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基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 李鹏 雷梦瑶 +9 位作者 冯丽丽 王振伟 管春晓 郑洪双 王俊茹 王利平 李炎锦 吴欣媛 刘兴友 金前跃 《河南农业科学》 北大核心 2024年第7期133-141,共9页
Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,... Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 penton蛋白 间接ELISA 抗体检测
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禽腺病毒4型Penton和Fiber1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 方天 李乔斌 +3 位作者 冯孝傲 朱二鹏 陈常秀 程振涛 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期54-61,共8页
为开展禽腺病毒4型(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton)和纤丝蛋白(Fiber1)多克隆抗体的制备及评价,研究通过对Penton和Fiber1基因优势抗原表位基因片段进行生物信息学分析,设计特异性引物PCR扩增获得Penton和Fiber1优势抗原表位基因片段,将其... 为开展禽腺病毒4型(FAdV-4)五邻体蛋白(Penton)和纤丝蛋白(Fiber1)多克隆抗体的制备及评价,研究通过对Penton和Fiber1基因优势抗原表位基因片段进行生物信息学分析,设计特异性引物PCR扩增获得Penton和Fiber1优势抗原表位基因片段,将其克隆至原核表达载体pColdⅠ,转入表达宿主菌BL21(DE3)进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,将纯化、鉴定后的目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对抗体进行Western blot鉴定及间接ELISA抗体效价测定。结果可见,FAdV-4 Penton基因序列共编码525个氨基酸,Fiber1基因序列共编码432个氨基酸,其优势抗原表位点分别有7、6个区域,且均集中于N端;成功构建pColdⅠ-P和pColdⅠ-F1重组原核表达质粒,其诱导表达的重组蛋白Penton和Fiber1均与His标签单抗发生特异性反应,动物免疫获得的Penton、Fiber1多克隆抗体均能与目的蛋白反应形成特异性条带,且Penton多克隆抗体效价高于Fiber1多克隆抗体。综上,研究获得的纯化重组蛋白Penton较Fiber1蛋白表达量更高,免疫后血清抗体效价更高,更具有制备多克隆抗体的优势。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 penton蛋白 Fiber1蛋白 生物信息学分析 多克隆抗体
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血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 罗思思 邓显文 +7 位作者 谢芝勋 张艳芳 张民秀 谢志勤 谢丽基 李孟 王盛 李小凤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3092-3099,共8页
【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白... 【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 penton蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞株
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安卡拉病毒贵州流行株penton基因分子特性分析 被引量:1
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作者 何玲 张云丹 +5 位作者 李乔斌 杨源 周碧君 文明 程振涛 岳筠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第6期1892-1901,共10页
为了解安卡拉病毒贵州流行株penton基因分子特征,本试验参考GenBank上FAdV基因序列设计合成特异性引物,对penton基因CDS区进行扩增,运用生物信息学软件对penton基因的核苷酸序列、蛋白质理化性质、信号肽、二级结构、三级结构和B细胞表... 为了解安卡拉病毒贵州流行株penton基因分子特征,本试验参考GenBank上FAdV基因序列设计合成特异性引物,对penton基因CDS区进行扩增,运用生物信息学软件对penton基因的核苷酸序列、蛋白质理化性质、信号肽、二级结构、三级结构和B细胞表位进行分析。结果显示,3株FAdV(GZ-BJ、GZ-QL、GZ-LPS)penton基因片段大小均为1578 bp。系统进化树分析显示,GZ-BJ、GZ-QL、GZ-LPS均属于FAdV-4型,3株FAdV-4核苷酸同源性在99.9%~100%之间,推导氨基酸序列同源性在99.8%~100%之间;与国内其他分离株、国外分离株差异不大。蛋白理化性质分析显示,该蛋白属于不稳定的、不具有跨膜结构的亲水蛋白,其二级结构主要以无规则卷曲为主(54.29%);结构域预测结果显示,penton蛋白只含有一个低复杂度区域;B细胞表位预测发现,penton基因编码的氨基酸可能存在3个优势抗原表位区,分别为5-171、207-236和420-462位氨基酸处。本试验结果表明,安卡拉病毒penton基因相对保守,存在多个优势抗原表位,可作为安卡拉病毒防控研究靶蛋白,为该病毒防控与致病机理研究奠定基础。 展开更多
关键词 安卡拉病毒 penton基因 克隆 生物信息学分析
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Ⅰ群禽腺病毒4型Penton基因的克隆及原核表达 被引量:5
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作者 高辉 张梦荷 +6 位作者 冯茹 汤亚方 张毫 陈成 吕涛 王承宝 杨彦涛 《动物医学进展》 北大核心 2018年第5期1-5,共5页
通过对Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型毒株Penton基因的克隆及原核表达,获得可溶性表达的Penton蛋白。依据GenBank已公布的Ⅰ群禽腺病毒4型Penton全基因设计引物,对实验室保存有Ⅰ群禽腺病毒血清4型毒株进行PCR扩增及测序分... 通过对Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型毒株Penton基因的克隆及原核表达,获得可溶性表达的Penton蛋白。依据GenBank已公布的Ⅰ群禽腺病毒4型Penton全基因设计引物,对实验室保存有Ⅰ群禽腺病毒血清4型毒株进行PCR扩增及测序分析,并将Penton基因克隆至pCold-SUMO载体,然后进行诱导表达。测序结果及序列分析表明,Ⅰ群禽腺病毒血清4型毒株为近几年国内流行毒株的新型突变株,命名为SX17株(GenBank登录号为MF592716);SDS-PAGE电泳及Western blot结果表明,获得可溶性表达的Penton蛋白,且Penton蛋白表达、过柱的效果较好,分离后蛋白纯度可达到80%~90%。原核表达获得了可溶性表达的Penton蛋白,且纯化出的蛋白具有较高的纯度,为后续研究Ⅰ群禽腺病毒4型Penton蛋白的生物活性以及制备其蛋白抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 penton蛋白 原核表达 可溶性表达 蛋白纯化
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鸡腺病毒12个血清型代表毒株Penton蛋白基因分析 被引量:1
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作者 宋佳诚 侯力丹 +2 位作者 吴应凯 杨亚茜 李俊平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期3417-3426,共10页
为了解鸡腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)Penton基因的遗传进化规律,试验根据GenBank中已公布的各基因型序列设计特异性引物,通过PCR技术分别扩增12个血清型毒株的Penton基因,连接至pEASY-Blunt Simple Cloning Vector上进行序列测定,并... 为了解鸡腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)Penton基因的遗传进化规律,试验根据GenBank中已公布的各基因型序列设计特异性引物,通过PCR技术分别扩增12个血清型毒株的Penton基因,连接至pEASY-Blunt Simple Cloning Vector上进行序列测定,并将12个血清型毒株Penton蛋白的核苷酸序列与NCBI上已公布的标准毒株的核苷酸序列使用ClustalW法进行分析比对,绘制遗传进化树。结果显示,12种血清型Penton蛋白核苷酸序列与各血清型标准毒株同源性均在99.2%以上,其中FAdV-1、FAdV-2、FAdV-3、FAdV-4、FAdV-6、FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-10、FAdV-11与对应标准株同源性高达100%,这进一步证实了实验室保存毒株与世界相应标准毒株的一致性。Penton蛋白虽然保守性较高,但不同种之间仍存在明显差异。FAdV-A1与其他种毒株同源性为70.6%~73.3%;FAdV-B5与其他种毒株同源性为70.6%~77.9%;FAdV-C同种不同血清型之间核苷酸同源性为99.6%,FAdV-C4与其他种之间同源性71.2%~73.4%;FAdV-D同种不同血清型之间核苷酸同源性为95.6%~98.7%,与其他种之间最高为85.3%;FAdV-E同种不同血清型之间核苷酸同源性为98.2%~99.4%,不同种间最高为85.3%。即相同种毒株之间差异较小,不同种毒株之间差异较大。依据Penton蛋白的核苷酸序列同样可以将FAdV分为A、B、C、D、E 5个种。本研究通过成功克隆FAdV 12种血清型Penton基因,并进行遗传进化分析,为今后对FAdV诊断、监测及毒株鉴定提供了参考。 展开更多
关键词 鸡腺病毒(FAdV) penton蛋白 序列分析
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Baculovirus-expressed FAdV-4 penton base protein protects chicken against hepatitis-hydropericardium syndrome 被引量:2
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作者 ZHANG Jun-qin WEI Yan-ming +3 位作者 HUANG Kun SUN Xiao-mei ZOU Zhong JIN Mei-lin 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第11期2598-2604,共7页
Hepatitis-hydropericardium syndrome(HHS)is an infectious disease caused by fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4).Several structural and non-structural proteins of FAdV-4 have been expressed in Escherichia coli and baculo... Hepatitis-hydropericardium syndrome(HHS)is an infectious disease caused by fowl adenovirus serotype 4(FAdV-4).Several structural and non-structural proteins of FAdV-4 have been expressed in Escherichia coli and baculovirus expression system to develop candidate subunit vaccines.However,the protective efficiency of baculovirus-expressed penton base protein has not been assessed.In this study,two recombinant capsid proteins,penton base and fiber-2,were constructed.And then,penton base and fiber-2 were administrated alone or together to specific pathogen-free(SPF)chickens at 14 days of life and boosted at 28 days of life.At 42 days of life,the immunized groups and the control group were challenged with FAdV-4 virulent strain.Results show that inoculating penton base or penton base+fiber-2 provided 100%protection to the chickens.All groups vaccinated with the recombinant protein produced detectable antibodies and showed no apparent lesions.Thus,baculovirus-expressed penton base protein is a promising candidate subunit vaccine. 展开更多
关键词 FOWL adenovirus SEROTYPE 4 hepatitis-hydropericardium SYNDROME penton base subunit vaccine BACULOVIRUS expression system
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Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定及penton基因序列分析 被引量:1
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作者 王彩先 陆冰洋 +3 位作者 刘华栋 李婷婷 唐娟 丁树荣 《中国动物保健》 2021年第1期103-106,共4页
为调查山西省Ⅰ群禽腺病毒感染状况,2018—2020年从山西各地区鸡场采集样品204份,通过SPF鸡胚传代增殖,设计检测引物及penton基因全序列引物,经PCR鉴定,选取阳性毒株进行免疫琼脂扩散试验、致细胞病变和鸡胚致病性试验。结果显示:60份... 为调查山西省Ⅰ群禽腺病毒感染状况,2018—2020年从山西各地区鸡场采集样品204份,通过SPF鸡胚传代增殖,设计检测引物及penton基因全序列引物,经PCR鉴定,选取阳性毒株进行免疫琼脂扩散试验、致细胞病变和鸡胚致病性试验。结果显示:60份为Ⅰ群禽腺病毒阳性,阳性率为29.4%(60/204),从60份阳性Ⅰ群禽腺病毒中选取8株病毒与Ⅰ群禽腺病毒阳性血清反应,均呈现阳性;并且都可以导致鸡胚肝细胞发生形态变化,增强其折光性;鸡胚试验可致鸡胚发育不良或致死,有明显病变发生。将克隆的8株penton基因进行序列分析比对及遗传进化分析,显示与Ⅰ群禽腺病毒血清1型和血清4型亲缘关系最近,同源性高达99.6%~100%,其中6株为血清1型,2株为血清4型;与Ⅰ群禽腺病毒其它血清型同源性达72.0%~75.8%,与Ⅱ群禽腺病毒和Ⅲ群禽腺病毒同源性为49.0%~52.8%。研究提示,Ⅰ群禽腺病毒普遍存在于养殖群体中,应当加强对Ⅰ群禽腺病毒的检测和免疫,防治其它传染病的继发感染,以提高动物生产的安全。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 分离鉴定 penton基因
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Establishment of Indirect ELISA Method for Detection of Penton Protein of Fowl Adenovirus GroupⅠ
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作者 LUO Si-si XIE Zhi-xun +5 位作者 XIE Zhi-qin LIU Jia-bo PANG Yao-shan DENG Xian-wen XIE Li-ji FAN Qing 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2012年第6期250-253,257,共5页
[ Objective] To establish an indirect ELISA method which can detect fowl adenovirus group I (FAVI) antibody easily and rapidly. [ Method] The expressed and purified FAVI penton recombinant protein was used to be an ... [ Objective] To establish an indirect ELISA method which can detect fowl adenovirus group I (FAVI) antibody easily and rapidly. [ Method] The expressed and purified FAVI penton recombinant protein was used to be an antigen, optimized the reaction conditions, and then estab- lished the FAVI indirect penton-ELISA antibody detection method. [ Result] The optimal coating concentration of antigen was 1.5 μg/hole, the opti- mal coating condition was 37℃ 2 h and 4 ℃ overnight; the optimal dilution of serum was 1:100; the optimal working concentration of anti-chicken IgG-HRP was 1:2 000; the positive and negative critical value of ELISA was 0.335. Detected the 100 chicken serum samples by the established penton-ELISA method, the positive rate was 41%. [ Conclusion] Through the study, ~e established penton-ELISA method has a good specificity, sensitivity and reproducibility. And it offers an effective tool for the diagnosis of FAVI, the survey of antibody and epidemiology survey. 展开更多
关键词 Fowl adenovirus group I penton ELISA
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血清4型禽腺病毒Hexon-Penton串联蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:3
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作者 庞洪泽 吴同垒 +2 位作者 李蕴玉 李佩国 闫艳娟 《中国家禽》 北大核心 2019年第7期20-24,共5页
为了获得血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体蛋白(Hexon)和五邻体蛋白(Penton)的串联蛋白及其多克隆抗体血清,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出Hexon基因和Penton基因,使用重叠PCR将Hexon基因和Penton基因串联,得到Hexon-Penton(... 为了获得血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体蛋白(Hexon)和五邻体蛋白(Penton)的串联蛋白及其多克隆抗体血清,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出Hexon基因和Penton基因,使用重叠PCR将Hexon基因和Penton基因串联,得到Hexon-Penton(HP)串联基因,将HP基因导入表达载体pET32a(+),获得重组质粒pET32a-HP,将其转化表达菌株BL21经IPTG诱导表达,得到HP原核蛋白,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,HP原核蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。SDS-PAGE分析显示,HP原核蛋白分子质量约为108 ku,Western Blot结果显示,HP原核蛋白可与His标签抗体和多克隆抗体血清特异性识别,说明HP原核蛋白具有良好的免疫原性,为进一步建立FAdV-4的血清学检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 五邻体蛋白 多克隆抗体血清
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昆明市一起聚集性发热疫情中腺病毒3型Penton base、Hexon和Fiber基因遗传进化分析
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作者 刘艳艳 古文鹏 +5 位作者 段忠文 王钰 龚娇 茶琦雁 吴林蔚 侯敏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期241-248,共8页
目的对昆明市一起聚集性发热疫情样本进行腺病毒检测和遗传进化分析。方法采集典型发热患者咽拭子标本,使用微流体芯片技术进行30种常见呼吸道传染病病原体核酸检测。对腺病毒核酸阳性标本使用Nanopore三代高通量测序技术进行Penton bas... 目的对昆明市一起聚集性发热疫情样本进行腺病毒检测和遗传进化分析。方法采集典型发热患者咽拭子标本,使用微流体芯片技术进行30种常见呼吸道传染病病原体核酸检测。对腺病毒核酸阳性标本使用Nanopore三代高通量测序技术进行Penton base、Hexon和Fiber三个重要基因全长序列扩增、测定和分型鉴定,构建系统进化树,开展分子变异、遗传进化等分析。结果共采集5份标本,均检出呼吸道腺病毒及流感嗜血杆菌。对腺病毒进行Nanopore三代基因测序最终均获得Penton base、Hexon和Fiber基因全长编码区核苷酸序列,5份标本之间3个基因核苷酸相似性依次为100.0%、99.9%~100.0%和100.0%,氨基酸同源性均为100.0%;与HAdV3原型株(AY599834)核苷酸相似性最高,分别为98.6%、98.7%和98.9%。系统发育分析表明,3个基因系统进化树分析结果基本一致,人腺病毒3型(HAdV3)原型株单独一支,本研究中HAdV3序列均划分在同一进化分支上,与较早年份国外及中国台湾毒株亲缘关系较远,与近年国内外毒株亲缘关系较近,与2019年日本株(LC703523)和中国广州株(MZ540961)高度同源。与原型株比较分析昆明HAdV3氨基酸突变位点,Penton base有5处变异;Hexon有10处变异;Fiber有11处变异。结论本起疫情中的腺病毒在Penton base、Hexon和Fiber基因全长序列中型别分型结果一致,为P3H3F3型,与包括原型株在内的国内外HAdV3毒株显示出非常小的遗传变异。与原型株相比发生了多处氨基酸位点突变,并且多数氨基酸位点变异发生在蛋白质的高变区或功能区,其中Hexon蛋白中M7L为昆明序列独有氨基酸突变位点。 展开更多
关键词 人腺病毒3型 五邻体基座蛋白 六邻体蛋白 纤维蛋白 遗传进化
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禽腺病毒血清4型fiber-2和penton蛋白亚单位疫苗初步研究及免疫效果评价 被引量:2
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作者 刘世佳 尚宵敏 +5 位作者 王浩 周睿 李博硕 孙晰瑶 韩静静 杜恩岐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1162-1166,1186,共6页
选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-S... 选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白基因序列克隆到pET28a(+)载体上并送至北京天一辉远生物科技有限公司进行基因合成,将合成的质粒分别命名为pET-28a-msyb-fiber-2-Shaft 2和pET-28a-msyb-penton。通过原核表达系统进行蛋白表达并使用镍柱纯化。经BCA定量后,用PBS分别将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白质量浓度稀释至1000,500,250 mg/L,再将相同质量浓度的fiber-2-Shaft 2和penton蛋白按1∶1体积比混合后作为抗原,配伍ISCOMs佐剂,0.2 mL/只免疫30日龄SPF鸡,即高剂量组免疫fiber-2-Shaft 2和penton蛋白各100μg、中剂量组各50μg、低剂量组各25μg。一免后14 d进行二次免疫,采集二免后7,14,21 d血清检测特异性抗体和中和抗体,并在二免后21 d攻毒。结果显示,成功表达出fiber-2-Shaft 2和penton蛋白,大小分别为69,93 kDa,镍柱纯化后可获得高纯度的蛋白;二免后14 d高中低量组的中和效价依次为1280,640,640,攻毒后阴性对照组表现出明显的临床症状,2~3 d后死亡,疫苗组均未出现任何临床症状。结果表明,利用禽腺病毒血清4型JLJ13株fiber-2-Shaft 2和penton蛋白混合配伍ISCOMs佐剂制备的亚单位疫苗免疫保护效果明显。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber-2 penton 亚单位疫苗 免疫效果评价
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Ⅰ群禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:4
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作者 侯力丹 陈晓春 +5 位作者 薛麒 邓永 孔冬妮 杨承槐 刘丹 李俊平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期41-46,共6页
在同源性分析基础上,确定了12个血清型penton蛋白同源性最高的2段基因并通过linker进行连接,以该串联基因原核表达蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并筛选到2株可分泌FAdV-Ⅰpenton蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(Mab-penton-6#和M... 在同源性分析基础上,确定了12个血清型penton蛋白同源性最高的2段基因并通过linker进行连接,以该串联基因原核表达蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并筛选到2株可分泌FAdV-Ⅰpenton蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(Mab-penton-6#和Mab-penton-9#)。2株单克隆抗体小鼠腹水经间接免疫荧光等鉴定,可识别FAdV-Ⅰ的所有血清型代表毒株,与鸡减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽呼肠孤病毒等均不发生反应,特异性良好,效价分别为1∶8000和1∶4000,最终选取Mab-penton-6#大量制备单克隆抗体。本试验成功研制出FAdV-I的penton蛋白单克隆抗体,为FAdV-Ⅰ检测方法的建立奠定了良好基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒I群 单克隆抗体 penton蛋白
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鸡腺病毒血清4型和11型Penton蛋白的表达及交叉反应性评价 被引量:3
14
作者 秦亚平 刘亮亮 +1 位作者 刘胜旺 李慧昕 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期704-711,共8页
为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应... 为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应,评价FAdV-4与FAdV-11型毒株Penton蛋白的交叉反应性。Western-blot检测结果显示,FAdV-4型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,但与FAdV-11型的血清无交叉反应性;FAdV-11型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,同时与FAdV-4型的血清有微弱的交叉反应。上述结果表明,FAdV-4型血清可同时识别FAdV-4型和FAdV-11型病毒的Penton蛋白。对2株病毒Penton蛋白的氨基酸序列进行比对,结果显示,两种血清型毒株的Penton蛋白的N端差异较大,这个差异区可能与蛋白的主要抗原表位区相关,进而影响血清学交叉反应性及交叉反应的强度,这可能是造成两种血清型毒株Penton蛋白交叉反应差的原因之一。 展开更多
关键词 鸡腺病毒 血清4型 血清11型 penton蛋白 交叉反应
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血清4型禽腺病毒hexon-penton串联蛋白在293T细胞中的表达 被引量:1
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作者 庞洪泽 吴同垒 +2 位作者 李蕴玉 李佩国 闫艳娟 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1109-1113,共5页
为了获得293T细胞表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体(hexon)和五邻体(penton)的串联蛋白,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出hexon基因和penton基因,其大小分别为1014,900 bp。使用重叠PCR将hexon基因和penton基因串联,得到h... 为了获得293T细胞表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体(hexon)和五邻体(penton)的串联蛋白,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出hexon基因和penton基因,其大小分别为1014,900 bp。使用重叠PCR将hexon基因和penton基因串联,得到hexon-penton(HP)串联基因。将HP基因导入表达质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-HP,转染293T细胞,获得HP真核蛋白。经间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定结果表明,HP真核蛋白可与多抗血清发生特异性反应,蛋白质相对分子质量约为90000,HP串联蛋白在293T细胞中获得了良好表达。研究结果表明成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-HP,并在真核细胞中获得表达,为进一步研制FAdV-4核酸疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 五邻体蛋白 真核蛋白
原文传递
人腺病毒分子分型方法及其意义
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作者 李竹雲 杨泽 潘丽峰 《医学综述》 CAS 2023年第22期4861-4866,共6页
人腺病毒(HAdV)是一种重要的病原体,其分子分型对于了解HAdV的生物学、流行病学和种属结构均至关重要。目前传统的血清学方法已确定了1~51种血清型,但该方法存在一定局限性。新型的基因分型方法主要根据五邻体蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋... 人腺病毒(HAdV)是一种重要的病原体,其分子分型对于了解HAdV的生物学、流行病学和种属结构均至关重要。目前传统的血清学方法已确定了1~51种血清型,但该方法存在一定局限性。新型的基因分型方法主要根据五邻体蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋白的序列分析确定了52~113型,其他新型HAdV的确定也主要依据基因组序列分析。因此,未来全面了解HAdV的分子分型方法及作用机制,可以为相关疾病的治疗提供新思路。 展开更多
关键词 人腺病毒 分子分型 五邻体蛋白 六邻体蛋白 纤维蛋白
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Ⅰ群禽腺病毒五邻体基因的克隆及原核表达 被引量:17
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作者 罗思思 谢芝勋 +5 位作者 邓显文 刘加波 庞耀珊 谢志勤 谢丽基 彭宜 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期154-157,共4页
根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转... 根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转化到感受态细胞DH5α中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,获得了45.9 ku的融合蛋白。用不同的IPTG浓度和时间诱导表达,得出诱导的最佳IPTG浓度为1.5 mmol/L,最佳时间为4 h。用尿素提取包涵体表达产物,得到penton纯化蛋白,浓度为2.98 mg/mL。经Western-bolt分析,该蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 克隆 penton 原核表达
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山茱萸多糖PFCCⅠ抗氧化性能研究 被引量:19
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作者 李平 王艳辉 马润宇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期34-36,39,共4页
研究了山茱萸多糖PFCCⅠ的抗氧化性能。利用烘箱法研究多糖对油脂的抗氧化活性,结果表明,碱提山茱萸多糖PFCCⅠ可有效抑制植物油氧化;利用Fenton反应检测多糖PFCCⅠ对羟基自由基(·OH)的清除作用,当清除率达50%时所需浓度分别为80μ... 研究了山茱萸多糖PFCCⅠ的抗氧化性能。利用烘箱法研究多糖对油脂的抗氧化活性,结果表明,碱提山茱萸多糖PFCCⅠ可有效抑制植物油氧化;利用Fenton反应检测多糖PFCCⅠ对羟基自由基(·OH)的清除作用,当清除率达50%时所需浓度分别为80μg/mL;通过邻苯三酚自氧化反应检测二者对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力,当清除率达50%时所需PFCCⅠ浓度为34.9μg/mL。 展开更多
关键词 山茱萸多糖 PFCCⅠ 抗氧化性能 植物油氧化 penton反应 烘箱法 中药 功能性食品
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禽腺病毒血清4型纳米PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:14
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作者 王利丽 郑丽 +6 位作者 李富强 李秀丽 任卫科 路超 张莉 董志民 鄢明华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期701-704,共4页
为建立一种快速有效检测禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的方法,本研究根据FAdV-4五邻体(Penton)基因序列,设计合成1对特异性引物,经过条件优化,建立了检测FAdV-4的纳米PCR方法(Nano PCR)。特异性试验结果显示,该方法对鸡新城疫病毒等12种家禽... 为建立一种快速有效检测禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的方法,本研究根据FAdV-4五邻体(Penton)基因序列,设计合成1对特异性引物,经过条件优化,建立了检测FAdV-4的纳米PCR方法(Nano PCR)。特异性试验结果显示,该方法对鸡新城疫病毒等12种家禽常见病原及国内报导的FAdV-1、FAdV-2、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11等5个主要血清型病毒的扩增结果均为阴性,仅FAdV-4检测结果为阳性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对FAdV-4的最低核酸检出量为54.0拷贝/μL,较常规PCR方法高10倍,敏感性较高。应用该方法和病毒分离培养法同时对87份临床样品进行检测,二者均检出14份阳性样品,总体符合率为100%。以上结果表明本研究建立的Nano PCR方法特异性好、敏感性高,可以用于FAdV-4的临床检测和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 五邻体基因 NanoPCR检测
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减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定 被引量:10
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作者 肖妙 于志丹 +1 位作者 马波 王君伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期83-87,共5页
根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株... 根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者的氨基酸完全一致。然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET-30a(+),获得的阳性克隆命名为pET-30a-Penton。将pET-30a-Penton转化E.coli Rosetta,经37℃、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达5 h,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0 ku。Western Blot试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 五邻体 原核表达 抗原性
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