有机溶剂/缓冲液双相体系中固定化Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞催化1-(4-甲氧基)-苯基乙醇不对称氧化反应

在有机溶剂/缓冲液双相体系中,利用固定化醋酸杆菌Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞高对映体选择性地催化1-(4-甲氧基)-苯基乙醇(MOPE)的不对称氧化反应,成功地拆分外消旋MOPE得到对映体纯(S)-MOPE.与游离细胞相比,固定化细胞催化反应速度有所降低,但其稳定性(包括操作稳定性、热稳定性和储藏稳定性)明显提高.固定化细胞连续使用10批次(每批次12 h)后,仍能保留其初始催化活性的58%以上,而游离细胞仅保留约20%的相对活性.在所考察的不同有机溶剂中,正己烷不仅能较好地溶解底物,而且对细胞的生物相容性相对较好,因而提高了反应底物浓度、反应初速度、对映体回收率及残留底物e.e.值,是反应体系中最适宜的有机相.该反应的最适宜正己烷体积分数为60%,辅底物为50 mmol/L丙酮,底物浓度为40 mmol/L,缓冲液pH=6.5,反应温度为30℃;在此条件下,反应初速度为80.4μmol/min,反应12 h后,对映体回收率和残留底物e.e.值分别为51.0%和99.9%,明显好于水单相反应体系.

海星共附生真菌Penicillium sp. GGF16-1-2中色酮类化合物

为了继续寻找海洋环境中新颖结构次生代谢产物,对中国南海海星共附生真菌Penicillium sp.GGF16-1-2次级代谢产物进行研究。采用柱色谱及高效液相色谱等多种分离手段对真菌Penicillium sp.GGF16-1-2的乙酸乙酯部位进行分离纯化,得到7个化合物。通过物理常数、波谱数据和文献对照等方法对其结构进行鉴定,分别为dicitrinones (1)、microsphaeropsones (2)、janthinone (3)、microxanthone (4)、emodin (5)、8-hydroxy-6-methylxanthone-1-carboxylic acid (6)和coniochaetone (7)。化合物2、4、6首次从该属真菌中分离得到。

南极青霉菌Penicillium sp.S-1-16摇瓶发酵条件的初步优化

对一株具有细胞毒活性的南极青霉属真菌Penicillium sp.S-1-16进行发酵条件的初步优化。通过对基础发酵培养基、发酵温度及培养基配制用水的筛选,以次级代谢产物量为主要指标,同时参考生物量及细胞毒活性指标来进行初步优化,获得一个较优的摇瓶发酵条件:酵母提取粉0.3%,蛋白胨0.5%,麦芽糖0.3%,葡萄糖1%,蔗糖5%,自来水,初始p H=7.0,接种量15%,18℃,180 r·min-1发酵15 d。采用初步优化后的条件进行发酵,与初始发酵条件相比,其次级代谢产物量提高到568.75%,对A549肿瘤细胞的抑制作用增强至265%,并且对He La肿瘤细胞和SGC-7901肿瘤细胞的抑制率分别从0提高到48.19%和69.18%,效果显著,为获得菌株中活性次级代谢产物奠定了基础。

黄海葵附生真菌Penicillium sp.化学成分的研究(Ⅰ)

从黄海葵 [Anthopleura xanthogrammica(Berkly) ]附生真菌 Penicillium sp.的发酵液中首次分离到4个化合物 ,分别鉴定为 :对羟基苯乙醇 ( ) ,(Z) N- [2 - (4-羟基苯基 )乙烯基 ]甲酰胺 ( ) ;(E) N- [2 - (4-羟基苯基 )乙烯基 ]甲酰胺 ( ) ,邻苯二甲酸二异丁基酯 ( ) ,其中化合物 ( )为首次从天然界分离得到。它们的化学结构经理化数据和波谱分析 。

P(3-co-4)HB解聚酶的分离纯化及酶学性质研究

聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)(P(3-co-4)HB)解聚酶是由微生物所分泌的一种胞外酶,可以将P(3-co-4)HB降解为水溶性小分子物质,为了阐明P(3-co-4)HB材料的生物降解机理并建立其生物循环系统,P(3-co-4)HB降解菌和降解酶的研究越来越受到关注。本论文以Penicillium sp.DS-04菌株为材料,对其产生的P(3-co-4)HB解聚酶进行了分离纯化,发酵液经过冻干和分子筛层析得到了P(3-co-4)HB解聚酶的纯酶组分,纯化倍数和回收率分别为3.15和10.44%,SDS-PAGE显示该酶分子量为44.0kDa。本文还对P(3-co-4)HB解聚酶的酶学性质进行了测定,并初步探讨了解聚酶的作用模式。

软珊瑚Sarcophyton tortuosum共生真菌Penicillium sp.的代谢产物研究

从三亚采集的软珊瑚Sarcophyton tortuosum体内分离得到一株共生真菌Penicillium sp.,该菌在GPY培养基中培养,菌体呈浅红色。对该菌菌体的代谢产物进行了研究,纯化得到1个新化合物:(4E,6E)-2-N-十六碳酰基-1,3-二羟基十六烷-4,6-二烯-鞘胺醇(1),以及4个已知化合物1,7-二羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌(2),1,7,8-三羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌(3),1-羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌(4),4,8-二甲基-1,5-二氧环辛烷-2,6-二酮(5)。化合物结构主要通过MS,NMR等波谱数据分析确定。化合物2,3,4,5为首次从海洋真菌中分离得到。

A New Degraded Sesquiterpene from Marine Actinomycete Streptomyces sp. 0616208

A new degraded sesquiterpene was isolated from the marine actinomycete Streptomyces sp. 0616208. Its structure was elucidated as （1α; 4aα; 5α, 7β, 8aβ）-5, 8a-dimethyl-decahydrona- phthalene-1, 4a, 7-triol on the basis of spectroscopic data.

环氧合酶-2抑制剂降低结肠癌细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的探讨选择性环氧合酶(COX)-2抑制剂celecoxib影响结肠癌HT-29细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的机制。方法体外培养结肠癌HT-29细胞,采用MTT法检测celecoxib对HT-29细胞增殖的影响。同时针对Sp1和Sp4进行RNA干扰,应用RT-PCR和Western印迹法联合检测celecoxib组和干扰组对HT-29细胞Sp1、Sp4和VEGF m RNA和蛋白表达的影响。结果随着药物浓度的增加(5、10、20、40和80μmol/L)和作用时间的延长(2、4、8、16和32 h),celecoxib对HT-29细胞的增殖具有显著抑制作用,在2、4、8、16和32 h时的半数抑制浓度(IC50)分别为40.36、33.15、31.67、30.94和31.54μmol/L。RT-PCR和Western印迹检测显示,celecoxib可显著降低HT-29细胞Sp1、Sp4和VEGF m RNA和蛋白的表达水平,同时经RNA干扰Sp1(Sp4)后,HT-29细胞Sp1(Sp4)和VEGF m RNA和蛋白的表达水平明显降低,但Sp4(Sp1)m RNA和蛋白表达变化不明显。结论 celecoxib可抑制结肠癌HT-29细胞增殖,其作用机制可能是通过下调Sp1和Sp4表达水平而降低结肠癌细胞中VEGF的表达水平。

海星共附生真菌Penicillium sp. GGF16-1-2中次级代谢产物研究

目的采用全球天然产物社会分子网络(GNPS)和单菌株多次级代谢产物(OSMAC)策略从海洋微生物中寻找结构新颖、活性好的次生代谢产物。方法在GNPS指导下,通过硅胶柱层析及半制备高效液相色谱(HPLC)等方法对海星共附生真菌penicillium sp.GGF16-1-2在不同培养基的次级代谢产物进行分离纯化。通过核磁共振(NMR)、高分辨质谱(HRMS)、旋光(ORD)和圆二色光谱(CD)等现代波谱解析方法以及对比文献确定化合物的结构。结果在GNPS追踪指导下从penicillium sp.GGF16-1-2中D培养基分离得到9个聚酮类化合物,依次为phenol A(1)、decarboxydihydrocitrinone(2)、stoloniferol B(3)、sclerotinin A(4)、(1S,3R,4S)-1-(4'-hydroxyl-phenyl)-3,4-dihydro-3,4,5-trimethyl-1H-2-benzopyran-6,8-diol(5)、β-diversonolic ester(6)、sydowinin A(7)、ω-hydroxy-emodin(8)和dibutyl phthalate(9)。而在真1培养基中GNPS预测到二聚体类成分存在,在GNPS指导下初步分离得到桔霉素二聚类化合物:citrinin H1(10)和dicitrinone B(11)。结论OSMAC策略和GNPS可以预测并获得骨架丰富、结构新颖的化合物。对海星共附生真菌penicillium sp.GGF16-1-2次生代谢产物研究发现真1培养基比D培养基更适合桔霉素二(多)聚体类化合物的产生。

Mycobacterium sp.LY-1高效转化植物甾醇两相体系的构建

9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9α-OH-AD)是一种卤代皮质类激素的重要前体,具有重要的商用价值.为进一步提高目的产物9α-OH-AD的产量,在本实验室前期利用非离子表面活性剂壬基酚乙氧乙烯醚(TX-40)替代大豆油进行Mycobacterium sp.LY-1转化植物甾醇的基础上,通过考察16种助溶剂与TX-40复配对菌株LY-1转化植物甾醇生产9α-OH-AD的影响,确定最适助溶剂为司盘-20.通过正交优化实验确定司盘-20的最优添加浓度为0.1%.进一步考察不同浓度细胞膜结构抑制剂甘氨酸、鱼精蛋白、异烟肼对菌株LY-1转化植物甾醇的影响,结果显示在以上转化体系中添加1.0μg/mL的鱼精蛋白时,9α-OH-AD的摩尔得率最高,达到46.4%.最终确定菌株LY-1降解植物甾醇的两相转化体系为TX-400.7%,司盘-200.1%,鱼精蛋白1.0μg/mL.该体系于植物甾醇的投料浓度提高至35 g/L时,目的产物9α-OH-AD的摩尔得率仍能稳定在32.5%以上.本研究成功构建了Mycobacterium sp.LY-1高效转化植物甾醇的两相体系,结果可为其工业化应用奠定良好基础.(图4表2参26)

胎儿肺Ⅱ型肺泡细胞发育中相关活性物质的表达及其意义

目的 探讨诸细胞因子对肺泡Ⅱ型细胞发育、分化和成熟的调控作用。 方法 12～35周胎儿肺组 织共13例,常规石蜡包埋、切片,用免疫组织化学技术检测FGFR、Ras p21蛋白、BMP 4、SP B和TTF 1的表达特征。 结果 FGFR率先在发育早期近端支气管上皮表达。Ras蛋白于16周在近端和远端的支气管上皮有较弱表达,18 周时与FGFR一样达到表达的高峰。随着FGFR表达的增强,BMP 4开始表达。发育后期,这三者均不表达。TTF 1 因子自16周起定位于上皮细胞核内,远端支气管的反应总是较近端者强。SP B蛋白在18周胎儿肺Ⅱ型肺泡细胞 内出现,伴随着TTF 1的表达,其反应由呼吸道近端逐渐往远端迁移。发育末期至成肺中,TTF 1和SP B阳性反应 均在肺泡Ⅱ型细胞中稳定表达。 结论 FGF 10、Ras蛋白和BMP 4对Ⅱ型肺泡细胞的作用,是通过细胞外间质的 途径促使Ⅱ型肺泡细胞正常增殖分化和达到形态结构的成熟;而TTF 1因子和SP B的表达,则为Ⅱ型肺泡细胞在 胎肺发育晚期已逐渐达到功能成熟的标志,与胎儿一出生即具有自主呼吸的功能相适应。

青霉啤酒糟培养基配方优化研究

为了更好地利用啤酒糟,从富含纤维素的土壤中分离和筛选纤维素高效降解的青霉,在纯啤酒糟中加入不同比例的N源、C源配制不同的培养基,接种等量活化后的青霉孢子悬浮液,观察菌丝生长情况以及测定菌株的酶活力和产生的孢子数,筛选促进菌株生长的最优配方。结果表明,最优N源是胰蛋白胨,最适比例为25∶1;最优C源是乳糖,最适比例为25∶1;这2种化合物混合,N源、C源分别为25∶1,30∶1时,菌丝生长最旺盛,产孢子数最多,为7.80×109个/m L;N源、C源分别为30∶1,25∶1时,羧甲基纤维素钠(CMCNa)酶活力最高,达476 U/mL。表明啤酒糟可以作为青霉的优良培养基,对选育优良的啤酒糟纤维素分解菌具有一定的指导意义。

黑河中游和烟台海滨中国柽柳的传粉生态学研究

中国柽柳(Tamarix chinensis)是干旱及半干旱地区的重要建群物种。为便于其有效利用和引种栽培,对黑河中游和烟台海滨的中国柽柳的开花动态、花粉活力、柱头可授性、访花者种类、花粉-胚珠比(P/O)、杂交指数(OCI)及座果率进行观测,结果表明:黑河中游和烟台海滨柽柳的花期和柱头可授性相似,花序花期为2-5天,开花当天柱头可授活性最大,之后逐渐下降,第4天柱头无可授性;花粉活力和访花者种类差别较大,黑河柽柳开花第1天花粉活力为(62±4.31)%,最高为(82.12±7.23)%,4天后花粉完全失活。烟台柽柳的花粉活力在开花后第1天最高为(89.13±7.23)%,第4天花粉活力下降为(11±1.12)%。黑河中游和烟台海滨柽柳的访花者均以膜翅目昆虫为主,黑河柽柳以黑带斑沙蜂(Bembix melanura)、卡切叶蜂[Megachile(Amegachile )kagiana]和黑带食蚜蝇(Episyrphus balteatus)等为主要访花者;烟台柽柳以姬蜂(Ichneumonsp.)、大灰食蚜蝇(Metasyrphus corollae)和灰地种蝇(Delia platura)等为主要访花者。二者P/O值、OCI及座果率差异不显著,黑河和烟台柽柳的P/O值分别为373.6±71.9和382.1±86.2;最高座果率分别为(89.72±7.76)%和(93.17±8.21)%;OCI均为3。上述研究结果显示,黑河中游和烟台海滨柽柳均为兼性异交的繁育系统。