氰基苯氧氟酰胺的合成及其抗柑橘霉菌活性

以邻羟基苯甲腈、溴氟乙酸乙酯和胺为原料,设计、合成了15个氰基苯氧氟酰胺化合物,通过1HNMR、13CNMR和MS鉴定了产物结构。采用菌丝生长速率法测定了这些化合物对柑橘青霉菌(Penicillium italicum)和柑橘绿霉菌(Penicillium digitatum)的抑制活性。结果表明,这些化合物对所测菌种均有一定的抑制活性。其中,2-(2-氰基苯氧基)-2-氟-N-苯基乙酰胺(Ⅱa)、N-(2-噻唑基)-2-(2-氰基苯氧基)-2-氟乙酰胺(Ⅱf),N-(4-溴-2-噻唑基)-2-(2-氰基苯氧基)-2-氟乙酰胺(Ⅱh)、2-(2-氰基苯氧基)-2-氟代-N-(4-甲基-2-噻唑基)乙酰胺(Ⅱi)、2-(2-氰基苯氧基)-2,2-二氟-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(Ⅳc)在质量浓度为200 mg/L下对2种菌的抑制率≥87.41%;化合物Ⅱh的抗菌活性最高,在质量浓度为50 mg/L下对柑橘青霉菌和柑橘绿霉菌的抑制率分别为60.96%和53.95%,质量浓度为25 mg/L下的抑制率>30%。2-氰基苯氧氟酰胺化合物的抗柑橘青、绿霉菌活性均优于2,4-二氯苯氧乙酸。

柑橘青、绿霉病高效拮抗菌34-9的筛选及其特性研究

从柑橘园根际土壤中分离到1株对柑橘青、绿霉病菌有强烈拮抗作用的酵母菌株(34-9),在活体及离体试验中其抑制病菌的作用均较强,在柑橘果实表面接种6d未发病。其上清液和灭菌液对柑橘青、绿霉病菌没有抑制作用,初步断定该菌株不产生抗生素。经形态特征和生理生化检测,确定其为柠檬形克勒克酵母菌(Kloeckeraapiculata)。扫描电镜观察表明,酵母菌株(34-9)对柑橘青、绿霉病菌直接作用,可观察到酵母菌株(34-9)紧紧包围柑橘青、绿霉病菌菌丝或附着吸附在柑橘青、绿霉病菌菌丝上,最终使柑橘青、绿霉病菌菌丝浓缩,菌丝畸形。

21种植物提取物对3种柑桔病原真菌抑菌活性的初步研究

采用菌丝生长速率法测定油茶籽等21种植物甲醇提取物对柑桔青霉病菌、柑桔绿霉病菌和柑桔酸腐病菌的抑菌活性。结果表明,对柑桔酸腐病菌抑菌活性较高的是油茶籽、甘草、桃花心木和水茄提取物,以含干粉10 mg.mL-1处理后5 d抑菌率分别为96.96%、76.44%、82.73%和69.60%。对柑桔青霉病菌抑菌率达70%以上的有油茶籽、海芋、山菅兰、水茄、上海叶冬青等的提取物,对柑桔绿霉病菌抑菌率达60%以上的有油茶籽、桃花心木、侧柏、海芋、山菅兰、水茄、深山含笑等的提取物。综合而言,油茶籽甲醇浸提物对柑桔青霉病菌、柑桔绿霉病菌和柑桔酸腐病菌的抑菌活性高于其他植物的甲醇浸提物。

茶皂素和噻菌灵混配对沙糖橘采后青绿霉菌的防治效果及品质的影响

为明确茶皂素和噻菌灵混配对柑橘青霉和绿霉病菌的抑制作用,采用菌丝生长速率法和共毒系数法测定了茶皂素、噻菌灵及其混剂对柑橘青霉和绿霉病菌的室内毒力以及增效比率(SR),同时测定了茶皂素与噻菌灵混剂对沙糖橘采后青绿霉菌的防治效果及其对贮藏品质的影响。结果表明,茶皂素与噻菌灵配比为8∶2时对柑橘青霉和绿霉病菌具有显著的防治效果,SR分别为2.77和1.60,表现为显著增效作用。茶皂素与噻菌灵混剂(8∶2)在浓度为400mg.L-1时可有效抑制沙糖橘采后青绿霉病的发生,发病率仅为1.53%,显著低于对照的86.59%。混剂处理有效保持了沙糖橘的品质,延缓了果肉可溶性固形物、可滴定酸及抗坏血酸含量的下降。

捷安肽素对采后柑桔青绿霉菌的抑制效果及作用机理

将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZK菌株发酵产物捷安肽素用于柑桔采后的生物防治,研究了不同浓度、不同接入时间的捷安肽素对柑桔青霉菌(Penicillium italium)和绿霉菌(P.digitaum)的抑制效果,并与常用化学杀菌剂抑霉唑、咪鲜胺、甲基硫菌灵和多菌灵作比较.PDA平板上,柑桔绿霉菌比青霉菌对捷安肽素敏感.在柑桔果实上,53.86μg/mL捷安肽素处理下,柑桔青霉病和绿霉病的发病率分别为5%和5.28%,比对照低95%和94.72%.柑桔青霉病和绿霉病的病情指数分别为1.87和2.18,比对照低73.73和97.82.捷安肽素作用于柑桔绿霉菌1h内,菌丝体内K+含量迅速下降,为对照绿霉菌K+含量的37.53%,1h后菌丝体内K+含量变化趋于平缓.捷安肽素作用于柑桔绿霉菌12h内蛋白质、核酸缓慢泄漏,12h后蛋白质、核酸含量变化趋于平缓.实验结果表明:捷安肽素可以迅速改变绿霉菌细胞膜通透性.

植物提取液对柑桔采后青霉、绿霉抑菌活性的研究

采用牛津杯管碟法,对40种植物丙酮提取液对指状青霉和意大利青霉的抑菌活性进行测定。通过试验,分别筛选出11种对指状青霉和10种对意大利青霉有抑制作用的植物提取液,其中凤仙透骨草、广藿香、青蒿、乌梅、赤芍、水菖蒲、甘草、羌活8种提取液对指状青霉和意大利青霉都具有抑制作用。用二倍稀释法测定8种提取液的最低抑菌浓度(MIC),为柑桔类果实天然保鲜剂的开发提供理论依据。

桂枝抑制柑橘采后两种病原菌活性物质研究

从中草药提取物中筛选对引起柑橘采后主要病害的两株真菌---意大利青霉（ Penicillium italicum）和指状青霉（ Penicillium digitatum）有抑菌活性的中草药；采用溶剂萃取和硅胶柱色谱对具有较好抑菌活性的中草药提取物进一步分离纯化，确定其抑菌活性物质。结果表明：桂枝、桂皮、细辛、香薷、牡丹皮和青蒿6种提取物对这两株真菌均有较好的抑菌效果，抑菌圈直径均达20 mm以上。其中桂枝、桂皮和细辛的抗菌活性物质主要存在于乙酸乙酯部位，且桂枝的抑菌活性最强，对意大利青霉和指状青霉的抑菌圈直径分别为34．57 mm和31．56 mm，最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）分别为3．125 mg/mL和6．25 mg/mL；最小杀菌浓度（ minimal fungicidal concentration ，MFC）分别为6．25 mg/mL和12．5 mg/mL。桂枝乙酸乙酯萃取物对意大利青霉和指状青霉的抑菌圈直径分别为45．33 mm和40．53 mm；采用硅胶柱色谱对桂枝乙酸乙酯萃取物进行分离，得到4个流分（ Fr．1～Fr．4）。抑菌活性测试表明Fr．1活性最强，通过HPLC对Fr．1的化学成分进行分析，发现其主要抑菌成分为桂皮醛。

不同发育期椪柑精油对意大利青霉和指状青霉的抑制作用

对不同发育期(7、8、9和10月)的椪柑(CitrusreticulataBlanco)果皮精油进行GC-MS分析,共鉴定出柠檬烯(47.28%～58.40%)、γ-松油烯(8.27%～13.23%)、β-芳樟醇(3.48%～7.86%)、β-月桂烯(6.24%～7.50%)、α-蒎烯(5.07%～6.05%)、β-蒎烯(2.30%～3.45%)和辛醛(2.04%～2.48%)等50种萜烯类化合物。椪柑果皮精油及其所含的6种潜在抑菌组分(柠檬醛、辛醛、壬醛、癸醛、β-芳樟醇和α-松油醇)的体外抑菌实验结果表明:不同发育期椪柑果皮精油对意大利青霉(Penicillium italicum)的抑制作用要强于指状青霉(P.digitatum);潜在抑菌组分中柠檬醛和辛醛对意大利青霉的抑菌效果最好,壬醛和辛醛对指状青霉的抑菌效果最好。柠檬醛和辛醛对意大利青霉的最小抑菌浓度(MIC)、壬醛和辛醛对指状青霉的MIC均为0.50μL/mL;β-芳樟醇和α-松油醇对意大利青霉和指状青霉的MIC均为2.00μL/mL。

500g/L抑霉唑乳油对柑橘青霉和绿霉病菌的抑制作用与防治效果

试验结果表明，500g／L抑霉唑乳油对柑橘青霉病菌和绿霉病菌的抑制中浓度（EC50）分别为0.0136mg／kg和0.0129mg／kg。用400～800mg／kg的抑霉唑药液浸果1min，捞起晾干，装箱入库常温贮藏，药后60d，对柑橘青霉、绿霉病的防效达93．11％～96．48％，极显著高于70％甲基硫菌灵用600mg／kg处理的防效（84．30％），且对贮藏期的柑橘没有药害，对果实的色泽和口味没有明显的影响。

两株柑橘采后致病真菌的分离及生物学特性研究

从自然发病的宫川果实表面分离得到两株致病真菌(PD和PI).致病力检测结果显示,接种PD菌的柑橘果实发病到全部腐烂需7d,而接种PI菌的柑橘果实发病到全部腐烂则需13d.形态学特征比较得知,PD和PI分别为指状青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(P.italicum).基础生物学特性结果表明,PD的致死温度为70℃,菌丝体生长最适温度为25℃,最适pH 7.0;PI的致死温度为80℃,菌丝体生长的最适温度为20℃,最适pH 10.0.

12种中草药提取物对采后柑桔青绿霉菌的抑菌作用

为中草药提取物应用于柑桔采后贮藏病害的生物防治提供理论依据,采用液体培养方法和柑桔果实抑菌试验研究土槿皮等12种中草药提取物对柑桔绿霉菌(Penicillium digitatum)和柑桔青霉菌(P.italicum)的抑制效果。结果表明:在PDA培养液中,土槿皮、高良姜、黄柏、丁香和蒲公英等5种中草药提取物对柑桔青绿霉菌有较好的抑菌活性;选取该5种中草药提取物进行柑桔果实贮藏病害的抑菌试验,土槿皮处理的果实,柑桔青绿霉菌的发病率和病情指数分别为19.9%和14.28,比对照低80%和32.39,与化学杀菌剂咪鲜胺的防效(发病率为22.92%,病情指数为9.52)差异不显著,而与其他中草药提取物比较差异显著。中草药与柑桔青霉菌和绿霉菌同时接入防治效果明显优于柑桔青绿霉菌优先接入。

中药农药“必效散”对柑桔青霉病菌和绿霉病菌的抑制作用

报道了７ 种药剂对柑桔青霉病菌和绿霉病菌的生长抑制作用⒚通过比较供试药剂对柑桔两种致病菌的抑菌圈大小和抑制浓度，确定了它们的抑菌效果⒚试验结果表明，“必效散”

木霉绿色粘帚霉和柑桔青绿霉分生孢子萌发条件的比较研究

本文报告了三株木霉（ＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ１６２；Ｔ．ａｕｒｅｏｖｉｒｉｄｅＴ１３；Ｔ．ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＴ２７４）和一株绿色粘帚霉（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍｖｉｒｅｎｓ）以及柑桔青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｉｔａｌｉｃｕｍ）和绿霉（Ｐ．ｄｉｇｉｔａｔｕｍ）分生孢子萌发的比较研究结果。在柑桔皮汁滤液中，木霉菌株萌发的温度和绿色粘帚霉分生孢子萌发的温度，以２５－３５℃最好；而柑桔青绿霉分生孢子在１０℃时萌发率为４２．４％和３７．３％；在高于４０℃时仍有少量萌发。木霉和绿色粘帚霉分生孢子分别在ｐＨ４和ｐＨ５时萌发最好，柑桔青绿霉能在ｐＨ３的条件萌发，以ｐＨ５时萌发最佳。在１５℃时，供试各菌在蒸馏水、自来，１０％葡萄糖和１０％土壤浸液中几乎不萌发；而在柑桔皮汁液中，除绿色粘帚霉外，其余各菌株的分生孢子均能萌发，尤其是柑桔青绿霉孢子萌发较好。

裸脚菇0612-9活性物质对柑橘青、绿霉病的生防效果及其诱导抗性

为研究裸脚菇0612-9活性物质对柑橘青、绿霉病的生防效果及其诱导抗性,以‘南丰’蜜桔为试材,采用质量浓度分别为0(对照)、0.25、0.55、5.50 mg/mL的裸脚菇0612-9发酵液粗提物(extract of fermentation broth from Gymnopus sp.0612-9,GSFE)通过损伤接种的方式处理果实,随后分别接种青、绿霉病原菌孢子悬浮液,定期统计果实发病率,并取样测定柑橘果皮防御酶活力等指标的变化。结果表明:不同质量浓度GSFE处理较对照组均能显著降低柑橘青、绿霉病发病率及病情指数(P<0.05),其中GSFE质量浓度为5.50 mg/mL时的抑制效果最佳;同时,GSFE处理能够诱导‘南丰’蜜桔果皮中相关防御酶(苯丙氨酸解氨酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶)活力的提高,促进其抗氧化物质总酚和类黄酮的产生,并抑制脂氧合酶活力、减少丙二醛的积累、降低膜脂过氧化程度,从而提高‘南丰’蜜桔果实的抗病性。本研究结果可为设计开发GSFE类新型柑橘采后防腐保鲜剂提供思路。

五指毛桃果抑制柑橘采后病原菌活性成分研究

前期通过筛选对柑橘采后病原菌——意大利青霉和指状青霉菌有抑菌作用的中草药,发现五指毛桃果乙醇提取物具有很好的抑菌活性。为进一步研究其抑菌活性成分,对五指毛桃果中的抑菌活性成分进行分离、纯化及结构鉴定。釆用生物活性追踪的方式,以牛津杯法测定提取物抑菌活性来指导下一步分离纯化。依次采用大孔树脂柱、Sephadex LH-20凝胶柱和ODS柱层析分离得到3个单体化合物,通过核磁共振谱(NMR)和质谱(MS)波谱数据分析,对3个化合物进行结构解析,经鉴定他们分别为乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1)、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(2)和圣草酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(3)。化合物1具有很好的抑菌活性,为五指毛桃果主要的抑菌活性成分。

H_2O_2-Ag^+复方消毒剂对柑橘青绿霉菌的抑制作用

采用离体抑菌试验研究观察H_2O_2-Ag^+复方消毒剂对柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)和绿霉病菌(Penicillium digitatum)生长的直接抑制效果,并以年橘为试材,分别活体接种P.italicum和P.digitatum,研究H_2O_2-Ag^+复方消毒剂处理对青霉病和绿霉病的抑制作用,同时分析果实在贮藏过程中的品质变化。离体抑菌试验表明:培养基中添加H_2O_2-Ag^+显著抑制了P.italicum和P.digitatum的菌丝生长(P<0.05),并表现出明显的浓度效应,浓度为1%H_2O_2-20 mg/L Ag^+的复方消毒剂对两种病菌的抑制率达100%;活体接种试验表明:3%H_2O_2-60 mg/L Ag^+浓度的复方消毒剂可显著抑制病原菌诱导的病斑扩展,降低果实发病率,而对果实的品质及果面色差值没有明显影响。本研究表明,H_2O_2-Ag^+复方消毒剂不仅对柑橘青、绿霉菌有直接的杀灭作用,还能有效控制果实的腐烂率,可作为一种新型、安全、环保的保鲜防腐剂,应用于柑橘果实采后病害的控制。

10%十二烷基苄基二甲基氯化铵水剂对柑橘青霉病和绿霉病的防治效

测定了10%十二烷基苄基二甲基氯化铵水剂对宫川柑橘贮藏期青霉病和绿霉病的防治效果,结果表明,10%十二烷基苄基二甲基氯化铵水剂可有效控制贮藏期间柑橘青霉病和绿霉病的发生,500mg/L、750mg/L浸果处理2min,药后60d,对柑橘青霉病的防效分别为89.41%、91.63%,对绿霉病的防效分别为91.84%、93.88%,且对柑橘果实安全,能够较好的保持其感官品质和风味。

产酶溶杆菌LE16对采后柑橘青霉绿霉病的防治作用

为了防治采后柑橘青霉(Penicillium italicum)和绿霉(P.digitatum)引起的果实腐烂,以自主分离的产酶溶杆菌新株Lysobacter enzymogenes LE16为对象,研究其自溶发酵液和所产生的挥发性物质对青霉和绿霉菌丝生长及孢子萌发的抑制作用;利用液相色谱—质谱联用(Liquid Chromatograph Mass Spectrometer,LC-MS)检测分析LE16发酵液的抗菌成分;通过果实创伤接种和商品化保鲜试验,明确菌株LE16对青霉和绿霉的防治效果。结果显示:在纯培养试验中,LE16显著抑制青霉和绿霉菌丝生长,其发酵液固形物和其产生的挥发性物质最大抑制率为100%和77.52%~91.11%;其发酵液固形物使病菌孢子的萌发率降低96%以上,使病菌菌丝空泡化和扭曲畸形。经80、90和100℃高温加热30 min后,对青霉和绿霉菌丝生长的抑制效果与常温处理(28℃)无显著差异。LC-MS分析结果表明,菌株LE16可产生大量次级代谢产物,其中包括肉桂醛、肉桂酸、月桂酸和γ-丁内酯等抗菌化合物。在创伤接种青霉试验中,LE16发酵液处理的柑橘果皮中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性提高,丙二醛含量和细胞膜透性降低;各处理的发病率和病情指数:对照>LE16发酵液>咪鲜胺>50%LE16发酵液+50%咪鲜胺,防治效果则相反。在商品化贮藏保鲜试验中,LE16发酵液处理对柑橘果实品质无不良影响;贮藏15 d时LE16发酵液、咪鲜胺和50%LE16发酵液+50%咪鲜胺的防治效果依次为50.00%、83.33%和75.93%,说明柑橘储藏过程中,LE16发酵液显著降低烂果率,在获得同样防治效果的情况下,可大幅度减少农药施用量。综上可知,LE16分泌的代谢产物抑制青霉和绿霉菌丝生长和孢子萌发,防止柑橘果实腐烂,可减少化学药剂咪鲜胺用量,对果实品质无不良影响,在柑橘采后保鲜方面有潜在的应用价值。

响应面法优化肉桂抑菌物质超声波提取工艺及其抑菌活性研究

许多天然药用植物对果蔬采后病原真菌具有很好的抑菌效果,意大利青霉和指状青霉是引起柑橘采后青霉病和绿霉病的病原菌。前期针对这2种病原菌筛选抑菌药用植物,发现肉桂具有明显的抑菌效果。实验以意大利青霉和指状青霉为供试菌,采用超声波法提取肉桂中抑菌物质,通过单因素实验和响应面分析法研究了超声提取时间、提取温度和料液比对肉桂抑菌活性的影响。采用牛津杯法测定抑菌活性,并进一步测定其对病原菌孢子萌发抑制率和病原菌菌丝形态的影响。结果表明:肉桂抑菌物质最佳提取条件为:乙醇浓度90%、提取温度30℃、提取时间0.5 h、料液比为1:26。在此提取条件下的肉桂提取物对意大利青霉和指状青霉的综合抑菌效果最好,其抑菌圈直径分别为20.64、23.96 mm。肉桂提取物可以抑制2种青霉菌的孢子萌发,影响菌丝的生长发育,并且其对2种病原菌孢子萌发抑制率及抑菌效果随肉桂提取物浓度的升高而升高。

寡雄腐霉发酵液的动物毒性及其对柑橘果实贮藏期青、绿霉病的防治效果

【目的】研制安全、无毒、高效的生物保鲜剂,降低意大利青霉(Penicillium italicum,青霉)和指状青霉(Penicillium digitatum,绿霉)引起的柑橘烂果。【方法】试验利用自主选育的寡雄腐霉优良菌株(Pythium oligandrum CQ2010),制备发酵液,测试了对小鼠的急性毒性,并设置对照(液体培养基,CK)、寡雄腐霉发酵液(P.oligandrum Broth,POB)、咪鲜胺(Prochloraz,PC)、咪鲜胺+POB(PC+POB)等4种处理,研究了它们对青、绿霉菌的抑制作用及其对柑橘防腐保鲜的作用。【结果】用大剂量的POB灌胃给药对小鼠体重增长无显著影响,供试动物的外观和行为均无异常,心、肝、肾、肺、肠等组织器官也未见病理改变。POB显著抑制青、绿霉菌丝生长和孢子萌发,抑制率分别为70.24%-93.74%(菌丝生长)和44.91%-87.82%(24 h孢子萌发)。柑橘果实接种青霉后,烂果率CK>POB、PC>PC+POB,防治效果PC+POB>POB、PC。在模拟柑橘商品化贮藏保鲜试验中,青、绿霉发病率占总发病率的50%以上,CK、POB、PC和PC+POB的烂果率依次为26.40%、15.03%、16.61%和4.21%。此外,POB对果实品质无显著影响,但显著提高果皮中的超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性,有益于提高柑橘果实的抗病性和贮藏性。【结论】在柑橘贮藏过程中,POB对果实青、绿霉病有显著的防治作用,并与咪鲜胺的防病效果有叠加作用。