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非洲爪蟾PAPC多克隆抗体的制备及其特异性鉴定(英文)
被引量:
2
1
作者
胡锐颖
徐鹏
+2 位作者
陈跃磊
娄鑫
丁小燕
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期222-228,共7页
非洲爪蟾ParaxialProtocadherin(PAPC)是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白.它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成,以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用.为了研究PAPC基因在早期...
非洲爪蟾ParaxialProtocadherin(PAPC)是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白.它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成,以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用.为了研究PAPC基因在早期胚胎发育过程中的表达及其生物学功能,需要制备PAPC抗体.应用谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneStransferase,GST)表达系统表达GST-PAPC融合蛋白,亲和纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得PAPC多克隆抗体.免疫印迹分析发现,以1∶3000稀释的该多克隆抗体为一抗时,能够在转染了全长PAPC质粒的HEK293T细胞的蛋白质抽提物中,特异地识别出150ku的印迹条带.同时,GST-PAPC融合蛋白可以竞争性抑制该抗体对全长PAPC质粒转染细胞的蛋白质抽提物的特异性条带.用1∶500稀释的该抗体为一抗进行免疫荧光分析时,发现,PAPC多克隆抗体能够识别在HEK293T细胞中过表达以及爪蟾动物极细胞中过表达的PAPC蛋白,荧光信号定位在细胞膜上.免疫印迹分析证明,PAPC抗体能够识别爪蟾胚胎中内源表达的PAPC蛋白.
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关键词
非洲爪蟾
pasaxial
Protocadhefin(PAPC)
原核表达
多克隆抗体
免疫印迹
免疫荧光
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职称材料
题名
非洲爪蟾PAPC多克隆抗体的制备及其特异性鉴定(英文)
被引量:
2
1
作者
胡锐颖
徐鹏
陈跃磊
娄鑫
丁小燕
机构
中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院分子细胞生物学重点实验室中国科学院研究生院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期222-228,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(30500276)~~
文摘
非洲爪蟾ParaxialProtocadherin(PAPC)是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白.它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成,以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用.为了研究PAPC基因在早期胚胎发育过程中的表达及其生物学功能,需要制备PAPC抗体.应用谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneStransferase,GST)表达系统表达GST-PAPC融合蛋白,亲和纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得PAPC多克隆抗体.免疫印迹分析发现,以1∶3000稀释的该多克隆抗体为一抗时,能够在转染了全长PAPC质粒的HEK293T细胞的蛋白质抽提物中,特异地识别出150ku的印迹条带.同时,GST-PAPC融合蛋白可以竞争性抑制该抗体对全长PAPC质粒转染细胞的蛋白质抽提物的特异性条带.用1∶500稀释的该抗体为一抗进行免疫荧光分析时,发现,PAPC多克隆抗体能够识别在HEK293T细胞中过表达以及爪蟾动物极细胞中过表达的PAPC蛋白,荧光信号定位在细胞膜上.免疫印迹分析证明,PAPC抗体能够识别爪蟾胚胎中内源表达的PAPC蛋白.
关键词
非洲爪蟾
pasaxial
Protocadhefin(PAPC)
原核表达
多克隆抗体
免疫印迹
免疫荧光
Keywords
Xenopus laevis, Paraxial Protocadherin (PAPC), prokaryotic expression, polyclonal antibody, Western blotting,immunofluorescent staining
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
非洲爪蟾PAPC多克隆抗体的制备及其特异性鉴定(英文)
胡锐颖
徐鹏
陈跃磊
娄鑫
丁小燕
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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