直接用噬菌体肽进行功能性分析的研究

通过对胰蛋白酶抑制剂的筛选发现，噬菌体肽库不仅可以用于亲和性筛选，而且噬菌体肽（ｐｈａｇｅｐｅｐｔｉｄｅ——ｐｅｐｔｉｄｅｄｉｓｐｌａｙｉｎｇｏｎｐｈａｇｅ）可以直接用于对亲和筛选得到的克隆进行胰蛋白酶抑制实验，即所谓的功能性筛选．功能性筛选前后的测序结果表明用噬菌体肽直接进行功能性筛选确实能够筛去大部分的非抑制剂克隆．

利用噬菌体随机肽库筛选抗呼吸道合胞病毒多肽的实验研究

目的 采用完整的呼吸道合胞病毒 (respiratorysyncytialvirus ,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库 ,以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽。方法 Hep 2细胞培养RSV ,采用蔗糖密度梯度 (30 %、4 5 %、6 0 % )和超滤离心纯化病毒。病毒用生物素标记后 ,应用M13噬菌体PⅢ呈现随机 7肽库进行筛选。经过 3轮淘筛后 ,ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与RSV的亲和力 ,通过TCID50检测其抗病毒复制能力。选取与RSV具有高亲和力的阳性克隆进行DNA测序 ,据此推导多肽的氨基酸序列。结果 经鉴定得到 13个阳性噬菌体克隆能与RSV呈高亲和力结合 ,其中 3个克隆体外能明显抑制RSV的复制 ,使TCID50 由 10 - 8.1 SFU ml分别降至 10 - 4.1 、10 - 4.3、10 - 3.8SFU ml。DNA测序发现各个克隆之间缺乏明显的同源序列 ,但普遍含有较多的脯氨酸。结论 通过噬菌体肽库能够筛选到抗病毒作用的阳性克隆 。

应用噬菌体随机七肽库筛选人角质细胞生长因子模拟肽

目的应用噬菌体随机七肽库生物淘选人角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)噬菌体模拟肽。方法以人KGF单克隆抗体为靶,对噬菌体随机七肽库进行4轮生物淘选,测定噬菌体滴度。随机挑取单克隆噬菌体行ELISA检测其结合力,对结合活性较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,测序,并应用Basic BLAST系统行序列相似性和同源性分析。结果经过4轮生物淘选获得的噬菌体滴度逐渐升高,特异性噬菌体模拟肽获得了富集,行ELISA检测的单克隆噬菌体滴度均可达到2.0×1014 pfu/mL。取吸光度值显示与特异性抗体具有较好结合性的单克隆噬菌体进行测序,共获得26个与促进分裂、生长有关的碱基序列,其中有2个序列与人KGF相似;同源序列分析显示26个碱基序列的共同序列与人KGF的部分序列相似。结论从噬菌体随机七肽库中可淘选到与人KGF DNA序列相似或相关的噬菌体模拟肽,有望改善人KGF性能,促进创面愈合和改善组织工程皮肤替代物的性能。