2型糖尿病病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1、Parkin蛋白、视神经蛋白表达与肾损伤程度的关系研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)、Parkin蛋白、视神经蛋白(OPTN)表达及与肾损伤程度关系。方法选取2019年5月至2021年5月河南科技大学第一附属医院156例T2DM病人,根据糖尿病肾病(DN)诊断分期标准,分为非DN组92例、早期DN组(EDN组)38例、临床期DN组(CDN组)26例,另以同期60例健康体检者为健康组。比较四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量(荧光定量PCR法);采用Pearson相关分析法探究PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量与糖脂代谢空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肾功能指标血尿素氮、血肌酐、预估肾小球滤过率(eGFR)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、24 h尿蛋白排泄率(UAER)相关性,采用多因素logistic回归分析探究DN发生影响因素,绘制ROC曲线分析PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN诊断价值。结果CDN组、EDN组、非DN组、健康组外周血PINK1 mRNA表达量分别为0.31±0.17、0.44±0.20、0.69±0.35、0.73±0.34,Parkin蛋白mRNA分别为0.51±0.12、0.62±0.18、0.79±0.28、0.98±0.35,OPTNmRNA分别为0.05±0.01、0.10±0.03、0.14±0.05、0.18±0.07,四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量差异有统计学意义(P<0.05),均表现为CDN组<EDN组<非DN组<健康组。T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白表达量均与空腹血糖、HbA1c、血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05);OPTN与血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。糖尿病病程、HbA1c、UACR、UAER是DN的独立危险因素(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白、OPTN为其保护因素(P<0.05)。外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.709、0.754、0.839。结论T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量均下调,且随着病人肾损伤程度增加而降低,检测外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN有一定诊断价值。

Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备

目的 :构建Parkin基因 3’端的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法 :构建Parkin基因3’端 (937～ 195 9bp)的谷氨酰胺硫转移酶 (glutathion sulfate transferase ,GST)融合表达质粒 ,在JM 10 5中获得表达。用Triton 10 0 (1% )和Tween 2 0 (1% )处理 ,并用亲和层析纯化表达产物 ,将其免疫新西兰兔 ,用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果 :构建的ParkinC表达质粒在JM 10 5中获得表达 ,以分子量为 4 2kD的包涵体存在 ;目的蛋白纯度为 95 % ;得到效价为 1∶6 4的抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中 5 1 6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论 :Parkin蛋白C端在 JM 10 5

Parkin蛋白与帕金森病

分子遗传学研究证明 parkin基因是常染色体隐性遗传性少年型帕金森综合征 (AR JP)的致病基因 ,其表达产物parkin蛋白具有E3泛素 蛋白连接酶活性。Parkin蛋白可能在维持多巴胺能神经元的正常功能中发挥重要作用 ,而parkin蛋白功能障碍可能与帕金森病的发病有关。目前已经鉴定了几种 parkin蛋白的底物蛋白 ,使我们能够初步了解帕金森病发病的分子和细胞学机理 ,这对于我们最终搞清帕金森病的发病机制、开发相应的治疗药物具有极其重要的意义。本文综述了parkin蛋白最新研究进展。

Parkin蛋白对帕金森细胞模型中α-突触核蛋白表达的抑制作用及机制

目的探讨Parkin蛋白在6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森细胞模型中的作用及机制,构建Parkin过表达PC12稳转细胞株。方法通过CCK8法确定6-OHDA对细胞半致死造模浓度;运用qPCR和Westernblot检测细胞株中Parkin mRNA和蛋白水平;在Parkin过表达PC12细胞株和PC12细胞中加入6-OHDA处理24 h,采用CCK8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测线粒体的膜电位水平和细胞活性氧(ROS)水平变化,qPCR和Westernblot检测各组细胞内促凋亡基因Bax、帕金森相关基因α突触核蛋白(α-synuclein)的表达水平。结果6-OHDA的造模浓度为50μmol/L;构建Parkin过表达细胞株;相对于PC12+6-OHDA组,用50μmol/L浓度6-OHDA处理Parkin过表达PC12细胞株,线粒体膜电位水平有显著升高的趋势(P<0.05),ROS水平显著升高(P<0.05),细胞内Bax和α-synuclein的蛋白表达水平明显减少(P<0.01)。结论Parkin蛋白在6-OHDA诱导的帕金森细胞模型中具有保护作用,其机制可能与Parkin蛋白通过抑制线粒体凋亡通路和降低α-synuclein蛋白表达相关。

Parkin与α-酮戊二酸载体蛋白(OGCP)的相互作用研究

Parkin基因是帕金森病的致病基因之一,Parkin蛋白作为泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)的一种E3酶,介导了多种底物的泛素化过程,而后者与帕金森病的发病机制有着密切的联系.α-酮戊二酸载体蛋白(2-oxoglutarate carrier protein,OGCP)是一种线粒体内膜蛋白.采用激光共聚焦技术和免疫共沉淀技术证实,在HEK293细胞中Parkin蛋白与OGCP共定位,且二者之间存在相互作用关系;通过体内、外泛素化实验发现Parkin蛋白能介导OGCP的泛素化.提示OGCP可能是Parkin蛋白的泛素化底物蛋白,且Parkin蛋白能促进OGCP的泛素化.

Parkin蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨Parkin蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法2012—2015年应用免疫组织化学方法检测50例结直肠癌患者的癌旁正常组织和癌组织Parkin蛋白的表达情况,分析临床病理特征与Parkin蛋白表达的关系。结果癌组织Parkin蛋白阳性表达率明显低于癌旁正常组织[36%(18/50)比72%(36/50)],差异有统计学意义(P<0.01)。Parkin蛋白阳性表达与组织分化程度有关(P<0.01);而与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤类型、肿瘤浸润程度、淋巴结转移及临床分期无关(P>0.05)。结论结直肠癌组织中存在着抑癌基因Parkin的表达缺失和减弱,抑癌基因Parkin的表达异常可能与结直肠癌发生和发展有关。

稳定表达GFP-Parkin融合蛋白的SH-SY5Y细胞系的建立和功能初探

目的:建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系,并检测Parkin对MPP^+引起的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法:将Parkin编码序列克隆到载体pEGFP-C1中,构建重组质粒pEGFP-Parkin,转染SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系;荧光显微镜和Western印迹鉴定Parkin表达,MTT法检测Parkin对MPP^+致细胞损伤的保护作用。结果:酶切鉴定及测序结果表明重组质粒pEGFP-Parkin构建正确;荧光显微镜下可见细胞内有GFP-Parkin的融合表达,Western印迹检测发现相对分子质量79×103的蛋白条带;MTT结果显示Parkin能够减弱MPP^+对SH-SY5Y细胞的损伤,与对照组相比,存活率高约15%,差异显著(P<0.05)。结论:构建了稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系,为进一步研究Parkin的细胞保护作用和其他功能机制奠定了基础。

复方蒲黄汤对缺血性脑损伤小鼠脑组织中Parkin、Cyclin E蛋白的影响

目的通过观察缺血性脑损伤小鼠脑组织中Parkin、细胞周期素E（Cyclin E）蛋白在用药前后的表达变化,探讨复方蒲黄汤对缺血性脑病的神经保护机制及Parkin蛋白与缺血性脑病的关系。方法 48只雄性C57小鼠随机分成对照组、模型组、药物组,每组各16只。药物组用复方蒲黄汤干预缺血性脑损伤小鼠模型,等量生理盐水灌注胃模型组和对照组小鼠。分别于损伤后0、6、12、24 h断头取脑,免疫组化检测Parkin、Cyclin E的含量。结果模型组Parkin的表达较高,12 h后达到高峰,12~24 h下降,但总体高于对照组（P〈0.05）;药物组Parkin整体表达变化类同模型组,但各亚组表达量均低于模型组（P〈0.05）,且24 h处下降趋势明显缓于模型组。模型组与药物组Cyclin E的表达都较高,其中12 h处模型组依旧上升,而药物组开始下降,模型组与对照组差异显著（P〈0.05）;模型组与药物组在0、24 h时差异有统计学意义（P〈0.05）,6、12 h时差异无统计学意义（P〉0.05）。结论复方蒲黄汤可能通过诱导Parkin过表达及抑制Cyclin E表达,达到对缺血性脑病神经元损伤的早期防护。

Parkin蛋白与人类疾病的关系及其天然产物调节作用

Parkin蛋白是一种E3泛素连接酶,在机体不同部位均有表达,结构多样。研究发现,Parkin蛋白功能障碍主要引起线粒体自噬异常,与人类诸多疾病发生、发展密切相关。目前尽管尚缺乏Parkin配体,但已有研究报道天然产物可通过调节Parkin蛋白功能而缓解疾病,且具有副作用小、疗效稳定、多途径作用、作用温和持久等优势。该文对Parkin蛋白结构功能,与人类疾病的关系及天然产物对Parkin的调节作用进行简要综述,提出当前研究存在的一些问题,并对未来研究方向进行展望。

基于PINK1/parkin信号转导通路研究灵芝孢子对糖尿病心肌损伤的保护作用

目的探讨灵芝孢子对糖尿病(DM)大鼠心肌损伤的保护作用及对PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(parkin)信号通路的作用机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分成对照(NC)组、高脂高糖饮食(HFD)组、DM组和灵芝孢子(GLS)组各10只。12 w末,记录各组末次体质量及空腹血糖。麻醉处死大鼠后,采集心脏组织,计算心脏指数,并检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。苏木素-伊红染色(HE)和马松(Masson)染色观察心脏病理学变化。Western印迹检测PINK1/parkin通路蛋白、自噬相关蛋白及凋亡相关蛋白,免疫组织化学技术验证PINK1、parkin的表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色评估细胞凋亡情况。结果与NC组相比,HFD组体质量明显增加,DM组体质量明显减轻,血糖水平明显升高(P<0.05);HFD组和DM组心脏指数、MDA含量、PINK1、parkin、p-parkin、微管相关蛋白轻链(LC)3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2同源结构域蛋白抗体(beclin)1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)/Bcl-2蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率及血管周围胶原含量明显增加,SOD活性、p62蛋白表达水平显著下降(均P<0.05)。与DM组相比,HFD组和GLS组体质量、SOD活性、p62蛋白表达水平明显增加,血糖水平、心脏指数、MDA含量、PINK1、parkin、p-parkin、LC3、beclin1、Bax/Bcl-2蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、血管周围胶原含量明显降低(均P<0.05)。结论灵芝孢子可减轻DM大鼠心肌损伤,改善纤维化程度,具有良好的抗氧化活性,可逆转心肌细胞过度自噬,抑制细胞凋亡,其保护作用可能与下调PINK1/parkin信号通路有关。

肝细胞癌中Lumican和Parkin的表达及意义

目的探讨肝细胞癌组织中Lumican蛋白及Parkin蛋白的表达及意义,并分析两者的相关性。方法应用免疫组织化学S-P法检测62例肝癌患者癌组织及62例癌旁组织中Lumican及Parkin蛋白的表达并分析其与临床病理因素之间的关系。结果 (1)肝癌组织中Lumican、Parkin的阳性表达率分别为35.5%、32.3%,与癌旁组织的阳性表达率比较(66.1%、72.6%),差异具有统计学意义(P<0.05);(2)Lumican蛋白的表达与Edmondson分级及是否伴有门静脉癌栓相关(P<0.05),而与性别、肿瘤大小、HBsAg、肝硬化和AFP无关(P>0.05);(3)Parkin蛋白的表达与患者肝癌Edmondson分级、AFP水平、是否伴有门静脉癌栓相关(P<0.05),而与性别、肿瘤大小、HBsAg和肝硬化无关(P>0.05);(4)Lumican与Parkin呈正相关(r=0.450;P<0.05)。结论 Lumican与Parkin蛋白在肝细胞癌组织中表达率均较低,可能与肝癌的发生、发展有关,联合检测两者对肝癌的诊断和预后有着重要意义,有望成为肝癌治疗的新靶点。

芍药苷对PINK1-Parkin介导的线粒体自噬在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的影响

目的观察芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤中线粒体自噬的影响,探讨其相关作用机制。方法采用250μmol/L H2O2诱导SH-SY5Y细胞24 h构建细胞损伤模型。实验细胞分为空白组、模型组和芍药苷低、中、高剂量组。采用MTT法检测细胞存活率,JC-1线粒体膜电位荧光探针检测线粒体膜电位,TUNEL染色检测细胞凋亡率,Western blot检测PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和p62蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组细胞存活率下降,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率上升,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达升高,Parkin蛋白表达无明显变化;与模型组比较,芍药苷低、中、高剂量组细胞线粒体膜电位上调,细胞凋亡率下降,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达降低,Parkin蛋白表达升高。结论芍药苷可显著降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能与调控PINK1-Parkin介导的线粒体自噬途径相关。

高血压脑出血患者术后外周血SIRT1、PINK1、Parkin表达及与预后的关系

目的探讨高血压脑出血(HICH)患者术后外周血沉默信息调节因子1(SIRT1)、PTEN诱导激酶1(PINK1)、Parkin蛋白表达及其与预后的关系。方法回顾性分析2018年6月至2021年6月在本院诊治的102例HICH患者,根据术后格拉斯哥昏迷评分(GCS)情况分为预后良好(GOS≥7分)组(n=73)和不良(GOS<7)组(n=29)。采用Western Blot法测定两组HICH患者术后外周血单核细胞SIRT1、PINK1、Parkin蛋白表达,采用Pearson相关性分析其与GCS评分的相关性,采用受试者工作(ROC)曲线分析其与预后的关系。结果不良组患者外周血PINK1蛋白水平明显高于良好组,SIRT1、Parkin蛋白水平明显低于良好组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后GCS评分与外周血PINK1蛋白表达呈负相关(r=-0.683,P<0.001),与SIRT1、Parkin蛋白表达呈正相关(r=0.753、0.819,P<0.001);以外周血SIRT1、PINK1、Parkin蛋白单独检测和联合检测作为检验变量,是否发生不良预后作为状态变量进行ROC曲线分析,曲线下面积AUC分别为0.757、0.769、0.767、0.856(P<0.05)。结论HICH患者术后外周血SIRT1、PINK1、Parkin蛋白表达对不良预后有较好的预测价值,SIRT1和Parkin蛋白表达越低、PINK1蛋白表达越高,GCS评分越低,预后不良发生率越高。

PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在异烟肼诱导的肝细胞损伤中的作用

目的:结核病患者长期大剂量联合使用抗结核药物会引起肝损伤等不良反应,但引起损伤的机制尚不明确。尽管同源性磷酸酶及张力蛋白诱导激酶1(phosphatase and tensin homolog induced kinase 1,PINK1)/Parkin信号轴可能通过调控线粒体自噬和肝细胞内氧化应激水平而参与肝损伤过程,但目前尚不清楚药物致肝损伤与该信号轴调控的线粒体自噬机制间的相关性。本研究旨在探究PINK1/Parkin信号轴是否可通过调控线粒体自噬改善抗结核药物用药过程中出现的肝细胞损伤,从而为临床结核病患者使用抗结核药物治疗过程导致的肝损伤提供潜在的药物治疗靶点。方法:使用异烟肼(isoniazide,INH)处理小鼠肝实质细胞AML-12以模拟肝损伤状态,分别采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测正常AML-12细胞(对照组)、INH刺激的肝损伤模型(模型组)及INH和PINK1激动剂红景天甙共同刺激下的AML-12细胞(干预组)中PINK1、Parkin以及自噬相关分子的表达水平。利用ELISA试剂盒检测肝细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用HE染色及透射电镜技术观察细胞的肝细胞形态结构。结果:与对照组比较,模型组中PINK1、Parkin和微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)的mRNA表达水平(P<0.01)以及蛋白质水平(P<0.05)均显著下降,同时泛素化蛋白水平显著下调(P<0.05),ROS水平升高(P<0.05),细胞损伤明显。与模型组相比,干预组中使用红景天甙后PINK1、Parkin和自噬相关分子LC3的mRNA及蛋白质水平均显著升高(均P<0.05),泛素化蛋白水平亦显著升高(P<0.05),同时线粒体介导的ROS水平下降(P<0.05),肝细胞损伤状态明显减轻。结论:本研究利用体外细胞实验证明了PINK1/Parkin信号轴介导的线粒体自噬机制可能与异烟肼所致肝细胞的损伤相关,并能调控损伤状态,提示Parkin是一个潜在的药物致肝损伤预测及诊疗的分子靶点。

基于PINK1/Parkin通路探讨灵芝孢子对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的基于PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路研究灵芝孢子对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的肾脏细胞凋亡的影响。方法32只SPF级雄性SD大鼠(180~200 g),随机分成正常对照(NC)组、高脂高糖(HF)组、DN模型(DN)组和灵芝孢子(GLSP)组。除NC组外,其余各组均采用高脂、高糖饲养,同时DN组和GLSP组均联合腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)。GLSP组每日灌胃给予灵芝孢子〔300 mg/(kg•d)〕持续3个月,其余组均灌胃给予等量生理盐水〔10 ml/(kg•d)〕。每周测定各组空腹血糖。12 w后评估肾脏功能,用试剂盒检测尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白等生化指标。苏木素-伊红(HE)、过碘酸希未反应(PAS)和Masson染色用于检查肾脏病理学。通过TUNEL法观察大鼠肾脏组织凋亡细胞的分布及凋亡率情况。通过免疫组化检测肾脏组织中P62、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。Western印迹检测PINK1/Parkin通路涉及的关键蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链(LC)3、P62、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved)-Caspase3、Bax、Bcl-2表达水平。结果与NC组相比,DN组尿中出现大量尿蛋白,血清肌酐及尿素氮水平明显升高(P<0.01),肾小体直径增大、肾小囊腔变小、肾小球内细胞数增多并有糖原累积、肾小球内含有大量的胶原纤维,肾组织中PINK1、Parkin、LC3的蛋白表达显著降低、P62表达显著升高,凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显升高,Bcl-2/Bax表达明显降低(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显增加(P<0.01)。与DN组相比,GLSP组肾脏滤过功能明显改善(P<0.01),肾脏病理损伤缓解,肾小球体积有明显减小、肾组织胶原纤维覆盖面积明显降低、糖原明显减少;肾组织中PINK1、Parkin表达明显升高、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显增加,P62表达明显下降,且凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显下降,Bcl-2/Bax表达明显升高(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显降低(P<0.01)。结论灵芝孢子可能调控PINK1/Parkin途径,激活肾脏细胞自噬有关,抑制重要的促凋亡蛋白的表达,减轻高糖水平对肾脏的损害,抑制细胞凋亡。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PINK1)、Parkin的影响。方法:将48只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组(化浊解毒活血通络方)、抑制剂组[3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制剂],每组12只。按照Longa法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,造模成功给药3 d后,行大鼠神经功能缺损评分,HE染色观察脑组织病理改变,TTC染色观察脑梗死体积,Western Blot检测脑组织PINK1、Parkin蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测脑组织中PINK1、Parkin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著减少(P<0.05),病理损伤减轻,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组及中药组比较,抑制剂组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达相关。

自噬蛋白Parkin和P62在结直肠癌中的表达

目的观察自噬蛋白Parkin和P62在人结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法收集2012年至2015年武汉大学中南医院手术切除的50例结直肠癌标本及50例癌旁正常结肠组织,用免疫组化SP法检测标本中Parkin蛋白和P62蛋白的表达,分析其表达差异及与临床病理特征之间的关系。结果免疫组化法检测Parkin蛋白和P62蛋白均主要表达于细胞浆。Parkin蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为36.0%,在癌旁正常组织中的阳性表达率为72.0%,差异有统计学意义(χ^2=13.043,P=0.000)。P62蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为70.0%,在癌旁正常组织中的阳性表达率为42.0%,差异有统计学意义(χ^2=7.955,P=0.005)。Parkin蛋白在组织高分化中阳性表达率高于低分化(P<0.05);P62蛋白在临床分期Ⅲ/Ⅳ期中阳性表达率高于Ⅰ/Ⅱ期(P<0.05)。Spearman相关分析显示,P62蛋白的表达与Parkin蛋白的表达无相关性(r=0.09,P>0.05)。结论肿瘤细胞自噬活性的提高可能参与人结直肠癌的发展,Parkin蛋白和P62蛋白表达可能是肿瘤细胞发生、进展的潜在标志物。临床病理检测Parkin蛋白和P62蛋白的表达,对判断患者预后及结直肠癌分子靶向治疗有潜在的临床意义。

miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠疼痛缓解的机制

目的探究miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛缓解机制。方法选取48只健康SPF级SD大鼠,分别将48只大鼠分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各12只,模型组、过表达组、沉默组构建带状疱疹后遗神经痛模型,做miR-339-5p慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-339-5p基因表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠5-羟色胺(HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α,采用电子测痛仪进行测定机械痛阈,采用Western印迹检测大鼠同源性磷酸张力蛋白诱导激酶1/帕金森蛋白(PINK1/Parkin)信号通路基因表达量。结果与模型组相比,过表达组miR-339-5p基因表达量、不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF、PINK1/Parkin信号通路表达量明显升高(P<0.05)。与模型组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。结论miR-339-5p过表达基因通过作用于PINK1/Parkin信号通路,调控PINK1、Parkin表达量,显著减轻了带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛程度。

针刺对运动性骨骼肌损伤大鼠骨骼肌线粒体自噬的影响

目的:通过观察针刺对大负荷运动大鼠骨骼肌线粒体自噬相关蛋白表达的影响,探讨针刺在运动性骨骼肌损伤修复中的作用及其机制。方法:将128只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组:空白对照(control,C;n=8)组、单纯运动(exercise,E;n=40)组、单纯针刺(acupuncture,A;n=40)组和运动针刺(exercise and acupuncture,EA;n=40)组。其中,E和EA组进行1次下坡跑运动,A组和EA组(运动后即刻)施加针刺处理。后3组根据干预后不同时相又分为0 h、12 h、24 h、48 h和72 h亚组(n=8),分别于对应时点分离比目鱼肌进行检测,使用透射电子显微镜观察骨骼肌线粒体超微结构变化;采用ELISA法检测比目鱼肌线粒体定量酶柠檬酸合成酶(CS)的含量变化;应用Western blot法检测骨骼肌PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、parkin和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达变化。结果:1次大负荷运动后大鼠比目鱼肌线粒体出现明显肿胀和肌膜下积聚等超微结构异常变化,伴有大量自噬体形成;同时CS的含量明显减少(P<0.05);线粒体自噬蛋白PINK1、parkin和LC3均出现一过性的表达升高(P<0.05)。运动后针刺明显改善了线粒体超微结构的异常变化,减少自噬溶酶体的出现,同时抑制CS的含量减少,下调PINK1、parkin和LC3在线粒体上的表达(P<0.05)。结论:1次大负荷运动后骨骼肌线粒体结构和数量受损,通过激活PINK1/parkin途径诱发线粒体自噬的过度发生。大负荷运动后针刺可以缓解骨骼肌线粒体的损伤,其作用机制可能是通过下调线粒体外膜蛋白PINK1表达,抑制其对下游胞浆蛋白parkin的招募,进而影响LC3与线粒体的结合以抑制线粒体自噬过度激活。

肉桂醛通过PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬促进糖尿病大鼠创面愈合机制

目的:采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链尿佐菌素(STZ)及手术制备全层皮肤缺损的方法制备糖尿病大鼠创面模型,观察肉桂醛对糖尿病大鼠创面愈合情况的影响,并基于PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)信号通路介导的线粒体自噬探讨肉桂醛对糖尿病大鼠创面的治疗机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白组12只,糖尿病组36只,糖尿病组随机分为模型组、肉桂醛组和贝复新组,每组12只,空白组与模型组创面常规消毒后予生理盐水,肉桂醛组创面局部外敷含4μmol·L^(-1)肉桂醛的聚乙二醇400(PEG 400)凝胶,贝复新组创面外敷贝复新凝胶,每日换药1次。观察各组创面愈合率,取干预后7、14 d大鼠创面组织,苏木素-伊红(HE)染色观察局部组织病理变化,免疫组化(IHC)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、胶原纤维的表达情况,免疫荧光(IF)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白和mRNA的表达情况。结果:腹腔注射STZ后,与空白组比较,糖尿病组大鼠随机血糖值显著升高(P<0.01),均高于16.7 mmol·L^(-1),且在造模后一段时间持续保持高血糖状态。与空白组比较,模型组大鼠创面肉芽组织生长、愈合情况较差,创面愈合率显著降低(P<0.01);干预后7 d,空白组创面已有鳞状上皮覆盖,与空白组比较,模型组大鼠创面仅创缘少量结痂,创面中大量炎细胞浸润,组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著上升(P<0.01),PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低(P<0.01);干预后14 d,空白组创面肉芽组织成熟,愈合良好,与空白组比较,模型组创面炎细胞浸润和红细胞渗出尚未完全消退,组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,肉桂醛组和贝复新组大鼠创面愈合情况较好,创面愈合率显著升高(P<0.01),干预后7 d组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PINK1、Parkin及LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高(P<0.01),干预后14 d组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著上升(P<0.01),PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低(P<0.01)。结论:肉桂醛能促进糖尿病创面愈合,上调创面愈合率,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,增加VEGF、胶原纤维蛋白的水平,其机制可能是通过调节PINK1/Parkin信号通路表达,激活线粒体自噬,抑制炎症反应,增加血管新生和胶原合成,从而达到促进糖尿病大鼠创面愈合的目的。