Valsa侵染库尔勒香梨树后抗性酶活性变化规律

新疆阿克苏地区由Valsa mali var.pyri、Valsa sordida引起的腐烂病是制约库尔勒香梨发展的重要病害,为研究库尔勒香梨感染腐烂病后与防御酶活性的变化关系,以库尔勒香梨为试验材料,分别采集同一株树不同发病组织和不同发病程度枝条韧皮部,研究其抗性相关酶活性变化。结果表明:病害在完全侵入组织后,SOD活性呈下降的趋势,在发病组织,POD、CAT活性最高,PAL在病健交界处活性最高。随着发病程度的增加,SOD活性整体呈先上升后下降的趋势,POD活性呈逐渐上升的趋势,CAT活性先下降后上升,PAL活性先上升后下降,PPO总体呈下降趋势。库尔勒香梨抗性相关酶活性呈现不同变化响应Valsa侵染。在Valsa与库尔勒香梨互作系统中,抗性酶可作为抗病性和检测病害指标,为检测库尔勒香梨腐烂病发病程度提供理论依据。

不同种植区库尔勒香梨树腐烂病菌Cytospora pyri营养体亲和性研究

[目的]使用Nit突变体体系,探索来自新疆香梨种植区不同地理来源的腐烂病菌遗传多样性。[方法]首次使用Nit突变株技术(抗氯酸盐的硝酸盐利用缺陷突变体)对来自南疆3个不同种植区的13株库尔勒香梨树腐烂病菌Cytospora pyri的营养体亲和性进行了研究。[结果]13个菌株在含氯酸盐培养基(KPS)培养出115个Nit突变体,其中41个没有发生突变。在突变体稳定性鉴定中,鉴定出33个稳定的Nit突变体,82个不稳定的Nit突变体。产生的Nit突变体的表型85%被鉴定为NitD,15%被鉴定为NitB。[结论]获得2个Nit突变体,说明C.pyri的氮同化途径可能发生了2种突变。所有被检测的分离株都能够利用次黄嘌呤,使用次黄嘌呤的能力排除了钼辅助因子位点被阻断的可能性。

甘肃地区梨树腐烂病的病原种类鉴定

明确甘肃省梨树腐烂病病菌的分布、组成及其亲缘关系,为有效防治腐烂病及筛选抗病种质资源提供理论依据。以甘肃省8个市州主要梨产区不同品种梨树上典型腐烂病症状的枝干为材料,采用常规组织分离法分离纯化得到53株梨树腐烂病病菌,经柯赫氏法则验证,通过形态学及多基因序列(rDNA-ITS、EF-1α和tub2)构建系统发育树,明确致病菌种类及分类地位。结果表明,分离得到的53株菌株均与模式菌株Valsapyri聚为一支,支持率为99%,确定引起甘肃省梨产区梨树腐烂病的病原只有1种,即V.pyri(无性型为Cytosporamali),且菌株在PDA培养基上表现出不同类型的培养性状。

无机元素N、P、K含量与库尔勒香梨腐烂病严重度间的关联分析

以不同病害程度的库尔勒香梨树和果园为试材,测定其一年生枝条韧皮部N、P、K含量及土壤中N、P、K含量,在不同浓度梯度的N、P、K培养基上接种库尔勒香梨腐烂病菌,观察并记录菌落形态、生长速率及产孢情况,分析N、P、K含量与病害程度之间的相关性,研究了无机元素N、P、K与库尔勒香梨腐烂病之间的关系,以期为库尔勒香梨腐烂病的综合防治提供参考依据。结果表明:不同浓度N、P、K对菌落生长的影响表现为随着N含量的增加,病菌生长速率降低,随着P、K浓度的增加,病菌生长速率呈先上升后下降的趋势。库尔勒香梨腐烂病发病程度与土壤K含量及树体K含量呈显著负相关,与土壤及树体N/K、P/K比例均呈显著正相关,即N/K、P/K比例越高,腐烂病发生越严重。果园管理应适量施用氮肥和钾肥,可减轻库尔勒香梨腐烂病发生程度。

中药材黄连水浸提液对梨树腐烂病的室内防效评价

梨树腐烂病是危害梨树生产的重要病害之一,为探寻梨树腐烂病(Pear valsa canker)的绿色防治药剂,室内采用菌丝生长速率法和离体枝条打孔接种法,测定了不同浓度的黄连水浸提液对梨树腐烂病菌菌落生长的影响及其在离体梨树枝条上的保护作用。结果表明,不同浓度的黄连水浸提液对梨树腐烂病菌均有不同程度的抑制作用,其中浓度为5.0000%时抑菌率高达100%;当黄连水浸提液浓度为5.0000%和10.0000%时,病疤面积间无显著差异,室内防效分别高达75.8%和78.2%。表明不同浓度的中药材黄连水浸提液对梨树腐烂病均有一定防效,浓度为5.0000%时对菌丝的抑制作用和离体枝条保护作用最为经济有效。

梨腐烂病致病力的室内快速测定方法研究

【目的】为了研究建立我国梨腐烂病致病力室内快速、稳定的测定方法,【方法】以‘丰水梨’的离体枝条、叶片、嫩梢和果实为材料,采用不同方法造成伤口后接种梨腐烂病的强致病力菌株F-AH-3a,在25℃下保湿培养后观测各处理的发病程度,并在‘丰水梨’和‘康德梨’上用梨腐烂病致病力已知的菌株对测定方法进行验证。【结果】叶片伤口接种,叶正面的病斑较背面的大,经6针与1和3针刺伤处理产生的病斑大小之间存在显著性差异;嫩梢和果实伤口接种,不同处理产生的病斑大小之间无显著性差异;枝条伤口接种3d后,经打孔、环割、烫打及10针刺伤处理的枝条发病率均为100%,而经3针刺伤、烫伤和芽痕处理的分别为55%、40%和15%。前4种处理病斑的长度显著大于后3种处理。在‘丰水梨’和‘康德梨’品种上,用5个梨腐烂病致病力已知菌株对测定方法进行验证的结果表明,各菌株通过枝条打孔接种后产生的病斑,在其长度之间的差异与菌株致病力已知的强弱相吻合。【结论】采用枝条打孔接种法的测定效果显著、稳定,且操作简单,可用于梨腐烂病菌致病力的室内快速测定。

梨树腐烂病研究进展

梨树腐烂病(pear Valsa canker)是梨树的主要病害之一。综述了国内外在梨树腐烂病的发病症状、病原鉴定、致病力、病原菌侵染机理、病害发生流行规律及其防治技术等方面的研究进展,并探讨了该病害未来的研究方向与防治策略。

梨树腐烂病的病原菌鉴定和化学药剂筛选

为明确梨树腐烂病的病菌种类,对采自中国河北、山西和安徽3省症状疑似梨腐烂病的树皮与病枝进行病菌培养和分离纯化,根据病原菌的形态特征和致病性,结合rDNA-ITS序列分析,鉴定病原菌种类,并选用22种常用杀菌剂,通过离体抑菌试验,筛选出抑菌效果较好的药剂进行田间药效试验。结果表明:在分离纯化的6个菌株中有5个菌株形态特征相同,且与已报道的腐烂病病菌(Valsa mali var.pyri)形态特征相似;以这5个菌株菌丝接种梨树健康枝条后出现与田间相同的病症;病原菌rDNA-ITS克隆测序、BLASTn比对发现,这5个菌株为同一致病菌(登录号JQ618018),且与意大利梨腐烂病菌株(登录号DQ241769)、陕西梨腐烂病菌株(登录号GU174590)、新疆梨腐烂病菌株(登录号HM013819)的rDNAITS序列的同源性达到100%;另外1菌株与内生菌巴西拟隐盘孢菌Paraconiothyrium brasiliense的同源性达到99%;丙环唑等8种药剂对梨树腐烂病菌丝生长抑制力强,丁香菌酯等11种药剂对分生孢子抑制效果好,25%咪鲜胺乳油1 500倍液、20%丁香菌酯悬浮液165倍液与97%嘧菌酯原药15 000倍液对田间病斑治疗效果较好。根据试验结果,可以确定3省采样地区引起梨腐烂病的病原菌为Valsa mali var.pyri;咪鲜胺、嘧菌酯和丁香菌酯等3种杀菌剂可作为梨树腐烂病田间防治药剂。

梨树腐烂病抗性种质筛选及相关生理生化特性研究

以46份不同类型梨树种质资源的休眠期枝条为试材,连续2年分析枝条的腐烂病抗病性,并测定枝条韧皮部组织POD、SOD活性,以及总酚含量和组织疏松度;采用酶联免疫分析法(ELISA)测定抗病品种‘秋白’和感病品种‘茌梨’枝干中内源水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)的含量;并依据转录组文库中SA和JA合成相关基因(PAL、ICS、AOS和AOC)片段的序列信息,通过实时荧光定量(qRT-PCR)技术分析基因的相对表达量。结果表明:(1)不同类型的梨树种质资源之间腐烂病发病程度表现出较大的差异和多样性,并以秋子梨种类抗性最强,西洋梨抗性最弱。(2)梨树种质资源种类腐烂病发病程度与其枝条韧皮部POD、SOD活性和组织疏松度无显著相关性,与枝条韧皮部总酚含量呈显著正相关关系。(3)在病菌接种情况下,抗病品种‘秋白’枝干中SA和JA含量显著上升,同时其相关合成酶基因PAL和AOS表达量也显著升高,而感病品种‘茌梨’枝干中SA和JA含量变化不明显,相关合成酶基因PAL、ICS、AOS和AOC的表达量则显著下降。研究发现,梨树不同类型种质的腐烂病抗性有明显差异,其发病程度与枝条韧皮部总酚含量呈显著正相关关系;内源SA和JA可能参与抗病梨树种质资源对腐烂病的抵御过程。

产酶溶杆菌OH11代谢产物HSAF对梨树腐烂病的防治效果

HSAF(heat stable antifungal factor)是产酶溶杆菌Lysobacter enzymogenes OH11中分离鉴定的一种小分子广谱抗真菌和卵菌物质,为进一步明确HSAF防治梨树腐烂病的潜力,分别采用生长速率测定法、显微镜观察法和刮治涂抹法测定了HSAF对梨树腐烂病菌的室内毒力以及对梨树腐烂病的田间防治效果。结果表明,HSAF对梨树腐烂病菌有较强的生长抑制作用,EC50值为0.5μg/m L;HSAF可导致梨树腐烂病菌菌丝体出现扭曲、近顶端处分枝和顶端肿胀等畸形现象;40μg/m L HSAF凝胶剂对梨树腐烂病的涂治愈合率可达81.3%,与2.12%腐植酸铜水剂的涂治愈合率(85.3%)无显著差异;对于分枝裂口或冻伤处、向阴、主杆或中心枝上的病疤,经40μg/m L HSAF凝胶剂涂抹后的愈合率高于2.12%腐植酸铜水剂。对于剪锯口处和向阳或分枝上的梨树腐烂病病疤,经2.12%腐植酸铜水剂涂抹后的愈合率高于40μg/m L HSAF凝胶剂;两种药剂对不同位置病疤的涂治效果不同,可作互补使用。本研究结果为梨树腐烂病的田间防治提供了一种新的生防制剂,同时也可望为其他果树腐烂病害的防治提供生防药剂资源。

新疆库尔勒香梨腐烂病病原鉴定

【目的】对新疆库尔勒地区的香梨树上发生的腐烂病进行病原鉴定。【方法】采用组织分离法分离采集到的腐烂病病组织,用形态学与分子生物学方法对病原菌进行鉴定。【结果】从新疆库尔勒香梨腐烂病树上分离获得32个分离物,未发现有性型。形态学和分子生物学鉴定的结果表明:28个分离株的形态特征与Cytosperma sacculus(Schwein.)Gvrit的特征描述相吻合,二者在rDNA-ITS序列构建的系统发育树中聚为一类;剩下的4个分离株的形态符合C.schulzeri Sacc.&P.Syd的特征描述,且rDNA-ITS序列的同源性较高。【结论】新疆库尔勒香梨树腐烂病病原菌为C.sacculus(Schwein.)Gvrit和C.schulzeri Sacc.&P.Syd,其中C.sacculus是主要种。

我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省（市）梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为V.mali var.pyri。

腐烂病菌的GFP标记及其在梨叶片组织中的侵染和扩展观察

【目的】明确梨腐烂病菌强、弱致病力菌株在梨树叶片组织中的侵染及扩展情况。【方法】利用农杆菌介导的遗传转化(agrobacterium-mediated transformation technique,ATMT)方法对梨腐烂病菌强、弱致病力菌株进行绿色荧光蛋白(green looresent protein,GFP)标记,并筛选出和野生型菌株比较在生长速度、培养特性以及致病力都没有发生显著变化的阳性转化子菌株;利用荧光显微技术观察其在梨树叶片组织中的侵染和扩展,比较强、弱致病力菌株的侵染差异。【结果】强、弱致病力菌株在叶片上侵染存在差异。菌丝主要在叶片的上表皮扩展,菌丝扩展前端的叶片组织颜色发生变化,形成一段变色带,强致病力菌株侵染形成的变色带较弱致病力菌株形成的变色带宽,强致病力菌株菌丝在叶片组织上的分布较稀疏。【结论】梨腐烂病菌菌丝主要在叶片的上表皮组织扩展;强致病力菌株的侵入能力较强,其在叶片上扩展时菌丝分布较稀疏,扩展前端形成的变色带宽。

梨树腐烂病田间防治药剂筛选及其综合防治效果

【目的】筛选对梨树腐烂病防治效果最佳的药剂,为梨树腐烂病的绿色防控及科学防治提供依据。【方法】以19a(年)生‘早酥’梨为试材,通过田间试验比较10种药剂对梨树腐烂病刮除病斑后的治愈率、愈合宽度和复发率,对梨树腐烂病的防治效果进行筛选,将筛选出的较好药剂进行田间综合防治试验。【结果】拂蓝克、腐殖酸铜和40%氟硅唑乳油500倍液处理后治愈率较高,与其他药剂防效存在显著差异(α=0.05),拂蓝克、腐殖酸铜和甲硫·萘乙酸田间试验具有很好的防治效果。【结论】拂蓝克、腐殖酸铜和甲硫萘乙酸可作为梨树腐烂病田间综合防控药剂。

库尔勒香梨腐烂病发生及防治药剂筛选

【目的】研究新疆库尔勒香梨腐烂病发生情况,筛选适用于树干淋刷药液技术的腐烂病防治药剂,为香梨腐烂病防治提供理论依据。【方法】采用五点取样法,调查样地香梨腐烂病发生情况。药剂筛选采用树干淋刷药液方法,定期调查处理病斑复发率,测量病斑愈合宽度和愈合面积,综合评价供试药剂对香梨腐烂病田间防治效果。【结果】库尔勒香梨腐烂病病株率为48.0%~92.0%,平均病株率为65.20%,平均病斑块为7.05块/株,病斑发生部位主要分布于分枝上。施药90 d所有药剂处理病斑愈合情况良好,在病斑愈合宽度上,10%苯醚甲环唑平均愈合宽度达到11.0 mm,显著高于其他供试药剂;在病斑愈合面积比方面,3%甲基硫菌灵和10%苯醚甲环效果最好,平均愈合面积比分别达到71.2%、63.6%。【结论】库尔勒香梨腐烂病发生普遍且较重,平均发病率达65.20%;综合药效结果排序,10%苯醚甲环唑在病斑愈合效果表现最好,且适用于树干淋刷药液技术,该药剂在香梨腐烂病防治上使用。

梨树腐烂病在香梨树体上的空间分布特点

为了给香梨树上梨树腐烂病制定有效的调查方法和防治措施提供依据,调查研究了梨树腐烂病在新疆阿克苏地区和库尔勒市香梨树的危害情况及其在树体上的空间分布特点。结果表明:香梨园中梨树腐烂病病株率达100%,其发病程度与梨园的管理水平密切相关。梨树腐烂病在香梨树主干上较少发生,发病率仅1.02%。香梨树不同轮枝(一轮枝、二轮枝、三轮枝)的病斑数、枯枝数差异均极显著;在不同方位(东、西、南、北)上病斑数、枯枝数差异均不显著;在主枝和侧枝上病斑数差异极显著,枯枝数差异不显著;在枝条阴面和阳面病斑数差异极显著。梨树腐烂病主要发生在香梨树的第一轮枝,随着轮枝数的增加,病斑数和枯枝数均显著减少;在香梨树不同方位分布差别不大;其危害部位主要集中在主枝和侧枝,主枝发病较侧枝严重,枝条的阴面较阳面严重。

山西梨树腐烂病发病情况调查

为了摸清山西省梨树腐烂病发生规律,调查了梨树腐烂病在山西省5个梨区的为害情况及其在树体上的分布特点。结果表明,梨树腐烂病在5个梨区普遍发生,在原平和祁县酥梨园较严重,病株率达100%;腐烂病病斑发生方位大多在向阳面,所占比例均高于80%;在原平和祁县酥梨园主干发病率小于分枝发病率,在平遥酥梨园、隰县玉露香梨园和运城红香酥梨园结果与之相反;冻伤或日灼是造成山西梨树腐烂病最主要的因素。

转Lchi1烟草T_2代对梨腐烂病菌的抗性研究

获得转化梨几丁质酶基因Lchi1的烟草,检测组成型表达Lchi1基因烟草是否能提高对梨腐烂病菌(Valsa ceratosperma)的抗性,从而初步确定Lchi1基因的功能,为进一步开展梨抗腐烂病分子育种工作提供参考。构建梨几丁质酶基因Lchi1的植物表达载体,通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草,进而对转化的烟草T2代进行PCR及RT-PCR检测。利用离体叶片接种法,更直观地验证转基因烟草对梨腐烂病菌的抗性。Lchi1基因已经整合到烟草基因组中,并在烟草T2代中有效表达,在接种腐烂病菌后转基因烟草较未转基因烟草的抗腐烂病菌能力明显增强。梨几丁质酶基因Lchi1与腐烂病抗性相关联,可作为今后梨的抗腐烂病分子育种研究重要的基因来源。

我国主要梨产区梨腐烂病菌培养表型与致病力差异的研究

[目的]旨在研究我国主要梨产区不同培养表型的梨腐烂病菌的致病力差异。[方法]从全国13个省、市、自治区采集梨腐烂病样品,通过组织分离法共分离鉴定出465株梨腐烂病菌,在PDA培养基上观察其培养表型并进行分类;挑选出128株菌株,采用打孔法接种菌丝块测定各菌株在‘库尔勒香梨’上的致病力。[结果]根据所分离的菌株在PDA培养基上的菌落颜色及形态不同粗分为5类,各类菌株均能产生多种类型的子座,菌株的不同培养性状与其地理来源并无关联;在梨果上,不同分离菌株的致病力存在明显分化,但是菌株的致病力差异与其地理来源及培养性状并无关联,且将菌株致病力进行强、中、弱划分后,发现中等致病力的菌株占64%,为优势菌株。[结论]我国的梨腐烂病菌存在多样的培养性状,且菌株的致病力分化明显,中等致病力的菌株占多数,但是菌株的培养性状、致病力及其地理来源这三者之间并无关联,因此要深入了解梨腐烂病菌,还需从菌株的致病基因入手,采用分子生物学手段对其进行研究。

梨树腐烂病拮抗真菌JK2的分离和鉴定

【目的】分离鉴定对梨树腐烂病具有拮抗活性的内生真菌,为梨树腐烂病生物防治提供新的资源菌。【方法】利用组织分离法从梨树腐烂病发病枝条中分离内生菌,通过平板对峙实验筛选对梨树腐烂病菌具有拮抗作用的菌株。结合形态学和分子生物学手段,分析和确定拮抗菌株的种属。利用离体梨树枝条鉴定拮抗内生真菌对腐烂病的防治效果。【结果】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株对梨树腐烂病菌具有强烈拮抗活性的菌株JK2,抑制率超过95%。JK2上清液对梨树腐烂病菌同样具有抑制活性。经鉴定,菌株JK2为青霉属产紫青霉。离体梨树枝条鉴定结果显示,JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果。【结论】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株具有拮抗活性的内生真菌JK2,该菌株是一株新的梨树腐烂病生防菌资源,具有潜在的应用价值。