仍然具有一定的活性。柱头的活性在花粉囊开裂后5 d内最强,滇重楼的授粉应选择在这5 d内进行。[结论]该研究优选了滇重楼的最佳授粉期,为滇重楼的进一步开发利用提供了依据。

滇重楼播种技术研究

大田条件下播种的滇重楼种子出苗率低、出苗时间长和出苗不整齐,是滇重楼生产的瓶颈。本研究比较了直接播种、催芽播种、播种基质、播种深度、土壤水分等播种技术对滇重楼出苗率、出苗整齐度的影响。直接播种:以0.8 cm^2≤S(种子投影面积)<1 cm^2出苗率最高,依次为S≥1 cm^2,0.65 cm2≤S<0.8 cm^2,0.5 cm2≤S<0.65 cm^2,S<0.5 cm^2的种子不出苗;播种基质为土-沙组合出苗时间较腐叶土基质提前13个月,播后18个月出苗率搞出了26.33%。催芽播种胚根长度越长其出苗率相对较高,当胚根长度是种子直径4倍及以上(L≥2 cm)时出苗率、出苗最整齐。直接播种和催芽播种对土壤水分和播种深度要求基本一致。直接播种时,应优选种子;催芽播种,应在胚根长度L≥2 cm时播种。播种深度0-2 cm适宜,一般不宜超过4 cm,苗床土壤应保持潮湿。

接种菌根真菌滇重楼幼苗光合作用的光响应曲线

目的:研究滇重楼幼苗光合作用-光响应特性,筛选滇重楼生长发育适宜的AM真菌,为人工栽培和引种驯化提供理论基础和技术支持。方法:采用盆栽培养试验与室内分析相结合的方法,以长势一致的1年生滇重楼幼苗为试验材料,以不接种为对照组(CK组),观察了6种丛枝菌根(AM)真菌易误巨孢囊霉Gigaspora decipiens、巨大巨孢囊霉Gigaspora gigantea、双紫盾巨孢囊霉Scutellospora dipurpurascens、亮色盾巨孢囊霉Racocetra fulgida、沙荒球囊霉Septoglomus deserticola、细凹无梗囊霉Acaulospora scrobiculata对滇重楼幼苗光合生理特性的影响。结果:滇重楼能迅速与AM真菌相互识别,形成了良好的共生关系。接种和未接种AM真菌滇重楼幼苗的净光合速率(P_n)、蒸腾效率(T_r)、气孔导度(G_s)、气孔限制值(L_s)均随着光合有效辐射(PAR)增强而逐渐增大,而胞间CO_2浓度(C_i)均随着PAR的增强和P_n的增大而减少。与对照组(CK组)相比,AM真菌诱导处理后,对滇重楼幼苗植株的生长发育影响不大,但不同AM真菌对滇重楼幼苗叶片的光合生理的影响有所差异。总体来说,AM真菌侵入滇重楼幼苗根系形成共生体后,能够不同程度地提高了最大净光合速率(P_(nmax))和光饱和点(LSP),并降低了暗呼吸速率(Rd)和光补偿点(LCP),从而增强滇重楼幼苗对光环境的适应能力,提高其光合作用的能力,有利于植株的生长。结论:6种AM真菌对滇重楼幼苗的共生偏好性不同。综合考虑滇重楼幼苗生长、光合色素含量和光合特性,本试验条件下,双紫盾巨孢囊霉Scutellospora dipurpurascens、沙荒球囊霉Septoglomus deserticola等是培育滇重楼菌根苗优良备选菌株。

改良CTAB法提取重楼属3种药用植物干燥根茎DNA

目的:本研究采用改良CTAB法提取重楼属3种植物的DNA,分析了CTAB浓度对其DNA得率以及醋酸钾(KAc)或KAc+20%乙醇对其DNA纯度的影响,为重楼属植物药材的分子标记鉴定研究提供技术和理论依据。方法:采用基于CTAB的6种方法提取重楼属3种植物干燥根茎的DNA,并用紫外分光光度法测定A260和A280的值计算评价DNA得率和纯度。结果:4%CTAB提取3种重楼的DNA得率均高于2%CTAB;添加KAc的方法 2(2%CTAB)、方法 5(4%CTAB)以及添加KAc+20%乙醇的方法 3(2%CTAB)和方法 6(4%CTAB)提取的DNA纯度和质量以及通用引物ITS2F/ITS2R的PCR扩增结果均优于不添加KAc或KAc+20%乙醇的方法 1和方法 4。结论:本研究表明4%CTAB有利于重楼属3种植物干燥根茎DNA得率的提高,在DNA沉淀之前添加KAc或KAc+20%乙醇有利于改善DNA纯度和质量。