原癌基因RET、TRK和PAX8-PPARγ1与甲状腺癌的研究进展

近来许多研究表明一些原癌基因的突变或重排常在甲状腺癌中出现。其中原癌基因RET和TRK的酪氨酸蛋白激酶活性与甲状腺乳头状癌的发病有特殊关系;RET基因的胚系突变,尤其是密码子634的突变可引起多发性内分泌腺瘤综合征Ⅱa和家族性甲状腺髓样癌;甲状腺转录因子.过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(PAX8-PPARγ1)融合蛋白可促进不同的甲状腺滤泡腺瘤形成,常在滤泡癌中发现。

青岛地区分化型甲状腺癌病人癌组织中Pax8-PPARγ的表达及意义

目的研究青岛地区分化型甲状腺癌病人癌组织中Pax8-PPARγ的表达及与临床病理因素的关系。方法收集2015年1月—2016年7月经我院普外科治疗的120例分化型甲状腺癌病人癌组织及60例结节性甲状腺肿组织手术标本。其中120例分化型甲状腺癌中乳头状甲状腺癌(PTC)60例,滤泡状甲状腺癌(FTC)60例。采用PCR方法检测癌组织以及结节性甲状腺肿组织中Pax8-PPARγ的表达水平,分析Pax8-PPARγ表达与不同临床病理因素的关系。结果FTC组织中Pax8-PPARγ的表达水平明显高于PTC组织和结节性甲状腺肿组织(阴性表达)(χ2=17.34,P<0.05)。在肿瘤有无包膜侵犯及脉管侵犯的FTC病人中Pax8-PPARγ的表达差异有统计学意义(χ2=7.320、5.978,P<0.05);但在不同性别、年龄、有无淋巴结转移的FTC病人癌组织中Pax8-PPARγ的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论Pax8-PPARγ可能可作为诊断分化型甲状腺癌中FTC的分子标志物,Pax8-PPARγ的表达水平对FTC病人预后及治疗评估具有一定的价值。

PAX8基因与上皮性卵巢癌的相关性

上皮性卵巢癌由几种不同的组织学亚型构成,其中最常见的是高级别浆液性卵巢癌,约占侵袭性上皮性卵巢癌的70%。近年研究发现该疾病可能源自输卵管分泌上皮。配对盒基因PAX8是谱系特异的转录因子相关基因,在输卵管正常发育过程中发挥重要作用,同时可通过多种途径参与上皮性卵巢癌的发生。越来越多研究者认为PAX8基因与肿瘤细胞迁移、侵袭、增殖、细胞存活、干细胞维持相关,但其在卵巢癌中的具体作用机制仍不明确。因此,研究PAX8基因在上皮性卵巢癌中表达的特点及作用机制,可能为该型卵巢癌寻找有效的肿瘤标志物,进而为卵巢癌的诊断、预后及治疗等提供新思路。

Pax8-PPARγ1与甲状腺滤泡状癌的研究进展

甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1%￣2%。其中滤泡状癌约占甲状腺癌的10%￣30%。在相当一部分甲状腺滤泡状癌中存在染色体t(2;3)(q13;p25)易位,形成融合基因Pax8-PPARγ1。文章综述该融合基因在致癌机制、与甲状腺肿瘤的鉴别诊断以及预后和基因治疗等方面的研究进展。

1例转移性PAX8和CD10基因相关性肾癌合并肺部转移患者经阿昔替尼联合帕博利珠单抗治疗的效果报道

PAX8和CD10在转移性肾癌中高表达。本文就1例中年男性较大转移性PAX8和CD10基因相关性肾癌合并肺部转移进行报道。术后前期行阿昔替尼治疗,肺部转移灶无缩小甚至扩大,1年后使用阿昔替尼联合帕博利珠单抗治疗,使用4个月后转移灶明显缩小,局部未见复发及转移。

Pax-8基因在大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,观察其对心肌细胞凋亡和增殖的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组,非特异性siRNA(NCsiRNA)组和空白对照组。前两组分别给予相应siRNA(5μl)和Lipofectamine 2000(5μl)配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用RT-PCR和Western blotting测定Pax-8的mRNA和蛋白质表达,荧光光度法检测半胱天冬酶(Caspase)-3活性以反映细胞凋亡,CCK-8法检验细胞的增殖抑制率。结果与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8 siRNA组的Pax-8 mRNA表达分别下调60.30%(P<0.05)和63.09%(P<0.05),蛋白表达分别下调50.38%(P<0.05)和54.17%(P<0.05),而NCsiRNA组与空白对照组间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的Caspase-3活性较NCsiRNA组和空白对照组明显升高(P<0.01),而后两者间无显著差异(P>0.05)。Pax-8 siRNA组的细胞增殖抑制率明显高于NCsiRNA组(P<0.01)。结论Pax-8 siRNA能选择性下调心肌细胞中Pax-8的表达,并促进细胞凋亡、抑制细胞增殖。

Pax-8基因在胚胎心脏发育中的作用

目的:在心脏特异的骨形态形成蛋白受体IA(the bone morphogenetic protein receptor IA,ALK3)基因敲除小鼠模型中,纯合子的心脏特异ALK3基因敲除的小鼠死于胚胎中期,同时伴有室间隔缺损。用基因芯片(microarray)法筛选了ALK3下游基因,并获得下游候选基因(转录因子Pax-8)。为了进一步明确Pax-8基因在胚胎心脏发育中的角色,Pax-8基因在小鼠被系统敲除。方法:运用实时荧光定量RT-PCR法检测Pax-8基因在小鼠胚胎中的表达情况。运用原位杂交法显示Pax-8基因在小鼠胚胎心脏中的表达部位。TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,电镜下观察Pax-8基因敲除的小鼠心脏组织发育的病理学异常。结果:正常胚胎小鼠9.5、10.5、11.5、12.5以及13.5d的Pax-8基因的表达水平以10.5d表达最高。胚胎切片的原位杂交显示:转录因子Pax-8表达在13.5d的α-MHCCre+/-,ALK3F/+小鼠整个心脏中。Pax-8基因敲除的小鼠心脏表现出形态改变(心脏呈球形,左心室壁肥厚,室间隔增厚,左室乳头肌肥大),左心室壁和室间隔心肌组织细胞凋亡率明显增高,同时线粒体体积较对照组明显缩小并且数量增多。结论:Pax-8基因是心脏较特异的参与心脏正常发育的ALK3下游基因,并与心肌细胞凋亡有关。

Pax8在女性生殖道肿瘤诊断与鉴别诊断中应用价值

目的探讨Pax8蛋白在女性生殖道肿瘤中的诊断及鉴别诊断作用。方法收集Mǔllerian管各种类型上皮48例和肿瘤152例,采用免疫组化SP法检测Pax8蛋白表达。结果 Pax8在输卵管上皮阳性率为100.0%(10/10)、子宫内膜上皮为100.0%(10/10)、子宫颈黏液腺上皮为35.7%(5/14)、子宫颈鳞状上皮为0(0/14);在卵巢输卵管、宫体、子宫颈的浆液性腺癌、交界性浆液性肿瘤、子宫内膜样腺癌、透明细胞腺癌均为100.0%;在卵巢输卵管黏液性肿瘤为70.0%(7/10)、子宫颈黏液腺癌为41.7%(5/12);在卵巢性索-间质肿瘤、卵巢无性细胞瘤、子宫颈鳞状细胞癌、子宫内膜鳞状细胞癌、卵巢类癌、卵巢或子宫颈的小细胞神经内分泌癌、消化道转移性癌均为0;在盆腔腺癌为100.0%(3/3)。结论 Pax8是Mǔllerian管腺上皮敏感且特异性的标志物,对女性生殖道上皮性肿瘤的鉴别诊断起重要作用。

先天性甲状腺功能减低症的Pax8基因研究

目的 探讨Pax8基因在先天性甲状腺功能减低症 (甲低 )病因学中的地位。方法 对 5 0例经内分泌专科门诊或新生儿筛查检出确诊的先天性甲状腺功能减低症患者 ,从外周血白细胞中提取基因组DNA ,采用PCR SSCP DNA测序方法进行Pax8基因外显子 2～ 9分析。结果 Pax8基因外显子 2～ 9编码区未发现突变。结论 Pax8基因编码区的结构改变 ,在中国人甲低的病因学中可能不具有重要地位。

卵巢浆液性肿瘤中Pax8和Tubulin的表达及意义

目的探讨Pax8和Tubulin在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测28例正常卵巢组织、38例卵巢良性浆液性囊腺瘤、34例卵巢交界性浆液性肿瘤和38例卵巢浆液性癌中Pax8、Tubulin的表达,并复习相关文献。结果正常卵巢上皮中Pax8、Tubulin均呈阴性,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤、浆液性癌中Pax8、Tubulin阳性率分别为78.9%和78.9%、100%和100%、94.7%和89.5%,Pax8在卵巢交界性浆液性肿瘤及浆液性癌组织中表达明显高于良性浆液性囊腺瘤组织(P<0.05),Tubulin在3种卵巢肿瘤中的表达差异无显著性(P>0.05),但存在表达部位的改变;Pax8表达与卵巢浆液性癌患者年龄、FIGO分期、病理学分级、淋巴结转移无关(P>0.05),Tubulin表达与浆液性癌病理学分级有关(P<0.05),Pax8、Tubulin的免疫组化评分比值大小与淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论 Pax8可能作为卵巢浆液性癌的标志分子,并为其临床靶向分子治疗提供实验依据;综合分析Pax8、Tubulin及二者免疫组化评分比值,对评估卵巢浆液性癌患者的病理学分级、淋巴结转移情况具有参考意义。

Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究

目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Pax-8。限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9c2细胞中,RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行Pax-8质粒转染,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,West-ern blotting法检测活化caspase-3的表达。结果:成功构建了大鼠pcDNA3.1(+)-Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。转染Pax-8基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(P<0.01),同时下调活化caspase-3的表达(P<0.01)。结论:通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达。Pax-8基因可能通过促进心肌细胞增殖及抑制心肌细胞凋亡从而参与胚胎心脏发育的过程。

卵巢及子宫透明细胞癌、子宫内膜样癌中NapsinA、TTF-1、PAX8及CA125的表达及意义

目的探讨Napsin A、TTF-1、PAX8及CA125在卵巢、子宫内膜透明细胞癌,卵巢和子宫内膜样癌及卵巢浆液性癌中的表达及在诊断及鉴别诊断中的价值。方法选取23例卵巢透明细胞癌、10例卵巢子宫内膜样癌、45例卵巢浆液性癌、11例子宫内膜透明细胞癌、35例子宫内膜样癌,利用免疫组化法评估Napsin A、TTF-1、PAX8及CA125在上述肿瘤中的表达,并复习相关文献。结果 Napsin A在卵巢透明细胞癌及子宫内膜透明细胞癌中的阳性率较高,分别为95.7%(22/23)、72.7%(8/11),在卵巢和子宫内膜样癌中的阳性率较低,分别为10%(1/10)、5.7%(2/35),在卵巢浆液性癌中不表达。Napsin A在卵巢透明细胞癌、卵巢子宫内膜样癌及卵巢浆液性癌中的敏感度差异有统计学意义(P<0.01)。在子宫内膜透明细胞癌及子宫内膜样癌中的敏感度差异亦有统计学意义(P<0.01)。TTF-1在卵巢透明细胞癌中不表达,在卵巢子宫内膜样癌、浆液性癌、子宫内膜透明细胞癌、子宫内膜样癌中的阳性率分别为30%(3/30)、4.4%(2/45)、9.1%(1/11)、5.7%(2/35)。PAX8在124例肿瘤中均阳性。18.2%(2/11)的子宫内膜透明细胞癌及5.7%(2/35)的子宫内膜样癌中CA125均阴性,其余均阳性。1例子宫内膜透明细胞癌为Napsin A/TTF-1双阳性。所有Napsin A和(或)TTF-1阳性病例均表达PAX8及CA125。结论Napsin A在卵巢透明细胞癌中的阳性率最高,其次为子宫内膜透明细胞癌,在卵巢和子宫子宫内膜样癌中的阳性率较低,在卵巢浆液性癌中不表达。在诊断起源不明的转移性癌时,鉴别诊断时应当把肺腺癌及妇科肿瘤考虑在内,此时联合检测Napsin A、TTF-1及PAX8的表达有助于确诊。

PAX8和SATB2在卵巢黏液性肿瘤的诊断与鉴别诊断的意义

目的探讨PAX8和SATB2在卵巢黏液性肿瘤的诊断与鉴别诊断的价值。方法回顾性复习25例卵巢原发性黏液性肿瘤、9例卵巢转移性黏液腺癌、5例结直肠黏液腺癌的临床资料,病理形态学分析,免疫组织化学染色方法检测PAX8、SATB2、CK7、CK20、CDX2等蛋白的表达。结果卵巢原发性黏液性囊腺瘤组10例,3例PAX8(+)、SATB2均(-)。交界性卵巢黏液性囊腺瘤组10例,4例PAX8(+),SATB2均(-)。卵巢原发性黏液腺癌组5例:SATB2均(-),2例PAX8(+)。卵巢转移性黏液腺癌组:其中结直肠黏液腺癌转移组SATB2 4例(+),PAX8均(-);胃转移性腺癌组PAX8、SATB2均(-),5例结直肠腺癌病例中4例SATB2(+)。结论 PAX8、SATB2抗体是鉴别卵巢黏液性肿瘤来源的重要免疫标记物,具有重要的临床意义。

孤立性纤维性肿瘤/脑膜血管周细胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表达及意义

目的探讨STAT6、PAX8和CD34在孤立性纤维性肿瘤(solitary fibrous tumor,SFT)/脑膜血管周细胞瘤(meningeal hemangiopericytoma,M-HPC)中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测26例M-HPC、22例神经鞘瘤、25例脑膜瘤以及10例肿瘤旁正常脑膜组织中STAT6(单/多克隆)、PAX8及CD34的表达。比较STAT6、PAX8和CD34在诊断M-HPC及其相似肿瘤中的价值。结果不论单/多克隆抗体,26例M-HPC中STAT6均呈弥漫核强阳性,阳性率为100%(26/26);57.7%(15/26)的SFT/脑膜HPC中PAX8呈核阳性;92.3%(24/26)的M-HPC中CD34呈膜阳性;而在其他类型肿瘤及脑膜组织中所有抗体均阴性。相比PAX8和CD34,STAT6抗体具有较高的敏感性。结论 M-HPC是一种罕见的纤维母细胞软组织肿瘤。特别是不典型病例,其形态学谱容易与其他间充质肿瘤混淆。相比PAX8和CD34,STAT6单/多克隆抗体免疫组化染色能够更好地阐明M-HPC的免疫表型特征。

PAX8在卵巢肿瘤中的表达及临床意义

目的:探讨卵巢良恶性肿瘤病灶中PAX8的表达情况和临床意义。方法:免疫组化法检测60例原发性上皮性卵巢癌、20例卵巢良性肿瘤和10例转移性卵巢癌病灶中PAX8表达,分析PAX8表达与患者临床病理特征、预后的关系。结果:免疫组化染色显示,原发性上皮性卵巢癌、卵巢良性肿瘤中PAX8表达阳性率分别为92%和85%,两组比较差异无统计意义(P=0.761);转移性卵巢癌组织均不表达PAX8,与原发性上皮性卵巢癌比较差异有统计学意义(P<0.001)。卵巢癌原发病灶中PAX8表达强度与癌细胞分化程度(P=0.033)、FIGO分期(P=0.003)有关,而与病理类型无关(P=0.871)。生存分析发现,卵巢癌患者中PAX8低表达组的术后生存时间明显优于PAX8高表达组(P=0.009)。结论:与转移性卵巢癌相比,PAX8可特异性表达于原发性上皮性卵巢癌病灶中,且表达程度与癌细胞分化程度和FIGO分期有关。PAX8高表达的卵巢癌患者预后较差。PAX8对判断卵巢癌的来源及预后有重要意义。

PAX8蛋白在脑胶质瘤患者组织中表达水平及其与临床病理特征分析

PAX8蛋白在脑胶质瘤患者组织中表达水平及其与临床病理特征分析。选取大连大学附属新华医院确诊的脑胶质瘤患者98例,根据2016年世界卫生组织(WHO)神经系统肿瘤分级标准,分为I级12例,Ⅱ级18例,Ⅲ级21例,Ⅳ级47例,使用酶联免疫吸附法、蛋白印迹法及免疫组化等方法测定所有脑胶质瘤患者PAX8蛋白表达。Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者PAX8蛋白表达水平高于Ⅰ级,且Ⅲ级患者PAX8蛋白表达水平高于Ⅱ级,Ⅳ级患者PAX8蛋白表达水平高于Ⅱ级、Ⅲ级,差异均有统计学意义;PAX8蛋白表达与年龄、病理学类型相关性不明显,差异无统计学意义;与病理学分级、瘤周水肿、浸润深度相关性明显,且病理学分期越高、瘤周水肿程度越高、浸润深度越深,PAX8蛋白阳性表达率越高,差异有统计学意义;PAX8阴性组总生存率及生存期均明显高于PAX8阳性组,差异有统计学意义。PAX8的表达水平与脑胶质瘤病理分级正相关,PAX8在脑胶质瘤的发生发展过程中起促进作用;PAX8低表达的脑胶质瘤患者能获得较好的预存率及生存期均明显高于PAX8阳性组。

Pax-8基因敲除小鼠心脏中Fgf-6基因表达的上调及其意义

目的探讨先天性心脏病相关基因转录因子Pax-8的下游基因以及Pax-8基因下调引起心脏形态改变的机制。方法分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子（Pax-8 KO^-/-）和杂合子（Pax-8 KO^4/-）的心脏总RNA，利用含31802个小鼠基因的基因芯片检测Pax-8 KO^-/-和Pax-8 KO^-/-小鼠的基因表达水平，找出差异表达的基因，并经荧光实时定量PCR技术初步筛选出转录因子Pax-8的下游基因。结果基因芯片检测发现，Pax-8 KO^-/-小鼠较Pax-8 KO^＋／-小鼠有25个基因表达下调，另有17个基因表达上调，差异基因涉及细胞周期及信号转导的调节因子、直接参与代谢的酶以及核转录因子等。定量RT-PCR证实，Pax-8 KO^-/-小鼠Fgf-6基因的表达水平较Pax-8 KO^＋/-小鼠及野生型（Pax-8^＋/＋）小鼠分别上调1.13倍和1．67倍，差异均较显著（P〈0.01）。结论Fgf-6基因是转录因子Pax-8的下游基因，可能在心脏的发育过程中发挥着重要作用。

胸腺上皮性肿瘤中不同克隆号PAX8抗体的表达及临床意义

目的探讨不同克隆号PAX8抗体在胸腺上皮性肿瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测鼠单克隆抗体PAX8(克隆号MRQ-50)及兔单克隆抗体PAX8(克隆号EP298)在142例胸腺上皮性肿瘤、40例甲状腺具有胸腺样分化的癌、3例胸腺鳞状细胞癌肺转移和29例肺原发鳞状细胞癌中的表达;同时亦检测PAX8(MRQ-50)、PAX8(EP298)在45例卵巢癌、14例肾细胞癌和4例甲状腺乳头状癌中的表达。结果PAX8(MRQ-50)在胸腺原发上皮性肿瘤、甲状腺具有胸腺样分化的癌中的阳性率分别为75.0%和57.5%;在29例肺原发鳞状细胞癌中除5例呈局灶弱阳性外,其余均阴性。PAX8(EP298)在胸腺上皮性肿瘤中均阴性,在卵巢癌、肾细胞癌和甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为88.9%、92.3%和100%。结论不同克隆号PAX8抗体在胸腺上皮性肿瘤中表达差异有显著性,PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性肿瘤中具有较高且稳定的表达,可用于胸腺上皮性特异性标志物和肺原发的鳞状细胞癌进行鉴别诊断。

PAX-8基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

目的繁殖和鉴定PAX-8基因敲除小鼠。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性杂合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果PAX-8杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得PAX-8基因敲除纯合子小鼠的有效途径。

Pax-8基因在心脏发育中蛋白表达下调

目的:观察Pax-8基因在ALK3基因敲除小鼠心脏中的蛋白表达情况,探讨Pax-8基因在心脏发育中的作用。方法:基因芯片(microarray)和定量逆转录-聚合酶链反应测定ALK3基因的下游基因,免疫组化法检测13.5 d小鼠胚胎心脏特异性ALK3基因敲除小鼠胚胎中Pax-8蛋白的表达,连续病理切片及HE染色观察刚出生的Pax-8基因敲除小鼠的心脏形态。结果:在心脏特异的ALK3基因敲除小鼠中,转录因子Pax-8基因mRNA的表达水平上被下调7.1倍。免疫组化结果显示:13.5 d小鼠胚胎心脏特异性ALK3基因敲除的纯合子小鼠Pax-8基因在蛋白水平与杂合子相比也明显下调。Pax-8基因敲除小鼠纯合子有明显的室间隔和左心室肥厚,心脏呈球形。结论:Pax-8基因是ALK3基因的下游基因,与心脏发育有密切关系。