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卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析
被引量:
4
1
作者
李琦
王雅琴
+1 位作者
谭天伟
邱俊康
《北京化工大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期12-15,共4页
以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致。将此基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),...
以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致。将此基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶(rMDGL)在宿主菌中得到表达,表达量可达菌体总蛋白量的45.2%。重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一区带,其相对分子质量为41 000。以橄榄油为底物时没有检测到酶活性,以单硬脂酸甘油脂为底物时酶活性达到225 nmol/s。该基因在原核系统中表达仍具有酶活性,说明MDGL的糖基化对其生物学活性并不是必不可少的。
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关键词
卡门柏青霉-PG
3
甘油单-双酰酯脂肪酶
基因表达
下载PDF
职称材料
产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达
被引量:
12
2
作者
宋占科
王小艳
+1 位作者
陈国强
李春
《化工学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期3101-3106,共6页
产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU...
产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6mg·L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368U·mg-1。
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关键词
甘草酸
Β-葡萄糖醛酸苷酶
克隆
产紫青霉
下载PDF
职称材料
题名
卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析
被引量:
4
1
作者
李琦
王雅琴
谭天伟
邱俊康
机构
北京化工大学生命科学与技术学院
出处
《北京化工大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期12-15,共4页
基金
北京市生物加工过程重点实验室开放项目(SYS100100421)
文摘
以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致。将此基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶(rMDGL)在宿主菌中得到表达,表达量可达菌体总蛋白量的45.2%。重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一区带,其相对分子质量为41 000。以橄榄油为底物时没有检测到酶活性,以单硬脂酸甘油脂为底物时酶活性达到225 nmol/s。该基因在原核系统中表达仍具有酶活性,说明MDGL的糖基化对其生物学活性并不是必不可少的。
关键词
卡门柏青霉-PG
3
甘油单-双酰酯脂肪酶
基因表达
Keywords
penicilliurn carnembetlii-pg3
mono-and diacylglycerol lipase(MDGL)
gene expression
分类号
TQ033 [化学工程]
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达
被引量:
12
2
作者
宋占科
王小艳
陈国强
李春
机构
北京理工大学生命科学与技术学院
石河子大学化学化工学院
出处
《化工学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期3101-3106,共6页
基金
国家自然科学基金项目(20776017)
北京市自然科学基金项目(5072028)
北京理工大学基础研究基金项目(20060642004)~~
文摘
产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6mg·L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368U·mg-1。
关键词
甘草酸
Β-葡萄糖醛酸苷酶
克隆
产紫青霉
Keywords
glycyrrhizin
β-glucuronidase
cloning
penicilliurn
purpurogenu
Li-
3
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
TQ925 [轻工技术与工程—发酵工程]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析
李琦
王雅琴
谭天伟
邱俊康
《北京化工大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006
4
下载PDF
职称材料
2
产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达
宋占科
王小艳
陈国强
李春
《化工学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2008
12
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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