NLK通过调控paxillin促进膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化

目的探讨Nemo样激酶(nemo-like kinase;NLK)及桩蛋白(paxillin)对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用和机制,为膀胱癌的基础研究及临床预防和治疗提供理论依据。方法生物信息学分析NLK在膀胱癌组织中的表达。EdU染色实验、克隆形成实验以及transwell实验检测膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。RNA pull down实验检测膀胱癌细胞中NLK与paxillin的互作关系。Western blot实验检测膀胱癌细胞中NLK、p-paxillin、及EMT相关蛋白的表达。结果NLK和p-paxillin在膀胱癌中高表达;NLK与paxillin具有相互作用关系;沉默NLK抑制了膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT、并抑制p-paxillin的表达;而paxillin过表达则逆转了沉默NLK对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭、EMT及p-paxillin表达的作用。结论NLK通过调控paxillin促进膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT,为膀胱癌的基础研究及临床预防和治疗提供理论依据。

食管鳞癌组织中PTEN、PI3K和Paxillin的表达及其临床意义

目的研究PTEN、PI3K和Paxillin在食管鳞癌组织(esophageal squamous cell carcinoma,ES-CC)中的表达及其与ESCC细胞发生、发展与转移的关系以及PTEN、PI3K和Paxillin三者之间的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测24例正常食管黏膜、94例ESCC组织中PTEN、PI3K和Paxil-lin的表达情况。结果食管癌组织中PTEN、PI3K和Paxillin的阳性表达率与正常食管黏膜组织相比差异均有统计学意义(P<0.01)。PTEN表达与食管癌细胞的分化程度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)、浸润深度(P<0.05)及临床分期(P<0.05)显著相关;PI3K表达与分化程度、淋巴结转移、浸润深度及临床分期显著相关(均P<0.01);Paxillin表达与淋巴结转移、浸润深度和临床分期等因素有关(均P<0.01);PTEN分别与PI3K、Paxillin表达之间均呈显著负相关(P<0.01);PI3K与Paxillin表达呈显著正相关(P<0.05)。结论PTEN、PI3K和Paxillin表达均与食管癌发生发展及侵袭转移有关,可作为评价ESCC生物学行为的指标。在食管癌的发生发展中PI3K、PTEN的作用可能互相拮抗,PI3K和Paxillin协同促进肿瘤的恶性进展。

食管鳞癌中Paxillin mRNA的表达及其与癌转移的关系

目的探讨Pax illin mRNA表达与食管癌转移的关系。方法采用原位杂交方法检测54例食管鳞癌、癌旁不典型增生组织及其正常食管组织中Pax illin mRNA的表达。结果有淋巴结转移的21例(A组)食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管组织中Pax illin mRNA阳性表达率分别为90.48%(19/21)、52.38%(11/21)和0,无淋巴结转移的33例(B组)食管鳞癌组织、癌旁组织和正常食管组织中的Pax illin mRNA阳性表达率分别为33.33%(7/33)、23.80%(5/33)和0。两组癌组织、癌旁不典型增生组织中Pax illin mRNA阳性表达率比较,P均<0.05。结论Pax illin mRNA表达与食管鳞癌的转移密切相关。

纤维连接蛋白—paxillin通路对人胃癌细胞系AGS体外侵袭力的影响

目的研究纤维连接蛋白激活paxillin后对人胃癌细胞侵袭力的影响,探讨抑制paxillin影响胃癌细胞侵袭力的机制。方法以递增浓度的纤维连接蛋白刺激人胃癌细胞株AGS,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测胃癌细胞内paxillin第118位酪氨酸(tyr-118)磷酸化的变化,同时以改良Boy-den小室法检测细胞侵袭力变化。设计合成paxillin siRNA并进行效果比较,观察siRNA抑制纤维连接蛋白促胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力的改变。结果纤维连接蛋白能促进AGS细胞paxillin tyr-118磷酸化的增强和胃癌细胞侵袭力(P<0.05),并在一定范围内具有剂量依赖性。siRNA干预后,胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力均有显著降低(P<0.05)。结论纤维连接蛋白可有效增强胃癌细胞的侵袭力,paxillin tyr-118磷酸化在此过程中起关键作用,使用paxillin siRNA可以抑制纤维连接蛋白促人胃癌细胞侵袭的作用。

化痰消瘀方对胃癌前病变大鼠PTEN、FAK及paxillin表达的影响

目的观察化痰消瘀方对胃癌前病变大鼠PTEN、FAK及paxillin表达的影响,从分子生物学水平探讨其逆转胃癌前病变的作用机制。方法选择90只4~5周龄SD雄性大鼠,随机取15只作为空白组,其余大鼠均采用N-甲基-N’-硝基N-亚硝基胍综合饥饱失常、浓盐水灌胃的方法制备胃癌前病变大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组,中药高、中、低剂量组及维酶素组,每组13只。空白组正常饮食,余均造模成功后,模型组给予生理盐水灌胃,中药高、中、低剂量组分别给予3 m L/kg、2 m L/kg、1 m L/kg化痰消瘀方灌胃,维酶素组给予10 m L/kg维酶素灌胃,均灌胃8周。采用HE染色法观察大鼠胃黏膜病理改变情况,应用免疫组化法检测胃黏膜组织中PTEN、FAK及paxillin的表达情况。结果 HE染色显示空白组大鼠胃黏膜无癌前病变改变,模型组均出现不同程度的胃癌前病变改变,中药高、中剂量组和维酶素组胃黏膜癌前病变情况均较模型组明显改善（P均〈0.05）,且中药高剂量组改善程度高于其他各给药组（P均〈0.05）。免疫组化结果显示PTEN在空白组强阳性表达;模型组鲜有表达;中药高、中、低剂量组表达量逐渐降低,但高于模型组（P均〈0.05）;中药高剂量组PTEN表达量高于其他各给药组（P均〈0.05）。FAK、paxillin在空白组极少表达,模型组表达量较空白组显著增加（P均〈0.05）;中药高、中、低剂量组二者表达量均明显低于模型组（P均〈0.05）,其中高剂量组表达量明显低于其他各给药组（P均〈0.05）。结论中药化痰消瘀方可显著改善胃癌前病变大鼠胃黏膜组织病理学情况,其作用机制可能是激活抑癌基因PTEN,调节FAK的去磷酸化,通过FAK/Src信号通路下调paxillin来诱导细胞凋亡。

非小细胞肺癌组织中CD44v6和Paxillin的表达及其与预后的关系

目的 研究细胞粘附分子在非小细胞肺癌组织中的表达及其与转移和预后的关系。方法 通过免疫组化的方法检测 79例非小肺癌组织中 CD44 v6和 Paxillin表达并分析其与肿瘤的组织类型、分化程度、淋巴结转移与预后的关系。结果 肺癌组织中 CD44 v6和 Paxillin的阳性率分别为 60 .8%和 3 4.1%。CD44 v6的表达与肺癌淋巴结转移呈正相关 ,与 2年生存率呈负相关 ( P均 <0 .0 5 )。 Paxillin的表达与肺癌淋巴结转移呈正相关 ( P均 <0 .0 5 )。结论 CD44 v6和

G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1发夹结构通过影响Paxillin的功能抑制成骨细胞迁移

目的探索G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1(Gproteincoupledreceptorkinaseinteractingprotein1,GIT1)的RNA发夹结构(hairpin)(GIT1-RNAh)对成骨细胞迁移的影响,并分析其机制。方法取培养至第6代的鼠成骨细胞,随机分成两组,分别用包含GIT1-RNAh(实验组)和绿色荧光蛋白(greenfluoresenceprotein,GFP)的RNA发夹结构(GFP-RNAh)的腺病毒(对照组)感染12h后,再将每组分成有、无血小板源性生长因子(plateletdrivedgrowthfactor,PDGF)刺激的两组。免疫荧光染色方法检测成骨细胞内源性GIT1蛋白表达和Paxillin的位置。WesternBlot检测Paxillin的磷酸化。构建包含蓝色荧光蛋白的GIT1-RNAh(CFP-GIT1-RNAh)实验组和GFP-RNAh(CFP-GFP-RNAh)(对照组),免疫荧光双染的方法检测CFP-GIT1-RNAh和CFP-GFP-RNAh对Paxillin位置的特异性作用。用划痕愈合法检测GIT1-RNAh(实验组)和GFP-RNAh(对照组)腺病毒对成骨细胞在PDGF刺激下的迁移能力的影响。结果免疫组织化学观察,实验组和对照组比较,明显抑制成骨细胞内源性的GIT1蛋白表达和扰乱Paxillin的分布。WesternBlot观察,和对照组相比,实验组明显抑制了Paxiliin的磷酸化(P<0.05)。划痕愈合法检测观察,和对照组相比,实验组明显抑制成骨细胞的迁移。结论GIT1-RNAh通过扰乱Paxillin的分布和其磷酸化从而抑制成骨细胞的迁移。

shRNA下调Paxillin表达对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的采用RNA干扰技术转染shRNA下调SMMC-7721肝癌细胞中Paxillin的表达,探讨Paxillin下调对SMMC-7721细胞迁移、侵袭力的影响。方法采用Paxillin shRNA转染肝癌细胞株SMMC-7721,分别设未处理SMMC-7721肝癌细胞组(未处理组)、shRNA Paxillin阴性组(对照组)和shRNA Paxillin组(实验组)。以GAPDH为内参,采用qRT-PCR、Western blot、ELISA法分别检测各组SMMC-7721细胞中Paxillin与FAK的表达;筛选出稳定转染Paxillin shRNA的肝癌细胞株,采用MTT、Transwell侵袭小室法分别检测各组细胞的增殖情况和侵袭力差异。结果 qRT-PCR和ELISA结果均显示Paxillin表达明显下调(P<0.05),FAK表达各组间差异无显著性(P>0.05);Western blot法检测结果显示实验组Paxillin的相对表达量明显低于未处理组和对照组;成功构建Paxillin稳定表达的SMMC-7721肝癌细胞株;MTT细胞增殖与Transwell细胞侵袭力检测显示Paxillin下调肝癌细胞的增殖、侵袭能力明显低于未处理组和对照组(P<0.05)。结论 shRNA干扰技术可以下调Paxillin的表达;Paxillin表达下调抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、侵袭能力;Paxillin有望成为肝癌复发、转移预测和基因治疗的新靶点。

胃癌组织中Caveolin-1,Paxillin的表达及其临床生物学意义

目的:探讨Caveolin-1和Paxillin在正常胃黏膜,胃上皮内瘤变和胃腺癌组织中的表达及其与胃癌发生发展和浸润转移的关系。方法:应用SP法检测20例正常胃黏膜、30例胃上皮内瘤变、58例胃腺癌组织中Caveolin-1和Paxillin的表达。结果:正常胃黏膜、上皮内瘤变、胃腺癌组织中,Caveolin-1的阳性率呈递减趋势,组间差异有统计学意义(P<0.05),Caveolin-1表达与分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);Paxillin阳性率在胃癌组织与其他两组的表达差异有统计学意义(P<0.05),Paxillin表达与年龄、分化程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管转移有关(P<0.05)。结论:caveolin-1和Paxillin表达降低或缺失在胃癌的浸润转移等恶性进展过程中起重要作用;Paxillin与胃癌的发生密切相关;胃癌中Caveolin-1蛋白和Paxillin蛋白表达呈正相关。

paxillin在胃腺癌中的表达及临床意义

目的:研究焦点黏附相关调节蛋白paxillin在胃癌组织中的表达及其与胃癌细胞分化、浸润及转移的关系.方法:应用免疫组化SP法检测80例胃癌和40例淋巴结转移灶中paxillin的表达情况。结果:paxillin在胃中、低分化腺癌组织中的表达显著高于高分化腺癌,进展期胃癌组织中显著高于早期胃癌,胃癌原发灶中显著高于淋巴结转移灶。结论:paxillin可能在胃癌细胞的分化、浸润和转移中起着重要作用。

食管鳞癌组织和淋巴结中Paxillin和survivin的表达及其意义

目的研究Paxillin和survivin在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌细胞发生发展与转移的关系。方法应用免疫组化SP法检测24例正常食管黏膜、94例食管鳞癌和83例淋巴结组织中sur-vivin和Paxillin的表达情况。结果原发癌组织中Paxillin表达率与淋巴结转移(P<0.05)、浸润深度(P<0.01)和临床分期(P<0.01)等因素有关;原发癌组织中survivin与浸润深度有关(P<0.01);原发癌组织和转移淋巴结组织中Paxillin和survivin表达率均高于无转移淋巴结组织(P<0.05);Paxillin和survivin在淋巴结中表达成正相关性(P<0.05)。结论Paxillin和survivin在食管鳞癌组织和转移淋巴结中高表达,在食管鳞癌的发生发展过程中具有重要作用,可作为评价食管鳞癌生物学行为的指标。

Paxillin在高、低转移潜能乳腺癌中的表达及意义

目的研究paxillin在人高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系中的表达以及对肿瘤转移、黏附的影响。方法以乳腺癌细胞系MDA-MB-435S为研究对象,利用细胞穿透人工基底膜能力的差异筛选出高、低转移潜能的乳腺癌细胞系,利用免疫组化、免疫印迹(Western blot)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测paxillin在高、低转移潜能乳腺癌细胞中的表达。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞黏附率。结果免疫组化、Western blot、RT-PCR检测显示在高转移潜能乳腺癌细胞中paxillin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能乳腺癌细胞,差异具有统计学意义(P均<0.01)。MTT法检测高转移潜能乳腺癌细胞的黏附率高于低转移潜能乳腺癌细胞,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论Paxillin在人乳腺癌转移和黏附过程中发挥重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子。

甲状腺乳头状癌中Paxillin与Ezrin的表达及意义

目的探讨Paxillin、Ezrin在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinomas,PTC)组织中的表达及意义。方法采用免疫组化MaxVision两步法检测50例PTC组织、22例甲状腺腺瘤组织和28例正常甲状腺组织中Paxillin、Ezrin的表达,分析二者表达与PTC临床病理特征的关系及其相关性。结果 Paxillin、Ezrin在PTC组织的阳性率均明显高于甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织,且其高表达与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05);Paxillin与Ezrin表达呈正相关(P<0.05)。结论 Paxillin和Ezrin的过表达可能与PTC的发生、发展、侵袭转移有关,二者有望成为判定PTC及预测其侵袭转移能力的指标。

RNAi引起的Paxillin和p130Cas下调抑制胃癌细胞失巢性生长

P130Cas和paxillin分子是整合素家族下游重要的衔接分子.为了探索这两个分子在肿瘤细胞抗失巢凋亡中的作用,应用RNAi技术分别抑制抗失巢凋亡的胃癌细胞BGC82 3中paxillin和p130cas基因的表达,观察它们对细胞失巢性生长的影响.依据siRNA设计原则,分别设计针对p130cas和paxillin的两条序列;成功的构建了特异性封闭上述两分子的载体pWH1 p130cas和pWH1 paxillin .构建的载体瞬时转染贴壁培养和失巢培养的BGC82 3后,RT PCR和Western印迹检测发现paxillin和p130Cas分子在mRNA及蛋白水平的表达量均明显降低;倒置显微镜下观察发现,贴壁培养的胃癌细胞发生皱缩、脱落;失巢培养的细胞聚集成团的现象受到明显抑制,细胞团比对照组小,且较松散;MTT实验结果表明,失巢培养的BGC82 3pWH1 paxillin 组细胞存活率(32 19%±6 11% )和BGC82 3pWH1 p13 0cas组细胞存活率(2 8 5 2 %±5 0 2 % )与对照组相比显著下降(P <0 0 1vscontrol) ;FCM实验结果发现与失巢培养的对照组相比,BGC82 3pWH1 paxillin和BGC82 3pWH1 p13 0cas组细胞G1期抬高,并出现了凋亡峰.运用RNAi技术分别抑制了BGC82 3细胞中paxillin和p130Cas分子的表达,初步证明paxillin和p130Cas是细胞存活的重要信号分子,在肿瘤细胞抗失巢凋亡过程中具有重要的作用.

Paxillin在大鼠胰腺发育不同时期表达的研究

目的:研究桩蛋白(Paxillin,Pxn)在胰腺发育不同阶段的表达和细胞定位。方法:运用RT-PCR技术检测Pxn在大鼠胰腺发育不同阶段的mRNA表达水平;运用免疫组织化学检测不同时期桩蛋白在胰腺的定位。结果:RT-PCR结果显示Pxn的mRNA表达量胚胎期高于新生和成年期;免疫组织化学结果显示在不同发育时期桩蛋白不仅在外分泌胰腺有表达,而且在胰岛也有表达。结论:具有调节细胞聚集、粘附迁移功能的桩蛋白可能参与出生后胰岛重塑。

Paxillin在胃腺癌和癌前期变化中的表达及意义

目的检测Paxillin在胃腺癌(GAC)、癌前期变化及慢性浅表性胃炎(CSG)中的表达,探讨其生物学功能及其与GAC病理特征的关系。方法免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法检测59例GAC、30例CSG及80例癌前期变化[包括30例慢性萎缩性胃炎(CAG)、30例肠上皮化生(IM)和20例异型增生(Dys)]组织中Paxillin的表达。结果 Paxillin在CAG组、IM组、Dys组和GAC组中表达均高于CSG组,差异有统计学意义(P<0.05)。Paxillin的表达程度与胃黏膜病变程度呈正相关(rs=0.779,P=0.000)。Paxillin在进展期、伴淋巴结转移及中、低分化组GAC组织表达高于早期、无淋巴结转移及高分化组GAC组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Paxillin表达增高是GAC癌变和转移的重要分子事件,其影响可能在GAC发生的早期即已存在,并持续到GAC阶段,有望成为GAC淋巴结转移的预测指标。

Paxillin对骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的影响

目的 :探讨Paxillin对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向类髓核细胞分化的影响。方法 :取3周龄健康SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,传至第3代,用流式细胞仪对其表面标志分子进行鉴定。利用pc DNA3.1(-)/Myc-His B质粒构建真核表达载体pc DNA3.1-Paxillin。取第3代BMSCs分为3组:实验组,转染pc DNA3.1-Paxillin;阴性对照组,转染pc DNA3.1(-)/Myc-His B;空白对照组,不转染质粒。分别培养36h后,实验组和阴性对照经G418筛选,取3组BMSCs采用实时荧光定量PCR方法(q RT-PCR)检测各组Paxillin、蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原α1(collagen typeⅡα1,COL2α1)、性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y box protein 9,SOX9)、角蛋白19(keratin19,KRT19)、配对盒1(paired box 1,PAX1)和叉头蛋白(forkhead box F1,FOXF1)的m RNA表达量;免疫印迹法(Western blot)检测Paxillin、KRT19、PAX1和FOXF1蛋白表达水平。结果:BMSCs原代培养至第3代的细胞形态大体一致,呈长梭形,细胞连接紧密且均匀分布,CD44、CD90呈现高表达(95.6%和96.8%),CD45、CD11则呈现低表达(1.82%和2.16%)。实验组中Paxillin的m RNA和蛋白表达量较阴性对照组和空白对照组升高,差异具有显著性(P<0.05);经G418筛选后的BMSCs和髓核细胞形态相似。实验组中COL2α1、SOX9、Aggrecan、KRT19、PAX1、FOXF1的m RNA表达量较阴性对照组和空白对照组显著性升高(P<0.05);实验组KRT19、PAX1和FOXF1的蛋白表达量显著性高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 :Paxillin可以促进BMSCs向类髓核细胞分化,为椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗提供基础。

乳腺癌组织中paxillin和c-erbB-2的表达及临床意义

目的:研究paxillin蛋白和c-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌患者临床病理因素的关系,以评价乳腺癌的预后。方法:采用免疫组织化学SP法检测53例原发性乳腺癌、10例乳腺纤维腺瘤及10例距癌灶边缘>5cm病理组织学检查正常的乳腺组织中paxillin和c-erbB-2蛋白的表达情况。结果:与正常乳腺组织和乳腺纤维腺瘤相比,乳腺癌中paxillin表达显著降低(P=0.003),而c-erbB-2表达显著增高(P<0.001)。paxillin的表达与患者的年龄、绝经状况、肿瘤细胞的ER和PR表达及肿瘤大小无关,而与病理学分期、组织学分级和淋巴结转移有关;c-erbB-2表达与患者的年龄、绝经状况、肿瘤大小、PR表达和病理学分期无关,而与ER表达、组织学分级和淋巴结转移有关。paxillin和c-erbB-2的表达无相关性。结论:paxillin和c-erbB-2与乳腺癌细胞的恶性转化、侵袭转移有关,检测paxillin和c-erbB-2蛋白表达情况有助于准确评价乳腺癌患者的预后。

Paxillin和HER-2在乳腺癌中表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中Paxillin和HER-2的表达及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学(SP法)检测80例乳腺癌患者组织标本、15例乳腺良性病变及10例乳腺癌旁正常组织中Paxillin和HER-2的表达情况。结果①Paxillin在正常乳腺组、乳腺良性病变和乳腺癌组中的阳性表达率分别为30.0%、33.3%和71.3%。HER-2在正常乳腺组、乳腺良性病变组和乳腺癌组中的阳性表达率分别为0%、0%和33.8%。②Paxillin表达与临床分期和淋巴结转移相关,而与组织学类型和组织级别无关。③Paxillin和HER-2的表达有相关性。结论联合检测Paxillin和HER-2的表达有助于预测乳腺癌的恶性程度和转移潜能。