日粮添加鹅源草酸青霉产果胶酶对改善肉鸡生产性能的消化生理与免疫学机制的研究

【目的】探索鹅源草酸青霉产果胶酶的作用机理,确定其添加效果与使用方法;同时,为果胶酶的推广应用提供理论依据和技术支撑。【方法】选用1日龄同批孵化、健康肉鸡240只,随机分成4个处理组。1组为对照组,饲喂正常水平的基础日粮;2组在基础日粮的基础上添加0.249%的果胶酶;3组添加0.168%纤维素酶;4组添加0.15%由果胶酶和纤维素酶按1﹕1配合而成的复合酶。【结果】果胶酶组肉鸡。显著提高对磷(P)、粗纤维(CF)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)、胱氨酸(Cys)、苏氨酸(Thr)和异亮氨酸(Ile)的利用率(P<0.05),极显著提高粗蛋白(CP)的利用率(P<0.01);显著提高果胶酶组28日龄时十二指肠、胰腺的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性以及空肠的脂肪酶活性(P<0.05),极显著提高胃蛋白酶活性(P<0.01),显著提高49日龄时胰腺的淀粉酶及脂肪酶和胰蛋白酶活性、十二指肠的淀粉酶和胰蛋白酶活性和空肠的脂肪酶和胃蛋白酶活性(P<0.05);显著提高空肠的绒毛高度、降低肠壁厚度(P<0.05);果胶酶组显著降低49日龄的尿酸、尿素氮水平(P<0.05);显著提高的血糖水平(P<0.05);显著降低盲肠大肠杆菌、沙门氏菌数量(P<0.05);显著提高乳酸杆菌和双歧杆菌数量(P<0.05);显著提高49日龄时的新城疫抗体效价(P<0.05)。【结论】日粮中添加鹅源草酸青霉产果胶酶能提高肉鸡的生产性能和养分利用率,改善肠道形态结构、消化酶活性和微生态环境。

生物农药草酸青霉水剂对玉米小斑病的防治效果

通过对20％草酸青霉水剂助剂用量的影响、助剂对药效的影响、pH值对制剂贮存稳定性的影响试验，筛选出20％草酸青霉水剂的最佳配方。室内及田间药效试验表明：20％草酸青霉水剂对玉米小斑病有良好的防治效果，室内处理剂量为稀释100倍液，田间处理剂量为稀释50倍液，对玉米小斑病的防效在88％～90．6％，且对供试作物安全。

鹅源草酸青霉产果胶酶的发酵条件研究

为了确定鹅源草酸青霉产果胶酶发酵的最佳培养基组成及发酵条件,以鹅源草酸青霉为研究菌株,通过聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶裂解酶(PL)、果胶酯酶(PE)的测定,研究了培养基组成(碳源、氮源、无机盐)及不同发酵条件(接种量、温度、pH和发酵时间)对草酸青霉产果胶酶活力的影响,并通过L9(34)正交试验确定草酸青霉发酵生产果胶酶不同组分的最佳培养基组成。结果表明:(1)以葡萄糖为碳源可以诱导PG、PL、PE产生(p<0.001),每15g基础培养基中葡萄糖的最适添加量分别为:1.2g,1.5g,1.5g;(NH4)2SO4对PG、PE、PL产生有明显刺激作用(p<0.001),每15g基础培养基适宜添加量分别为:0.6g,1.5g,0.3g;磷酸二氢钾(KH2PO4)对PG活力有明显的提高作用(p<0.001),MgSO4和KH2PO3对PL有极显著影响(p<0.001)。(2)PG、PL、PE最佳接种量每15g分别1.5mL、2mL和1.5mL培养基装量,最佳培养温度分别为32,30,32℃,培养基最佳初始pH值分别为5.0,4.0,4.5;最佳发酵时间分别为60h,72h和84h。

鹅源草酸青霉CBHⅠ基因克隆及真核表达载体构建

【目的】鹅源草酸青霉F67(Penicillium oxalicum Currie & Thom)纤维素酶二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBHⅠ)基因克隆并构建真核表达载体,为该菌株分子特性的进一步研究及构建高效纤维素分解菌奠定基础。【方法】首先通过兼并PCR法扩增CBHⅠ基因片段,然后利用改良热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术克隆CBHⅠ基因5′端和3′端侧翼序列,最后采用RT-PCR法扩增鹅源草酸青霉F67CBHⅠ基因序列全长,并对该基因进行生物信息学分析,构建pPIC9K真核表达载体。【结果】分别扩增到鹅源草酸青霉F67纤维素酶CBHⅠ基因片段A(EU574736)、5′端序列B1(EU603295)、3′端序列B2(EU652768)及全长基因C(EU727171),并成功构建真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ;生物信息学分析表明,该基因蛋白序列与微紫青霉氨基酸序列同源性最高,达76%,前26个氨基酸为信号肽序列,疏水性可达2.63,由催化功能域、衔接区和真菌性纤维素结合域构成,其三级结构主要为β-sheet。【结论】鹅源草酸青霉纤维素酶CBHⅠ基因全长序列的克隆进一步丰富了丝状真菌的生物信息学资源;其真核表达载体的构建为将该菌株进一步在真核宿主中表达,从而获得高效工程菌株奠定了基础。

鹅源草酸青霉果胶酶提高苹果出汁率工艺

目的:以鹅源草酸青霉果胶酶为研究对象,优化鹅源草酸青霉制备的果胶酶提高苹果出汁率工艺。方法:以烟台红富士苹果为材料,以酶解温度(X1)、酶解时间(X2)、酶添加量(X3)和初始pH值(X4)为自变量(Y),出汁率为响应值,进行Box-Behnken设计,利用Design Expert软件进行响应面分析,建立回归模型。结果:结果表明,①利用响应面法筛选的鹅源草酸青霉果胶酶酶解苹果浆最佳条件为:温度32.91℃、酶解时间90.02min、酶添加量0.197mL/kg、pH3.96工艺条件下,苹果出汁率达到91.34%;②自变量与响应值关系的回归模型为:Y=91.72-0.4X1+0.58X2+0.60X3-0.32X4+0.42X2X3+0.50X2X4-1.75X12-0.85X22-1.17X32-1.50X42。结论:鹅源草酸青霉果胶酶能显著提高苹果出汁率;采用自变量与响应值建立的回归模型具有良好的拟合度,可以作为调控生产工艺的依据。

鹅源草酸青霉溶磷效果及对鹅磷代谢的影响

本试验以解磷巨大芽孢杆菌为对照,在以骨粉、CaHPO4、Ca3（PO4）2为磷源的培养基中,对青霉菌F17、F67的溶磷效果进行了研究;同时以鹅为试验动物,采用全收粪法进行了代谢试验,研究了日粮中添加不同水平草酸青霉菌液（0.1%、0.3%、0.5%）对Ca、P的消化吸收的影响。结果表明：①在以骨粉、CaHPO4、Ca3（PO4）2为磷源的固体培养基和液体培养基中,青霉菌F67组的溶磷圈直径极显著大于F17和对照菌株组（P〈0.01）,F67组的溶磷量极显著高于F17和对照菌株组的溶磷量（P〈0.01）。②在营养水平一致的条件下,随着草酸青霉菌液添加水平的提高,体内P的表观消化率为49.86%-59.78%,Ca的表观消化率为47.65%-58.25%,Ca、P表观消化率在草酸青霉发酵液添加比例为0.3%时最高,与对照组差异显著（P〈0.05）。

鹅源草酸青霉产果胶酶对肥胖模型大鼠体重、脂肪沉积及脂质代谢的影响

本试验旨在研究鹅源草酸青霉产果胶酶对肥胖大鼠体重、脂肪沉积及脂质代谢影响。随机选取雄性大鼠108只,体重220~240 g,适应性饲养3 d。分为对照组（Ⅰ组）、高脂组（Ⅱ组）和高脂模型组;高脂模型组造模成功后,将其按体重随机分为7组,每组3个重复,每个重复4只;各组在基础饲粮中分别添加0（Ⅲ组）、0.01%（Ⅳ组）、0.05%（Ⅴ组）、0.1%（Ⅵ组）、0.2%（Ⅶ组）、0.4%（Ⅷ组）、0.8%（Ⅸ组）的果胶酶。试验期8周。结果表明：1）鹅源草酸青霉产果胶酶能够有效抑制肥胖模型大鼠体重的增长,降低Lee’s指数,控制体型发育。2）鹅源草酸青霉产果胶酶能够降低肥胖模型大鼠机体脂肪沉积量。3）鹅源草酸青霉产果胶酶能够有效地对肥胖模型大鼠由于摄入高脂饲粮引起的脂肪肝进行干预,使其恢复到正常水平。4）鹅源草酸青霉产果胶酶能够降低肥胖模型大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、游离脂肪酸含量,提高血清高密度脂蛋白胆固醇含量。5）鹅源草酸青霉产果胶酶能够降低肥胖模型大鼠谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性,提高血清脂蛋白酯酶和肝酯酶活性。由此可见,鹅源草酸青霉产果胶酶对肥胖模型大鼠脂肪沉积和脂质代谢具有显著干预修复作用,降脂效果明显。

鹅源草酸青霉发酵鸡粪工艺的研究

为了利用微生物发酵鸡粪生产高质量的有机肥料,为鸡粪资源的合理利用和减少环境污染提供有效的解决途径。本文以从五龙鹅肠道分离的草酸青霉为发酵菌株,通过对鹅源草酸青霉发酵鸡粪生产生物肥料和减少环境污染的研究,来探讨发酵鸡粪的工艺条件。结果表明:利用草酸青霉为发酵菌株发酵鸡粪,使鸡粪中的氮、无机磷、有机质的含量分别提高12.13%、74.7%、15.6%;粗纤维的含量降低39.15%;氨气浓度降低了55.12%;发酵后的鸡粪大肠杆菌菌值为0.04,明显高于未发酵鸡粪(0.0004);寄生虫卵死亡率为96%。通过正交优化试验确定的发酵鸡粪的工艺为:氮增幅最大时的发酵时间为60h,料水比为1:2,料层厚度为45cm,发酵温度为32℃;无机磷增幅最大时的发酵时间为60h,料水比为1:2,料层厚度为35cm,发酵温度为32℃;氨气浓度降低幅度最大时的发酵时间为60h,料水比为1:3,料层厚度为35cm,发酵温度为32℃。

产冬凌草甲素菌株筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究

目的对冬凌草内生真菌进行筛选鉴定,并研究其体外抗肿瘤活性,以期得到冬凌草甲素高产抗肿瘤活性菌株。方法采用TLC法和HPLC法对前期从冬凌草中分离出的256株内生真菌进行筛选,HPLC-MS测定菌株发酵液中的冬凌草甲素。结合形态学特征、ITS序列对筛选出的菌株进行鉴定。MTT法测定筛选菌株的体外抗肿瘤活性。结果从冬凌草中分离出的256株内生真菌经筛选,获得1株冬凌草甲素高产菌株M-J-5,鉴定为青霉属草酸青霉菌Penicillium oxalicum Currie et Thom,其对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞活性具有一定抑制作用。结论从冬凌草内生真菌中筛选得到产冬凌草甲素且具抗肿瘤活性的菌株M-J-5。