脊髓Pellino1在瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏中的作用及机制

目的:观察脊髓Pellino1 (Peli1)在瑞芬太尼诱导的痛觉过敏中的作用及可能机制。方法:成年雄性SD大鼠随机平均分为6组(n=6):包括生理盐水组(S组)、瑞芬太尼组(R组)、生理盐水+scrambled shRNA组(S+shscr组)、瑞芬太尼+scrambled shRNA组(R+shscr组)、生理盐水+Peli1 shRNA组(S+shPeli1组)、瑞芬太尼+Peli1shRNA组(R+shPeli1组)。R组、R+shscr组、R+shPeli1组大鼠通过尾静脉连续输注瑞芬太尼4μg/(kg·min) 2 h,建立瑞芬太尼诱导的痛觉过敏模型;S+shscr组、S+shPeli1组、R+shscr组、R+shPeli1组于瑞芬太尼给药前连续3天鞘内注射shscr或Peli1sh RNA;分别采用机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL)评价大鼠机械痛敏和热痛敏;Western blotting法和RT-PCR法检测Peli1、Iba1、GFAP蛋白及m RNA表达;ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β。结果:与S组相比,R组瑞芬太尼输注后6 h、1天、3天MWT和TWL明显降低(P <0.001);与R+shscr组相比,R+shPeli1组大鼠瑞芬太尼输注后6 h、1天、3天MWT和TWL明显升高(P <0.05, P <0.001);与瑞芬太尼输注前相比,R组大鼠瑞芬太尼输注后6 h、1天、3天脊髓Peli1蛋白及m RNA表达显著升高(P <0.001);与S+shscr组相比,R+shscr组大鼠瑞芬太尼输注后1天Iba1蛋白及m RNA以及TNF-α、IL-6和IL-1β表达明显升高(P <0.001);与R+shscr组相比,R+shPeli1组大鼠瑞芬太尼输注后1天Iba1蛋白及m RNA以及TNF-α、IL-6、IL-1β表达明显降低(P <0.001)。结论:Peli1参与瑞芬太尼诱发的痛觉过敏,其机制可能与脊髓小胶质细胞激活及其炎症反应有关。

脊髓Pellino1敲减对长春新碱诱导大鼠神经病理性痛的影响

目的探讨敲减脊髓Pellino1(Peli1)对长春新碱诱导大鼠神经病理性痛的影响及其机制。方法将正常大鼠行鞘内置管手术,术后随机分为干扰短发夹RNA(shscr)组和Peli1短发夹RNA(sh Peli1)组,分别于鞘内置管术后第2天(D2)至D4每天1次鞘内注射表达shscr或sh Peli1的慢病毒。将正常大鼠行鞘内置管手术,术后随机分为正常对照组、化疗诱导神经病理性痛(CINP)组、CINP+shscr组和CINP+sh Peli1组,除正常对照组外,其余各组从D5开始隔日ip给予长春新碱125 mg·kg^(-1)(共4次)建立CINP模型,CINP+shscr组和CINP+sh Peli1组大鼠分别于D2~D4每天1次鞘内注射shscr和sh Peli1。分别采用机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)评价大鼠机械痛觉过敏和热痛觉过敏;Western印迹法检测大鼠脊髓Peli1、小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白1(Iba1)和星形胶质细胞标志物胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平;免疫荧光化学检测脊髓组织切片Iba1蛋白表达水平;RT-PCR法检测脊髓Peli1和Iba1 mRNA表达水平;ELISA检测脊髓组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β含量。结果与shscr组相比,在D12,sh Peli组MWT和TWL无明显差异,而脊髓Peli1蛋白和mRNA表达均明显下调(P<0.05)。与正常对照组比较,CINP模型组大鼠在D8,D10和D12 MWT和TWL均明显降低(P<0.01);在D12,CINP模型组大鼠脊髓组织中Peli1和Iba1蛋白及mRNA表达水平、p38 MAPK,JNK和ERK1/2蛋白磷酸化水平及脊髓匀浆中TNF-α,IL-6和IL-1β含量均明显上调(P<0.01)。与CINP+shscr组比较,CINP+sh Peli1组在D8,D10和D12,MWT和TWL明显增加(P<0.05,P<0.01);在D12,脊髓Peli1和Iba1蛋白和mRNA表达水平、p38 MAPK,JNK和ERK1/2蛋白磷酸化水平及脊髓组织中TNF-α,IL-6和IL-1β含量均明显下调(P<0.05,P<0.01)。而在D12,各组大鼠脊髓GFAP蛋白和mRNA表达均无明显差异。结论敲减脊髓Peli1明显抑制长春新碱诱导的大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓小胶质细胞活化和MAPK信号通路介导的炎症反应有关。

泛素连接酶Pellino1蛋白研究进展

Pellino1蛋白是近年来新发现的一种泛素连接酶,在固有免疫细胞和获得性免疫细胞中参与蛋白降解、蛋白间相互作用等,与炎症和自身免疫密切相关。本文就Pellino1蛋白的研究进展作一综述。

Pellino1 SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF-κB信号转导的影响

目的:研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子-6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)介导的核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号转导的影响。方法:构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒,与TRAF6、泛素(ubiquitin,Ub)质粒共转染至HEK-293细胞中,荧光显微镜观察转染效率,免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用;同时,检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导炎症反应,分提胞浆胞核蛋白,Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的磷酸化和NF-κB P65的核转位,分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF-κB信号通路的影响。结果:与野生型Pellino1相比,SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平,而且可增加其与TRAF6的相互结合作用,并增强TRAF6的泛素化修饰;LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF-κB P65的核转位,转染使Pellino1SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF-κB信号激活。结论:Pellino1 SUMO修饰突变,可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合,增强TRAF6的泛素化,最终促进TRAF6介导的NF-κB信号通路的激活。

Pellino 1、锌指蛋白A20、NF-κB P65及IL-6在胎膜早破中的表达及意义

目的探讨胎膜早破(PROM)患者胎膜组织Pellino 1、锌指蛋白A20、核因子-κB(NF-κB)P65及羊水白细胞介素-6(IL-6)的表达及其相关性,为深入了解胎膜早破的发生发展机制提供新途径。方法分别选择30例足月胎膜早破(tPROM)、未足月胎膜早破(pPROM)患者及正常妊娠晚期妇女(对照组),应用免疫组化染色法及Western blot检测胎膜组织Pellino 1、锌指蛋白A20、NF-κB P65表达部位及含量,ELISA法测定羊水中IL-6水平,并分析蛋白表达的相关性。结果 PROM组胎膜组织Pellino 1、NF-κB P65及羊水IL-6表达水平高于对照组(P<0.05),胎膜组织锌指蛋白A20表达低于对照组(P<0.05);pPROM组胎膜组织Pellino 1、NF-κB P65表达及羊水IL-6水平高于tPROM组(P<0.05),pPROM组锌指蛋白A20表达低于tPROM组(P<0.05)。胎膜组织中Pellino 1、NF-κB P65表达与羊水IL-6水平呈正相关(P<0.01),锌指蛋白A20表达与羊水IL-6水平呈负相关(P<0.01)。结论 Pellino 1、NF-κB P65及炎性细胞因子IL-6表达水平升高、锌指蛋白A20表达水平降低在胎膜早破发生中发挥重要作用。