参芪扶正注射液对胰腺癌多药耐药逆转作用研究

目的探讨参芪扶正注射液(SQFZ)对胰腺癌多药耐药的逆转作用及初步分子机制。方法以胰腺癌细胞株Patu8988为研究对象,采用氟尿嘧啶(5-Fu)诱导得到Patu8988/5-Fu耐药细胞株;采用四甲偶氮唑蓝(MTT)法测定Patu8988/5-Fu耐药倍数、SQFZ的细胞增殖抑制作用以及SQFZ对Patu8988/5-Fu耐药细胞株的逆转倍数;采用流式细胞分析技术(FCM)测定SQFZ对细胞内罗丹明123(Rho123)蓄积的影响;采用实时定量PCR技术检测SQFZ对耐药细胞株MDR1、Bcl-2和Bax基因表达的调控作用;采用蛋白质免疫印迹(Western Blot)技术检测SQFZ对耐药细胞株Bcl-2、Bax和P-gp蛋白表达情况影响。结果浓度为5、10和20μL·m L^(-1)的SQFZ可逆转Patu8988/5-Fu细胞的耐药性,逆转倍数依次为1.5、2.3和3.4倍。SQFZ剂量依赖性地增加Patu8988/5-Fu细胞的Rho123蓄积量(r=0.979,P<0.05)。分子机制研究表明,SQFZ下调Patu8988/5-Fu细胞MDR1和Bcl-2的基因表达,上调Bax基因表达。SQFZ可使Patu8988/5-Fu细胞中P-gp和Bcl-2的蛋白表达水平下降,使Bax蛋白表达水平上升。结论 SQFZ具有逆转Patu8988/5-Fu细胞多药耐药的作用,其作用机制可能与MDRl、Bcl-2和Bax基因的转录及蛋白表达有关。

参芪扶正注射液通过调控miR-29b/Bcl-2通路逆转胰腺癌多药耐药研究

目的研究参芪扶正注射液对微小RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)和B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)表达的影响,探究参芪扶正注射液逆转胰腺癌多药耐药的可能机制。方法将miR-29b模拟物(miR-29b mimics)和miR-29b抑制剂(miR-29binhibitors)转染至人胰腺癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)耐药细胞株Patu8988/5-Fu,采用qRT-PCR检测参芪扶正注射液(5、10、20μL/mL)对Patu8988/5-Fu细胞miR-29bm RNA表达的影响;采用MTT法检测miR-29bmimics和miR-29binhibitors对Patu8988细胞活力的影响;采用Westernblotting法检测miR-29bmimics和miR-29b inhibitors对Patu8988/5-Fu细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果与对照组比较,参芪扶正注射液组Patu8988/5-Fu细胞中miR-29b m RNA表达水平显著升高(P<0.05、0.01、0.001);miR-29b mimics组Patu8988/5-Fu细胞miR-29b mRNA表达水平显著升高(P<0.001),miR-29b inhibitors组miR-29b m RNA表达水平显著降低(P<0.01);miR-29b mimics组Patu8988细胞活力显著降低(P<0.05),miR-29b inhibitors组Patu8988细胞活力显著升高(P<0.01);miR-29b mimics组Patu8988/5-Fu细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),miR-29b mimics+参芪扶正注射液组Bcl-2蛋白表达水平进一步降低(P<0.05);miR-29b inhibitors组Patu8988/5-Fu细胞Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),miR-29b mimics+参芪扶正注射液组Bcl-2蛋白水平无明显变化。结论 miR-29b通过下调Bcl-2蛋白表达抑制Patu8988细胞增殖,参芪扶正注射液可能通过调控miR-29b/Bcl-2通路从而逆转肿瘤多药耐药。