PcDNA3.1/hTM质粒对真核细胞转染表达的实验研究

目的探讨含有人血栓调节蛋白(hTM)基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/hTM转染脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗凝效应。方法由阳离子脂质体介导将pcDNA 3.1/hTM质粒转入内皮细胞中,以RT-PCR法检测hTMmRNA的表达;免疫组化法检测hTM分子的表达。结果转染重组质粒的HUVECs表达的hTMmRNA约为载体质粒组及未转染组的1.7倍。免疫组化显示有平均1 0%的HUVECs获得转染,阳性细胞较阴性细胞hTM的表达强度有明显提高。结论pcDNA 3.1/hTM质粒能被导入HUVECs中表达,而且外源性hTM分子具有完全的抗凝生物学活性。

人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建

目的 本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法 将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果 挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论 采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+)