HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸组织中的细胞定位及表达差异分析

热休克蛋白A2(HSPA2)是热休克蛋白HSP70家族重要成员,能够促进睾丸支持细胞增殖;精子发生相关基因6(SPATA6)能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统,影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中,两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA6在雄性彭波半细毛羊生殖过程中的表达规律和细胞定位,以不同年龄阶段(3月龄、12月龄和3岁龄)彭波半细毛羊睾丸组织为研究对象,运用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法(IHC)从转录和翻译水平检测了HSPA2和SPATA6在不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的表达水平和分布模式,分析预测HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸发育和精子发生过程中的调控作用。结果表明:12月龄和3岁龄彭波半细毛羊睾丸组织中HSPA2 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P<0.01);12月龄SPATA6 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P<0.01),显著高于3岁龄(P<0.05)。不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的支持细胞和间质细胞中HSPA2和SPATA6蛋白均有分布。初步推断,HSPA2和SPATA6的表达水平变化在调控彭波半细毛羊精子发生过程和促进精子成熟中具有重要作用。

彭波半细毛羊屠宰性能与肉质特性研究

为更好地开发利用彭波半细毛羊遗传资源,从西藏自治区林周县种羊场选取相同饲养管理条件下的8月龄彭波半细毛公羊和母羊各8只,测定了屠宰性能和肉质特性。结果表明,8月龄彭波半细毛母羊的背膘厚度、背最长肌干物质含量、脂肪含量、必需氨基酸含量、必需氨基酸/氨基酸总量(EAA/TAA)、必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)和n-6 PUFA含量均显著高于公羊(P<0.05);公羊背最长肌的亮度(L^(*))、剪切力、水分含量、鲜味氨基酸、非必需氨基酸/氨基酸总量(NEAA/TAA)、二十碳二烯酸含量和花生四烯酸含量均显著高于母羊(P<0.05)。且公、母羊肉的EAA/TAA均超过40%,EAA/NEAA均在67%左右。综上说明,8月龄彭波半细毛羊羊肉属于优质蛋白质,母羊肉的嫩度和营养价值优于公羊肉,公羊肉的色泽更鲜亮、口感更鲜美。

周岁彭波半细毛羊羊毛品质分析

为了解彭波半细毛羊的羊毛品质,随机选择1周岁的彭波半细毛羊公羊7只,母羊21只,采集其肩部、体侧和股部羊毛,统计分析平均纤维直径、洗净率、毛丛自然长度、卷曲度、伸直率和油汗比例等指标。结果表明,周岁公羊的肩部羊毛纤维直径显著低于母羊(P<0.05),公羊各部位羊毛毛丛自然长度极显著低于母羊(P<0.01),公羊肩部羊毛卷曲度极显著高于母羊(P<0.01),公羊各部位羊毛的油汗比例极显著低于母羊(P<0.01)。综上,彭波半细毛羊的羊毛品质较好,但其色度和公羊的毛丛自然长度仍有改善的空间。

彭波半细毛羊羊肉风味物质的鉴定与分析

为探究彭波半细毛羊羊肉的挥发性风味物质,选择体重相近、健康状况良好的8月龄公母羊各10只,屠宰后采集胴体左侧部位的背最长肌,采用顶空气相色谱-离子迁移谱(HS-GC-IMS)联用技术对肉品挥发性风味物质进行鉴定。结果表明,彭波半细毛羊公、母羊肉品中均鉴定出40种挥发性物质,其中35种物质被定性,包括醛类5种、酮类6种、醇类5种、酯类4种、烃类6种、杂环类9种;有5种未被定性出明确化合物。离子迁移差异图谱和指纹图谱结果显示,母羊与公羊肉样中挥发性风味物质差异较大,其中母羊B2、B4和B5号样品中15种物质(如2-庚酮、1-戊醇等)的含量高于公羊。对公、母羊肉品中挥发性风味物质含量的分析结果表明,母羊肉品中的(E)-2-辛烯醛、3-壬烯-2-酮和2-甲基吡嗪含量显著高于公羊(P<0.05);公羊肉品中糠醇单聚体含量显著高于母羊(P<0.05);其余已定性的物质含量在公、母羊肉品间无显著差异(P>0.05)。综上说明,彭波半细毛羊母羊肉品中有含量较高的香味物质。

补饲精料对西藏彭波半细毛羊羊肉品质的影响

本试验旨在研究补饲精料对西藏彭波半细毛羊羊肉品质的影响。选择30只成年彭波半细毛羊母羊,按照同质原则随机分为3组:放牧不补饲(对照,G1)组、补饲精料200 g/d(G2)组、补饲精料400 g/d(G3)组,每组10只。每天19:30补饲,正试期75 d。正试期结束屠宰,采集背最长肌测定营养物质含量和组织结构特征。结果表明:高水平补饲精料提高了母羊总干物质采食量,G3组平均日增重显著高于G1、G2组(P<0.05);补饲精料对羊肉p H1 h、p H24 h、滴水损失及水分和粗灰分含量无显著影响(P>0.05),但G3组的熟肉率,粗蛋白质、肌内脂肪含量,肌纤维密度显著高于G1组(P<0.05);G2、G3组羊肉总氨基酸、必需氨基酸和天冬氨酸含量显著高于G1组(P<0.05),G3组苯丙氨酸、赖氨酸含量显著高于G1组(P<0.05),G3组苏氨酸、谷氨酸含量有高于G1组的趋势(0.05≤P<0.10);补饲精料对羊肉饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量没有显著影响(P>0.05),G3组C18∶1 trans-9含量有低于G1组的趋势(0.05≤P<0.10)。上述结果表明,补饲精料能显著提高彭波半细毛羊羊肉营养价值,改善肉质嫩度,每只补饲400 g/d优于200 g/d。

瓦斯抽采中新型封孔材料及工艺的应用研究

为解决杉木树煤矿瓦斯抽采钻孔封孔质量差、抽采负压小、抽采效果差等问题,采用了新型矿用封孔材料PD及封孔工艺。该材料采用了微胶囊化技术,使得该材料的浆体在缓慢凝固的过程中体积逐渐膨胀,并渗透到钻孔周边微裂隙,形成对钻孔周围裂隙的封堵;该材料应用过程中,辅以膨博封孔剂作为注浆堵头,从而形成两端封堵中间注浆的"两堵一注"的封孔工艺。应用结果表明,与传统封孔工艺相比,抽采孔平均瓦斯体积分数从22.6%提高到了36.8%;平均抽采负压从2.8 kPa提高到9.1 kPa;平均单孔瓦斯纯流量从9.42 L/min提高到44.53 L/min。

补饲对西藏彭波半细毛羊产肉性能的影响

为了研究秋季补饲精料对彭波半细毛羊母羊产肉力的影响,试验选择30只体重相近[(26.98±0.50)kg]的成年彭波半细毛羊母羊,随机分为3组,即完全放牧不补饲组(对照组,G1组)、每天每只补饲200 g组(G2组)、每天每只补饲400 g组(G3组),试验羊白天放牧,晚上归牧后补饲全价配合精饲料,试验期为87 d,饲养试验结束从每组挑选6只体重相近的进行屠宰试验。结果表明:各处理组体重无显著差异(P>0.05),但G3组的总增重、平均日增重(ADG)显著(P=0.006;P=0.009)高于G2组和G1组;G3组的料重比最高(P=0.023),而G2组与G1组无显著差异(P>0.05);8月份增重速度最快(P<0.001),料重比最高(P<0.001)。宰前活重、胴体重和除脾脏外的消化器官重量在组间差异不显著(P>0.05),G3组、G2组的脾脏重量显著(P=0.008)高于G1组;G3组的屠宰率、背膘厚和眼肌面积显著(P=0.049;P=0.008;P=0.021)高于G1组,G2组与G1组无显著差异(P>0.05)。说明补饲精料能显著提高彭波半细毛羊的产肉力和饲料转化效率,每天每只补饲400 g效果较优。

拉萨河谷冬春季放牧与舍饲彭波半细毛羊牧草、血液及被毛矿物质含量

为分析拉萨河谷冬春季放牧与舍饲彭波半细毛羊采食牧草、血液及被毛中主要矿物质元素的含量,试验选用1.5岁左右彭波半细毛羊母羊60只,随机分为放牧组(GZ)和舍饲组(IF)进行试验。结果表明:试验所用牧草矿物质元素,除钼外其他元素含量均为绿麦草>冬季天然牧草。冬季天然牧草磷、镁、硫、铜、锰、锌和硒及绿麦草镁含量低于正常范围。(2)舍饲组血清钙(P=0.026)、硫(P=0.030)、铜(P=0.011)和钼(P=0.014)含量高于放牧组,镁(P=0.090)、铁(P=0.071)、锌(P=0.083)和碘(P=0.066)含量有增高的趋势;其被毛钙(P=0.003)、磷(P=0.006)、镁(P<0.001)、铁(P=0.022)、锰(P<0.001)和碘(P=0.012)含量均高于后者,铜含量有增高的趋势(P=0.068)。在血液和被毛中,放牧组血清铜、锰及被毛铜、锰和硒含量及舍饲组血锰及被毛锰、硒含量均低于推荐值。以上结果表明,拉萨河谷冬春季放牧彭波半细毛羊钙、铁、钼和碘充足,但磷、镁、硫、铜、锰、锌和硒缺乏或不足;舍饲(以谷物为主的精补料+绿麦草干草)能有效解决磷、镁、硫、铜、锌和硒的缺乏问题,但锰仍需补充。

产双羔彭波半细毛羊发情期卵巢基因表达差异研究

彭波半细毛羊是西藏自治区第一个国家级家畜新品种,对其产羔性状的研究有助于推动藏绵羊繁殖力研究工作。为研究产双羔彭波半细毛羊发情期内卵巢基因的特异调控模式,采用转录组测序对其差异表达基因进行了筛选和分析。结果发现,双羔组相对于单羔组有1 021个基因表达上调,1 468个基因表达下调。GO和KEGG分析发现,上调基因主要与细胞膜结构相关,下调基因主要与物质代谢等相关。其中,上调基因显著富集于与细胞膜相关的细胞粘附、细胞运动、物质运输、信号转导等生命活动。研究结果表明,双羔组卵巢内细胞的物质运输和信号转导频率加快,以促进卵泡的分化和发育;同时,双羔组卵巢内细胞的粘附及运动功能增强,有利于卵母细胞的发育和成熟卵子的排出。此外,卵巢中细胞粘附因子、TGF-beta信号通路和溶质运载蛋白家族基因的上调表达可作为彭波半细毛羊产双羔性状的潜在信号进行更深入的研究。研究结果不仅有利于对彭波半细毛羊产双羔性状的研究和利用,更有利于人们对藏绵羊繁育力的深入研究。

彭波半细毛羊羊毛品质分析研究

彭波半细毛羊是西藏和平解放后用引进的苏联美利奴和新疆细毛羊杂交改良当地彭波羊的基础上,引入了茨盖、边区莱斯特等半细毛羊品种进行多品种复合杂交育成的半细毛羊新品种。以毛用为主,具有良好的产毛性能。彭波半细毛羊一级成年公、母羊毛长分别为10.56cm、10.8cm,剪毛量分别5.0kg、2.5kg,剪毛后体重分别71.2kg、29.1kg,毛长比当地河谷羊分别增加3.35cm、3.06cm;剪毛后体重分别增加41.92kg,10.38kg,羊毛综合品质达到半细毛羊的优良品质特征,净毛率达到60%以上,纯白率达到86.47%,主体支数为48～58支,均呈正态分布,羊毛干态单纤维强力超过了优质羊毛的干态单纤维强度,指标为0.9-1.6Cn/dtex,化学组成除碳、氮元素外,其他均高于林肯羊,氨基酸总量达到80%,羊毛异质率下降到5%以下。

超临界CO2萃取彭波半细毛羊羊毛脂的研究

以彭波半细毛羊羊毛为原料,开展超临界CO2萃取羊毛脂的工艺研究.通过单因素试验探讨各因素对羊毛脂得率的影响,采用正交试验法优化超临界CO2萃取羊毛脂的工艺参数,采用GC-MS法,分析羊毛脂的脂肪酸组成及含量.结果表明:超临界CO2萃取羊毛脂的最佳工艺参数为萃取温度40℃、萃取压力35MPa、萃取时间2.5h,在此工艺条件下羊毛脂的得率可达10.2%.经超临界CO2萃取技术所得的彭波半细毛羊羊毛脂呈淡黄色、澄清透明、无氧化酸败等异味,其脂肪平均含量为93.70%,硫代巴比妥酸值(TBA值)为0.14.羊毛脂中的脂肪酸主要有棕榈酸、油酸以及硬脂酸,相对含量分别为25.71%、43.62%、17.34%,不饱和脂肪酸占52.30%.

放牧与舍饲对彭波半细毛羊瘤胃细菌群落的生物学信息影响

旨在通过不同蛋白质、非纤维性碳水化合物(NFC)和纤维素含量对瘤胃微环境细菌群落结构的影响研究,阐明瘤胃优势菌群结构的消长情况,清晰地了解瘤胃微生物对养分的依赖程度,以期为西藏传统放牧补饲及规模化养殖营养配比奠定理论基础。本研究选用年龄2岁左右,体重相近((23.77±2.34)kg)的健康彭波半细毛母羊20只,放牧组及舍饲组各10只(每组各2个重复,每个重复5只)。采用凯氏定氮法、范氏(van soest)法和差值法分别测定放牧组可饲用牧草混合样、舍饲组饲草的粗蛋白、纤维素、NFC含量。饲养半年后,抽取瘤胃液,提取总DNA,构建重组标准质粒对瘤胃细菌进行绝对荧光定量(qRT-PCR)研究。结果:1)在门水平上,发现优势菌群集中在拟杆菌门,其在放牧组的丰度((49.52±6.07)%)比舍饲组((55.52±12.18)%)低6.00%,但差异不显著(P>0.05);放牧组厚壁菌门的丰度((43.28±4.59)%)比舍饲组((36.68±9.78)%)高6.60%,两组差异显著(P<0.05);放牧组螺旋体门的丰度((1.99±1.75)%)比舍饲组((0.76±0.59)%)高1.23%,两组差异显著(P<0.05)。2)通过PLS-DA和LEfSe分析发现,两组间均差异显著的主要细菌有:纤维素或其代谢产物主要依赖菌(放牧组)为假丁酸弧菌属(Pseudobutyrivibrio)、月形单胞菌属(Selenomonas)、粪球菌属(Coprococcus)、梭菌属(Clostridium)、厌氧弧菌属(Anaerovibrio)、毛螺旋菌科下一属(Shuttleworthia)、类普雷沃氏菌科下一属(CF231)、丁酸弧菌属(Butyrivibrio)、类普雷沃氏菌科下一属(YRC22)、毛螺菌属(Lachnospira)、毛螺菌科下一属(Moryella);高蛋白和NFC或其代谢产物主要依赖菌(舍饲组)为脱硫叶菌属(Desulfobulbus)、奇异菌属(Atopobium)、韦荣球菌科下一属(p-75-a5)、普氏菌属(Prevotella)、布劳特氏菌属(Blautia)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)和链球菌属(Streptococcus)。结果说明,合理蛋白质能量水平的饲料,不仅利于蛋白、淀粉依赖菌的增殖,也有利于主要纤维降解菌(瘤胃球菌属(Ruminococcus))和协同纤维降解菌(普氏菌属(Prevotella))的增殖。同时,舍饲组中纤维素分解菌(厚壁菌门(Firmicutes)和螺旋体门(Spirochaetes))的整体丰度值出现显著下降。

彭波半细毛羊BMP15和BMPR-IB基因突变与其产羔性的相关分析

BMP15基因(bone morphogenetic protein 15,BMP15)和BMPR-IB基因(bone morphogenetic protein 1beta,BMPR-IB)是影响绵羊排卵率和产羔数的主效基因,对绵羊多羔性状有明显加性效应,可作为检测绵羊繁殖力的主要辅助标记.利用操作简便、灵敏度高等特点的高分辨率熔解曲线分析(High resolution melting curve,HRM),并结合测序技术,对63只彭波半细毛羊(产单羔羊56只、产双羔羊7只)BMP15和BMPR-IB基因的常见突变区域进行突变分析.结果表明:所有样本BMP15基因第718位、第747位、第755位、第871位和第896位,BMPR-IB基因233位和746位均未见DNA突变;仅23个样本的BMPR-IB基因1 078位发现T到C的杂合性突变.但经相关性检验分析,发现该杂合性突变与彭波半细毛羊的双羔性无关.

象雄半细毛羊与澎波半细毛羊血液生理生化指标分析

为了明确高海拔环境下绵羊血液生理生化指标参考范围,试验采用动物全自动血细胞分析仪和自动生化分析仪对象雄半细毛羊与澎波半细毛羊血液生理生化指标进行了测定。结果表明:象雄半细毛羊血液中白细胞数及总蛋白、胆固醇含量极显著高于澎波半细毛羊(P<0.01),肌酐含量、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度显著高于澎波半细毛羊(P<0.05),红细胞数和红细胞压积显著低于澎波半细毛羊(P<0.05),丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和谷氨酰转移酶活性极显著低于澎波半细毛羊(P<0.01)。

彭波半细毛藏系母绵羊AMH激素含量与年龄的相关性分析

通过测定彭波半细毛藏系母绵羊AMH激素含量,判定不同年龄阶段母羊的卵巢储备功能,确定无繁殖能力母羊的年龄上限,提高藏系绵羊的养殖效率。试验通过采集0.5~9.5岁不同年龄彭波半细毛藏系母绵羊颈静血每组各5只,1500 r/min离心15 min后取血清,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定0.5~9.5岁彭波半细毛藏系母绵羊50个样本中的AMH血清含量。结果表明,彭波半细毛藏系母羊在0.5~1.5岁阶段AMH含量相对最高,分别为7.6774±3.1806 pg/mL和8.0673±2.8938 pg/mL;2.5~5.5岁AMH含量从5.5628±2.2902 pg/mL下降到5.4551±0.9973 pg/mL,呈逐渐下降趋势;6.5岁开始下降急剧直至9.5岁1.0402±0.5817 pg/mL。此外,4.5岁、6.5岁、8.5岁和9.5岁分别与0.5~1.5岁差异极显著(P<0.01);6.5岁与2.5岁、5.5岁,7.5岁与0.5~1.5岁,8.5岁与2.5岁,9.5岁与5.5岁都差异显著(P<0.05);6.5岁之后各年龄段均不显著,且从6.5岁开始AMH浓度含量低于3.0000 pg/mL以下。结果表明,彭波半细毛藏系母绵羊AMH含量随年龄的增高而降低,呈负相关,说明卵巢储备功能随之减弱,从6.5岁开始卵巢储备功能降低至无繁殖能力,可界定为淘汰年龄上限。

产双羔及单羔彭波半细毛羊发情期卵巢中的差异表达蛋白

绵羊的产羔性状研究对于提升绵羊繁育力至关重要,彭波半细毛羊作为西藏第一个国家级绵羊新品种,对其产双羔的机制研究能够有力推动藏系绵羊的人工繁育工作.采用基于TMT标记的定量蛋白质组学方法,对发情期产双羔彭波半细毛羊卵巢的特异表达蛋白和调控机制进行系统研究.共检测到6446种彭波半细毛羊卵巢蛋白,其中双羔组有116种蛋白相比单羔组出现了上调表达,171种蛋白出现了下调表达.通过对差异表达蛋白的功能分析,发现产双羔绵羊卵巢中蛋白的表达合成及运输等生物过程显著增强,同时细胞的增殖、运动及信号转导等生理活动也更加活跃.另一方面,产双羔绵羊卵巢中的脂肪酸降解、脂类代谢、氨基酸等小分子化合物的降解和代谢明显下降.此外,产双羔绵羊卵巢细胞中的糖酵解活动有所增强,而三羧酸循环有所减弱.上述结果表明产双羔彭波半细毛羊卵巢内的蛋白表达调控机制能满足更强的卵泡发育和排卵活动需求,从而促进卵泡的发育及成熟卵子的排出;一些有机小分子催化酶出现了明显的特异表达,作为其底物的小分子有机物可以作为产双羔的潜在标志物进行更深入的研究;结果可促进对彭波半细毛羊产双羔性状及藏系绵羊繁育力的深入研究.

基于非靶向代谢组学分析放牧与舍饲条件下彭波半细毛羊代谢特征

放牧与舍饲环境下,因养分不同,会引起家畜相应生理机能和代谢机理变化。探究西藏彭波半细毛羊在两种环境下代谢通路的差异情况,为放牧条件下藏系绵羊合理补饲和全价舍饲养殖饲草配方提供可行的理论和方法。采用非靶向代谢组学方法,测定放牧与舍饲环境下彭波半细毛羊血清中代谢物的沉积量与变异关系,与人类代谢组学数据库(HMDB)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行比对,找出与之相对应的代谢通路,并分析其原因。结果发现24种代谢物存在显著性差异(P<0.05),其中放牧组血清沉积代谢物肌醇-1-磷酸盐、赖氨酸、非对称二甲基精氨酸、鸟氨酸-1,5-丙酰胺和鸟氨酸差异显著(P<0.01);舍饲组血清沉积代谢物3-乙基苯酚、3-羟基丁酸、4-羟基脯氨酸和多聚谷胺酸差异显著(P<0.01)。与24种显著代谢物关联的代谢通路有23种,两种模式存在8种显著差异的代谢通路(P<0.05)。采用原始数据差异性、Holm-Bonferroni差异性、错误发现率(FDR)及通路拓扑等分析法,发现低蛋白饲料主要影响放牧组的缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成代谢通路,对精氨酸和鸟氨酸代谢通路也存在影响,即蛋白合成与机体信使传导受到阻滞。对舍饲组的丙酮酸代谢、糖酵解和糖质新生代谢通路产生影响,即能量饲料供应过剩。

由新见材料再论绛县横水、翼城大河口墓地的性质

山西绛县横水、翼城大河口墓地是21世纪周代考古的重要发现,学术界对其性质的认识尚不统一,主要有诸侯国、晋之附庸两种说法。作者以两处墓地新见材料入手,从控制范围、葬俗和铜器铭文三个方面探讨了墓地的性质,认为横水、翼城大河口墓地的葬者生前分属怀姓九宗中的两宗,墓主生前为晋国之附庸。