感染花生条纹病毒(PStV)后花生生理生化性状变化的研究

研究表明，花生接种条纹病毒发病后叶片的光合强度、叶绿素含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性明显下降，而过氧化物酶（ＰＯＤ）活性却显著提高。高感花生品种白沙１０１６上述指标的变化幅度较大，发病植株叶片中ＰＯＤ同功酶出现了４条健株中没有的新带，迁移率分别为０．６７、０．７３、０．８０和０．８９，而原有的迁移率为０．３８的１条谱带变弱消失，发病后ＳＯＤ同功酶谱带数没有显著变化。

花生感染条纹病毒(PStV)后叶片细胞超微结构研究

花生接种PStV后 30d取叶片进行超薄切片置于电镜下观察 ,在花 37和白沙 10 16两个品种发病叶片的叶肉细胞中均发现有多种形状的内含体和病毒粒子的存在 ;内含体多发现于细胞核周围 ,有风轮状、束状、管状和环状等 ;病毒粒子以束状或拟晶格状存在 ,且以高感品种白沙 10 16叶肉细胞内的含量较多。PStV对叶绿体和线粒体等细胞器的结构有破坏作用 ,表现为叶绿体畸形 ,类囊体片层减少 ,基粒缩小且排列不整齐 ,并有大量淀粉粒累积 ,部分线粒体出现肥大和自溶。此外 ,感病细胞的膜系统松弛 ,有膜溶解现象。上述病理结构变化均以高感品种白沙 10 16表现的更为明显。

花生条纹病毒(PStV)种传研究——Ⅲ.种传率高低不同品种荚果发育中种子带毒率变化

应用酶联抗原直接包被法(ELISA—DAC)对4个种传率高低不同的花生品种,苗期感染花生条纹病毒(PStV)的病株在荚果发育不同时期对荚果各部位带毒率进行测定。花生荚壳、胚和子叶都带有PStV病毒,种皮极少带毒。荚壳带毒率变化范围大,规律不明显;种皮带毒偶而能检测到,以上品种间无明显差异。胚和子叶一般同时带毒,带毒率在0—23.8％之间,品种间有明显差异,每个品种带毒率基本不变。荚果各部位带毒率年度间有些变化。

花生条纹病毒(PStV)种传研究——Ⅰ、应用酚联抗原直接色被法检测花生PStV种传特性

应用酶联抗原直接包被法(ELISA—DAC法)(检测单粒花生种子)与温室生长法、指示植物接种法检测花生种子PStV带毒情况,其结果基本一致。1987和1988两年以应用温室生长法为主分别对229份和500份花生种质资源材料的PStV种传特性进行检测,参试材料PStV平均种传率分别为4.7％和8.6％,多数材料种传率分别为2—10％和5—20％。两年应用ELISA—DAC方法对146份花生材料进行复筛,分别得到PStV种传率1％以下材料3份和9份。

Digoxigenin(DIG)标记RNA探针检测侵染花生的Potyviruses

以花生条纹病毒(PStV)和花生斑驳病毒(PMV)克隆cDNA为模板,体外转录合成Digo-xgenin(DIG)标记PStV—I_9、PStV-I_(131)、PStV—I_(57-7)和PMV—A_(15)四种RNA探针。在点杂交反应中,PStV—I_9RNA探针能检测出0.25ng提纯PStV和花生病汁液62500倍稀释液中PStV。PMV—A_(16)RNA探针能检测到0.67ng提纯PMV和菜豆病汁液5120倍稀释液中PMV。两种病毒RNA探针均有高度特异性。PStV—I_(57-7)和PStV—I_(131)两种RNA探针具有与PStV—I_9RNA探针相同敏感性,但特异性稍差。

几种重要花生病毒研究新进展

花生病毒病是影响花生生产的重要病害。近10年来,花生矮化病毒(PSV)、花生条纹病毒(PStV)和番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒分子生物学研究进展,极大地丰富了对上述病毒基因组结构、遗传变异、进化的认识,以及病毒种、亚组和株系的科学划分。对PSV来说,提出了2个亚组的划分,而我国PSV株系血清学和RNA3全序列的分析,明确它们独自构成第3个新的亚组。对我国和东南亚国家PStV株系CP基因序列同源性的分析,说明在这些国家和地区PStV是单独进化的,形成不同症状类型的株系。Tospovirus属病毒分子生物学研究的深入使得该属病毒从番茄斑萎病毒(TSWV)1种增加到13种,其中侵染花生的病毒达5种,分布于不同的国家和地区。

芝麻黄花叶病病原的分子鉴定

从芝麻黄花叶病株上分离得到花生条纹病毒2个分离物（Peanut stripe virus sesame isolate，PStV-sel和PStV-se2）。提取感病芝麻叶片的总RNA，RT-PCR扩增外壳蛋白基因（cp）片段。序列测定结果显示，印基因含有861个核苷酸，编码分子量为32．4kDa的蛋白。2个株系cp基因与PStV其它株系核苷酸序列一致性为94．4％～99．9％，氨基酸序列一致性为93．7％～100％。株系间CP氨基酸序列系统进化树结果表明，芝麻PStV分离物与中国其它寄主来源的PStV株系处于同一进化分支。

不同品种花生接种条纹病毒后叶片内过氧化物酶和超氧化物歧化酶的变化

对３个感病程度不同的花生品种的研究表明，接种后各品种花生植株叶片内ＰＯＤ活性明显提高，随着症状的出现，ＰＯＤ表现出显著的活性高峰，并出现了４条新的同工酶带，而原有的１条迁移率为０．３８的谱带消失。接种初期，花生叶片内ＳＯＤ活性有所提高，但高感品种接种８ｄ后ＳＯＤ活性低于健康对照，而耐病品种接种后１２ｄ才略低于对照。各处理之间ＳＯＤ同工酶谱带数相同，发病株的迁移率为０．４１的谱带较弱。

芝麻品种(系)对花生条纹病毒抗性鉴定

1986、1990—1992年4年,采用田间自然诱发和人工接种方法共鉴定212份芝麻品种(系)对花生条纹病毒的抗性。结果表明,品种(系)间抗性差异显著,发现3个高抗品种,2个发病较轻的品系,参试10个芝麻推广品种均不抗病。

芝麻病毒病研究进展

芝麻是世界上重要的优质油料作物之一,近些年病毒病频发且呈加重趋势,给芝麻安全生产带来了严重威胁。国内外对芝麻病毒病的研究主要集中在发生危害调查、病原鉴定、发生流行规律及防治方法等方面。芝麻病毒病的症状复杂,病原种类较多,国内主要有花生条纹病毒(PSt V)和芜菁花叶病毒(Tu MV),国外报道较多的为豇豆蚜传花叶病毒(CABMV),其他在芝麻上发现的病毒还有西瓜花叶病毒(WMV)、芝麻坏死花叶病毒(SNMV)等。通过分析影响芝麻病毒病流行的因素,根据目前防治方法的研究结果,总结了可行的防治策略。

花生条纹病毒(红安分离物)cp基因的克隆和序列分析

从湖北省红安县花生种传苗中得到花生条纹病毒(Peanut stripe virus,PStV)分离物(PStV-Hongan),提取感病叶片的总RNA,RT-PCR扩增了其外壳蛋白基因(cp),克隆至pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌并鉴定。阳性质粒序列测定结果表明,该cp含有861个核苷酸,编码分子量为32.4kDa的蛋白。该株系cp与PStV其它株系核苷酸序列同源性为94.6%-98.8%,氨基酸序列同源性为96.2%-99.3%。株系间cp核苷酸序列系统进化树结果表明,Hongan株系与中国其它株系亲缘关系较近,而与东南亚其它株系关系较远。

花生条纹病毒在芝麻上流行研究初报

调查和试验结果说明：感染ＰＳｔＶ的花生是芝麻黄花叶病毒病主要初浸染源．桃蚜传毒效率最高，为３５％，豆蚜、大豆蚜和棉蚜传毒效率均很低．病害流行与蚜虫发生密切相关．供试的１０个芝麻栽培品种均不抗病，但存在一定成株期抗性。自花生条纹病毒（ＰＳｔＶ）感染的芝麻病株上收获的种子，种植后未发现病毒种传现象。

开封地区花生病毒病及流行规律研究

1988—1991四年调查说明,花生矮化病毒(PSV.)引起普通花叶病害,花生条纹病毒(PStV)引起轻斑驳病害是开封花生两种主要病毒病。PSV通过花生种传,测定自花生普通花叶病株收集近4000粒种子,PSV种传率0.025％。刺槐花叶树是花生上PSV另一个初浸染源。PSV开封刺槐分离物(R_3、R_4)在鉴别寄主上反应和血清学性质上和PSV-Mi相一致,但引起花生病害症状较PSV—Mi轻。开封市农科所一带刺槐花叶病树率平均30.7％。四年病害流行程度差异显著。1988和1991年花生生长季雨量少,蚜虫发生量大,分别为PSV严重和中度流行年。1989和1990年雨水较多,蚜虫发生少,病害显著减轻。

双重RT-PCR方法检测花生条纹病毒和黄瓜花叶病毒

为了建立花生条纹病毒(PStV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的双重RT-PCR检测方法,根据Gen-Bank中登陆的PStV和CMV的核苷酸保守序列分别设计特异性引物,以感病叶片总RNA反转录物为模板,建立了双重RT-PCR反应体系,并对双重RT-PCR的特异性和灵敏性进行了验证。结果表明:此方法能够特异地从感染PStV和CMV的样品中扩增出PStV(300bp)和CMV(1054bp)2个条带,与实验设计相符;扩增产物测序结果表明,PStV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为93%～99%,CMV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为90%～99%,证明了检测结果的准确性;该方法特异性良好,灵敏性与单一扩增相同,能够特异、灵敏、准确地检测花生CMV和PStV。

花生条纹病毒种传研究 Ⅱ、种传机制和影响种传因素

3批92粒阳性反应种子检测说明,绝大多数种子子叶和胚带花生条纹病毒(PStV),仅有收获前摘取2粒未成熟种子种皮带毒。PStV种传率与品种、病毒侵染时期密切相关。参试17份花生品种和材料中,种传率最高为20.6％,最低1％。珍珠豆型花生品种种传率明显高于普通型和其他类型花生品种。早期感病花生PStV种传率高,花针期以后感病种传率明显下降。小粒种子PStV种传率高于大粒种子。

芝麻病毒病害研究——Ⅱ.芝麻黄花叶病病原鉴定

继对芝麻矮化坏死病源研究之后,又对普遍发生的芝麻黄花叶病害分离物(YMo—I)进行了系统鉴定。该分离物普遍存在于各芝麻主产区,普通年份发病率为1～5％。YMo—I侵染芝麻引起叶片褪绿及黄绿相间花叶。摩擦接种能够侵染4科12种(品种)植物。局部侵染苋色藜、昆诺藜;系统侵染大豆、花生、望江南、克氏烟等。该病毒能够由桃蚜、花生蚜、大豆蚜以非持久性方式进行传播。ELISA检测其病株种子带毒率为0.5％,但尚未发现种生病苗。病毒在组织汁液中存活期3天;钝化温度55～60℃,稀释限点4×10^(-3)。提纯病毒为弯曲线状粒体,大小约为13×730nm。并有极易凝聚的趋势。病组织中诱导大量典型PVY第一亚组的风轮形和卷筒状细胞质内含体和少数多边形结晶核内含体。血清学上该病毒与花生条纹病毒(PStV)、西瓜花叶病毒—2(MMV—2)密切相关,与花生斑驳病毒、大豆花叶病毒弱相关;与芜菁花叶病毒不相关。但它不侵染WMV—2的寄主—黄瓜,并且该病害田间的发生流行与芝麻、花生的间作方式以及PStV在花生田间的流行密切相关。根据上述结果,YMo—I分离株被鉴定为花生条纹病毒的一芝麻分离株。

几种重要花生病毒研究新进展

花生病毒病是影响花生生产的重要病害。近10年来,花生矮化病毒(PSV)、花生条纹病毒(PStV)和番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒分子生物学研究进展,极大地丰富了对上述病毒基因组结构、遗传变异、进化的认识,以及病毒种、亚组和株系科学的划分。对PSV来说,提出了两个亚组的划分,而我国PSV株系血清学和RNA3全序列的分析,明确它们独自构成第三个新的亚组。对我国和东南亚国家PStV株系CP基因序列同源性的分析,说明在这些国家和地区PStV是单独进化的,形成不同症状类型的株系。Tospovirus属病毒分子生物学研究的深入使得该属病毒从番茄斑萎病毒(TSWV)1种增加到13种,其中侵染花生的病毒达5种,分布于不同的国家和地区。

山东省花生病毒的RT-PCR检测

应用RT—PCR方法检测了2008-2009年在山东各地采集的153个花生病叶样品，检测到花生条纹病毒（Peanut stripe virus，PStV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）和花生斑驳病毒（Peanut mottle virus，PeMoV）。PStV的检出率最高，为48．4％，在山东各花生产区均有发生；CMV的检出率为19．0％，在泰安、青岛、潍坊、聊城和临沂等地有发生；CMV与PStV的复合侵染率为9．2％。PeMoV目前仅在青岛地区发现。

逆转录环介导等温扩增技术检测花生条纹病毒

花生条纹病毒病(Peanut stripe virus,PStV)是我国花生上流行最广[1]、田间发病率最高的一种花生病毒病,严重影响花生的产量和品质。由于PStV存在不同症状类型株系,在中国占优势的轻斑驳株系,引起花生症状较轻,并且与其他花生病毒病症状类似,不易分辨,目前主要利用PCR方法对PStV进行检测[2],但该方法检测时间长,并且需要专业仪器,较难普及。环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)

利用RNAi介导的抗病性获得抗2种花生病毒的转基因烟草

分别以花生条纹病毒红安株系(PStV-Hongan)外壳蛋白基因(CP),花生矮化病毒轻型株系(PSV-Mi)和花生黄瓜花叶病毒(CMV-CA)复制酶基因2a为模板,通过PCR方法分别得到PStV-CP 5'端,PSV-Mi和CMV-CA2a 3'端150 bp的片段,3种片段混合物为模板经PCR拼接得到450 bp的片段,此拼接片段通过Gateway系统重组至植物表达载体pK7GW1WG2,得到含反向重复拼接片段的植物表达载体pK450。冻融法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101后,叶盘法转化本生烟(Nicotiana benthamiana),经PCR检测,获得转基因植株。对T1代转基因植株分别人工接种3种病毒,66.7%的植株表现对PStV免疫,9%的植株表现对CMV-CA的恢复抗性,全部植株对PSV感病。siRNA的Northern blot结果表明,所有转基因烟草植株都含有病毒特异siRNA,siRNA含量随接种后时间延长而衰减。