PAD4介导H3cit促结肠癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的机制研究

目的 探究肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的瓜氨酸化组蛋白H3(H3cit)在结肠癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化中的作用及其相关机制。方法 收集我院30例结肠癌患者的血清和30例健康受试者的血清,ELISA检测血清中PAD4和H3cit水平,并分析两者相关性。将oe-NC、过表达PAD4(oe-PAD4)和sh-NC、sh-NLRP3载体转染至人结肠癌SW480细胞中,并设为oe-NC组、oe-PAD4组、oe-PAD4+sh-NC组、oe-PAD4+sh-NLRP3组。采用qRT-PCR检测PAD4、NLRP3、IL-1β、IL-18基因表达水平;Western blot检测PAD4、H3cit、NLRP3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖水平;Transwell检测细胞侵袭水平;ChIP-qPCR检测H3cit在NLRP3转录起始位点(TSS)的富集水平。结果 与健康受试者比较,结肠癌患者血清中PAD4和H3cit水平均升高,且两者呈正相关(P<0.05)。与oe-NC组比较,oe-PAD4组PAD4、NLRP3、IL-1β、IL-18基因表达水平升高,PAD4、H3cit、NLRP3、N-cadherin蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,细胞增殖、侵袭水平升高,H3cit在NLRP3 TSS区富集增加(P<0.05);与oe-PAD4+sh-NC组比较,oe-PAD4+sh-NLRP3组NLRP3、IL-1β、IL-18基因表达水平降低,NLRP3和N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05)。结论 结肠癌患者体内PAD4和H3cit水平升高,PAD4介导的H3cit通过转录调控NLRP3的表达,促进结肠癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化。

PAD4介导中性粒细胞胞外诱捕网促甲状腺癌细胞增殖、侵袭的机制研究

目的探究肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在甲状腺癌细胞增殖、侵袭和细胞周期中的作用机制以及临床相关性研究。方法收集60例甲状腺癌患者和60例健康受试者的外周血,ELISA检测血清中PAD4和组蛋白H3瓜氨酸化(H3cit)水平,并分析甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平与疾病进展的相关性。提取甲状腺癌患者和健康受试者外周血中性粒细胞,qRT-PCR检测PAD4 mRNA表达水平,离子霉素刺激和绿菁染色检测NETs形成水平。将NETs、GSK484与人甲状腺癌细胞株CAL-62共孵育,分为Control组、NETs组和NETs+GSK484组。采用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞增殖和侵袭水平以及细胞周期进展。结果与健康受试者相比,甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),且PAD4和H3cit水平呈正相关(P<0.05)。甲状腺癌患者的PAD4和H3cit水平均与TNM分期有关(P<0.05)。与健康受试者相比,甲状腺癌患者外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达及NETs形成水平升高(P<0.05)。与Control组相比,NETs组细胞增殖、侵袭水平升高(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05)。GSK484可抑制NETs形成。与NETs组相比,NETs+GSK484组细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G1期细胞比例升高(P<0.05)。结论PAD4介导的NETs通过激活细胞周期进展,促进甲状腺癌细胞增殖和侵袭,加速甲状腺癌疾病进展。

缺氧环境下HIF-1调控PAD4介导的H3cit促进子宫内膜腺上皮细胞凋亡

目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过慢病毒转染法将sh-NC、sh-HIF-1、oe-NC、oe-PAD4转染至CM-H058,缺氧环境培养并分组为:sh-NC组、sh-HIF-1组、sh-HIF-1+oe-NC组和sh-HIF-1+oe-PAD4组,检测各组细胞HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达和细胞凋亡水平;检测PAD4、H3cit和H3K27ac在Caspase3、Caspase7 TSS富集水平。结果:与常氧组比较,缺氧组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-HIF-1组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达降低(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05),HIF-1在PAD4 TSS富集水平降低(P<0.05)。与sh-HIF-1+oe-NC组比较,sh-HIF-1+oe-PAD4组PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。结论:缺氧环境下HIF-1促进PAD4表达。PAD4及其催化的H3cit进一步在Caspase3、Caspase7 TSS富集,促进Caspase3、Caspase7转录和表达,最终诱导子宫内膜腺上皮细胞凋亡。

PAD4依赖的中性粒细胞胞外诱捕网加重包虫囊液所致过敏性休克

目的探讨精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)依赖的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在包虫囊液所致过敏性休克(AS)中的作用和相关机制。方法将野生型(WT)和PAD4敲除(PAD4^(-/-))的C57/B6小鼠分为4组:WT组、WT模型组、PAD4^(-/-)组和PAD4^(-/-)模型组,每组10只。WT模型组和PAD4^(-/-)模型组腹腔注射包虫囊液建立包虫感染小鼠模型。1个月后,两个模型组小鼠再次注射包虫囊液,监测各组小鼠休克和死亡情况。采用qRT-PCR检测各组小鼠脾脏中中性粒细胞PAD4 mRNA表达水平,采用绿菁染色法检测各组小鼠脾脏NETs形成水平,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血单核细胞(PBMC)中Th1/Th2细胞比例,采用ELISA检测各组小鼠血清中IL-4、IL-5和IgE水平。体外将NETs与小鼠PBMC共孵育,分为对照组和NETs组,采用流式细胞术检测各组细胞中Th1/Th2细胞比例,ELISA检测各组细胞上清中IL-4、IL-5和IgE水平。结果与WT组比较,WT模型组小鼠休克率和死亡率升高,脾脏中中性粒细胞PAD4 mRNA表达和NETs形成水平升高(P<0.05),PBMC中Th1/Th2细胞比例降低(P<0.05),IL-4、IL-5和IgE水平升高(P<0.05)。与WT模型组比较,PAD4^(-/-)模型组小鼠休克率和死亡率降低,脾脏中中性粒细胞PAD4 mRNA表达和NETs形成水平降低(P<0.05),PBMC中Th1/Th2细胞比例升高(P<0.05),IL-4、IL-5和IgE水平降低(P<0.05)。与PAD4^(-/-)组比较,PAD4^(-/-)模型组小鼠脾脏中中性粒细胞PAD4 mRNA表达和NETs形成水平、PBMC中Th1/Th2细胞比例以及IL-4、IL-5和IgE水平无显著性差异(P>0.05)。与对照组比较,NETs组Th1/Th2细胞比例降低(P<0.05),上清中IL-4、IL-5和IgE水平升高(P<0.05)。结论包虫囊液感染可诱导PAD4依赖的NETs形成,加重小鼠过敏性休克。敲除PAD4可抑制NETs形成,并通过恢复失衡的Th1/Th2细胞比例最终缓解包虫囊液所致的过敏性休克。

高糖环境下成骨细胞PAD4表达和转录调控对成骨功能的影响

目的:探究高糖环境下成骨细胞中肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)表达和转录调控对成骨细胞的作用及其相关机制。方法:分别使用正常(2 g/L)和高糖(4 g/L)培养基培养hFOB1.19成骨细胞,分为正常组和高糖组;并在高糖环境下通过慢病毒将sh-PAD4和sh-NC转染至hFOB1.19成骨细胞,分为sh-PAD4组和sh-NC组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测各组细胞PAD4、H3cit、NFAT2、OCN和ALP表达,染色质免疫共沉淀PCR技术(ChIP-qPCR)检测PAD4、H3cit、H3K27ac在NFAT2、OCN和ALP转录起始位点(TSS)的富集,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖水平,茜素红S染色法测定细胞矿化能力。结果:与正常组比较,高糖组PAD4、H3cit、NFAT2、OCN和ALP表达升高,PAD4、H3cit、H3K27ac在NFAT2、OCN和ALP TSS富集水平增加,细胞增殖水平和矿化能力升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-PAD4组PAD4、H3cit、NFAT2、OCN和ALP表达降低,PAD4、H3cit、H3K27ac在NFAT2、OCN和ALP TSS富集水平降低,细胞增殖水平和矿化能力降低(P<0.05)。结论:高糖环境下PAD4及其介导的H3cit表达增加,后者在NFAT2、OCN和ALP TSS富集,促进成骨相关基因表达、成骨细胞增殖和分化。

PAD4介导的瓜氨酸化组蛋白在中耳炎发病进程中的机制研究

目的探究精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)在中耳炎发病进程中的作用机制。方法收集于我院接受手术治疗的慢性中耳炎患者和非中耳炎患者各30例。采用Western blot检测患者耳组织中PAD4、CitH3蛋白表达水平;ELISA检测患者血清中PAD4、CitH3含量;并分析PAD4与CitH3的相关性。将30只BALB/c小鼠分为对照组、模型组和给药组,每组10只。模型组和给药组中耳注射脂多糖(LPS)建模后,给药组每日中耳注射5 mg/kg cl-amidine,模型组和对照组注射等量生理盐水;实验结束后进行听性脑干反应测试;Western blot检测PAD4、CitH3、p-P65、P65蛋白表达水平;qRT-PCR检测IL-6、TNF-α表达水平;ELISA检测血清中PAD4、CitH3、IL-6、TNF-α含量。结果与非中耳炎患者比较,慢性中耳炎患者耳组织中PAD4、CitH3蛋白表达水平升高(P<0.05),血清中PAD4、CitH3含量升高(P<0.05),且两者呈正相关(R=0.3636)。动物实验结果显示,与对照组比较,模型组听性脑干反应阈值升高(P<0.05),PAD4蛋白、CitH3蛋白、p-P65/P65及IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.05),血清中PAD4、CitH3、IL-6、TNF-α含量升高(P<0.05);与模型组比较,给药组听性脑干反应阈值降低(P<0.05),PAD4蛋白、CitH3蛋白、p-P65/P65及IL-6、TNF-αmRNA表达水平降低(P<0.05),血清中PAD4、CitH3、IL-6、TNF-α降低(P<0.05)。结论PAD4通过介导CitH3激活NF-κB信号通路,促进耳组织炎症反应;抑制PAD4活性可缓解中耳炎症状。

抗CarP抗体、抗PAD4抗体对类风湿关节炎的诊断价值

目的探讨抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体、抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法收集129例RA患者及500例健康体检者外周血标本及实验室类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检查结果。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测健康体检对照组(500例),RA组(129例)标本血清抗PAD4抗体、抗CarP抗体。分析RA组患者抗PAD4抗体、抗CarP抗体两个指标与RF、抗CCP抗体结果的相关性。结果 (1) RA组抗CarP抗体和抗PAD4抗体诊断RA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别是31. 78%、34. 11%,96. 40%、95. 60%,69. 49%、67. 16%,84. 56%、85. 05%,8. 83、7. 93,0. 71、0. 68。(2) RA组抗PAD4抗体、抗CCP抗体、RF结果均为阴性的3例标本,抗CarP抗体结果阳性。(3)抗CCP抗体、RF检测RA组标本的阳性率是91. 47%,联合CarP检测的阳性率是93. 80%。结论抗CarP抗体可以作为抗CCP抗体和RF为阴性的RA患者的补充诊断指标,具有较高的特异性。未发现抗PAD4抗体较抗CCP抗体、RF对RA患者诊断的优势。

凝血酶调节蛋白联合中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚氨酶4预警非瓣膜性房颤合并急性缺血性脑卒中患者缺血事件复发

目的研究凝血酶调节蛋白(TM)联合中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)预警非瓣膜性心房颤动(NVAF)合并急性缺血性脑卒中(AIS)患者缺血事件复发风险。方法纳入2020年8月至2023年2月期间于天津市西青医院就诊的NVAF合并AIS患者164例为患者组,男71例,女93例,年龄51~83岁。采用Shine i2900型全自动化学发光免疫分析仪测定血浆TM水平;采用TECAN Sunrise酶标仪测定血清PAD4水平。以Kruskal-Wallis H检验进行多组间比对,以Mann-Whitney U检验进行两组间数据比对;用Friedman秩和检验进行同组内各时间节点数据比较;用ROC曲线分析诊断性能;用Logistic回归进行关联性分析;用Kaplan-Meier曲线进行生存分析,Cox比例风险回归模型获得HR值。结果在治疗前和治疗后,复发组血浆TM水平均高于未复发组(P值均<0.001);未复发组在治疗后血浆TM水平显著低于治疗前(P<0.001),复发组治疗后TM水平与治疗前差异无统计学意义(P=0.166)。AIS患者组在治疗前、后的血清PAD4水平均显著高于健康对照组(P值均<0.001)。治疗前,未复发组血清PAD4水平与复发组间的差异无统计学意义(P=0.093);治疗后,复发组显著高于未复发组(P<0.001);未复发组在治疗后血清PAD4水平低于治疗前(P<0.001),复发组在治疗后显著高于治疗前间(P<0.001)。治疗前,血浆TM的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.885,临界值为13.04TU/mL;治疗后,AUC^(ROC)为0.909,临界值为10.52TU/mL。治疗前,血清PAD4的AUC^(ROC)为0.606,临界值为11.45ng/mL;治疗后,AUC^(ROC)为0.939,临界值为10.00ng/mL。TM与PAD4联合评估的治疗前AUC^(ROC)为0.877,治疗后AUC^(ROC)为0.976。用Logistic回归做多元分析,AIS患者治疗后的TM和PAD4水平均与充血性心力衰竭和高血压有显著相关性(P<0.05)。生存分析显示,治疗后,TM、PAD4以及两项指标联合评估,均可有效预测患者在随访期内缺血事件复发的累积风险(Log-rankχ^(2)分别为20.597、5.836和27.786,P值分别为<0.001、0.016和<0.001)。Cox回归模型显示,TM与PAD4联合评估可有效预测AIS患者随访期内的缺血事件复发风险(HR=1.397)。结论NVAF并发AIS患者TM和PAD4水平显著增高,并随病情发展趋势而改变,通过对上述两项指标的动态监测和联合评估,可有效预警AIS患者缺血事件复发的风险,为临床早期识别和及时干预提供依据。

肽酰精氨酸脱氨酶4和组蛋白H3瓜氨酸化与高级别脑胶质瘤的相关性研究

目的:研究肽酰精氨酸脱氨酶4和组蛋白H3瓜氨酸化的表达与脑胶质瘤分级的关系。方法:选取2020年1月—2022年1月在河南大学淮河医院进行手术治疗的脑胶质瘤患者30例为脑胶质瘤组,其中18例为Ⅲ级、12例为Ⅳ级,取手术计划切除范围内正常脑组织为对照组。免疫组织化学检测肽酰精氨酸脱氨酶4和组蛋白H3瓜氨酸化的表达情况,并分析其与脑胶质瘤分级的关系。结果:与正常组织相比较,Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组织,肽酰精氨酸脱氨酶4和组蛋白H3瓜氨酸化的表达水平上调,且上调程度与胶质瘤的级别成正比。结论:肽酰精氨酸脱氨酶4和组蛋白H3瓜氨酸化在胶质瘤组织高表达,且表达水平与级别相关,提示PAD4介导的组蛋白瓜氨酸化参与脑胶质瘤的发展。

类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽表位表达与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因的相关性分析

目的探讨类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽（CCP）表位表达与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4（PADI4）基因的相关性。方法2013年2月～2015年选择在湖北医药学院附属东风医院风湿免疫科住院的类风湿关节炎患者110例作为观察组，同期选择在该院进行体检的健康者110例作为对照组，两组都进行滑膜抗 CCP表位表达阳性率检测与 PADI4基因表达检测，同时进行相关性分析。结果观察组与对照组的滑膜抗 CCP表位表达阳性率分别为70.9％和9.1％，观察组明显高于对照组（χ2＝23.289，P＜0.05）。观察组 PADI4-104基因型的表达频率与对照组对比差异有统计学意义（χ2＝2.984，P＜0.05），多为 G／G表达，而对照组多为C／G表达。Pearson相关性分析显示在观察组中，滑膜抗 CCP表位阳性表达情况与PADI4-104基因型表达频率之间存在明显相关性（r＝0.344，P＜0.05）；logistic逐步回归分析显示 PADI4-104基因型表达频率是影响滑膜抗CCP表位表达的主要因素（P＜0.05）。结论类风湿关节炎患者的滑膜抗 CCP表位表达阳性率明显增加，同时也存在PADI4基因多态性紊乱情况，两者也存在明显的相关性，从而影响类风湿关节炎的发病状况。

PADI4单核苷酸多态性与类风湿关节炎相关性的Meta分析

目的探讨肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)基因单核苷酸多态性与类风湿关节炎(RA)发病风险的关系。方法采用Meta分析方法对相关研究结论进行合并效应值估计,进行异质性检验、发表偏倚评估和风险比的Meta分析。结果共有国内外符合条件的13篇文献纳入分析,累计病例和对照者数分别为11 039例和10 395例。因存在异质性,将PADI4-94研究结果分亚洲人组和欧洲人组进行Meta分析,发现PADI4-94单核苷酸多态性(SNP)与亚洲人种RA风险相关,而与欧洲人种的RA风险无关,综合采用随机效应模式Meta分析时,总体显示PADI4-94与RA风险相关;PADI4-104文献中有一篇存在异质性,排除后经固定效应模式Meta分析显示,PADI4-104 SNP与RA风险存在相关性。发表偏倚评估显示虽有一定的发表偏倚,但剪补法分析显示偏倚不改变相关性结论。结论 PADI4-94和PADI4-104 SNP与RA的发病风险相关。

肽基精氨酸脱亚胺酶4在类风湿关节炎中的表达及意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)蛋白的表达水平与类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体及28个关节的疾病活动度评分(DAS28)的相关性,探讨PAD4对RA的诊断和治疗价值。方法:收集90例RA患者和76例健康对照者的血清,同时收集RA患者的临床资料,ELISA法检测PAD4的表达水平及RA患者血清中抗CCP抗体、RF-IgA、RF-IgG的表达水平。收集39例RA患者和22例健康对照者EDTA抗凝全血,采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR检测PAD4 mRNA的表达水平;特种蛋白仪检测89例RA患者血清中RF-IgM的水平。分离并培养RA患者PBMC,分别加入7.5、15、30、60μmol·L^(-1) PAD4抑制剂F-amidine,作用24、48及72 h后CCK-8检测PBMC增殖情况并确定最佳浓度和最佳作用时间;在最佳浓度和最佳作用时间时收集细胞采用流式细胞术检测PBMC细胞凋亡情况。结果:RA患者血清中PAD4的浓度为(5.94±0.37)ng·ml^(-1),显著高于健康对照者的(2.30±0.18)ng·ml^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。PAD4诊断RA的ROC曲线下面积(AUC)为0.875。RA患者PAD4的表达水平与RF-IgM呈正相关(r=0.22,P=0.039),抗CCP抗体阳性组患者PAD4的表达水平与抗CCP抗体水平呈正相关(r=0.258,P=0.033),而抗CCP抗体阴性组患者血清中也会有高水平的PAD4表达;PAD4表达水平与RF-IgA、RF-IgG和DAS28无相关性。PAD4抑制剂F-amidine作用RA患者PBMC的最佳作用时间是48 h,最佳作用浓度是15μmol·L^(-1)。F-amidine可以增加PBMC晚期凋亡比例。RA患者全血中PAD4 mRNA的表达水平为7.23±9.57,显著高于健康对照者的1.00±0.00,差异有统计学意义(P<0.05),同时PAD4 mRNA的表达水平与抗CCP抗体呈正相关(r=0.390,P=0.023),但与RF及DAS28无相关性。结论:RA患者PAD4的表达水平可作为诊断RA的一个指标,在抗CCP抗体阴性的RA患者中也有73.7%的表达PAD4,检测PAD4的水平对其诊断价值更高;PAD4可以作为治疗RA的一个靶点。

PADI4在类风湿关节炎患者血液中的表达

目的探索肽基精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)在早期类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达。方法收集早期RA(发病6月)和早期骨关节炎(OA,发病6月)患者的血清,ELISA方法检测患者血清中的PADI4、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)和类风湿因子(RF)的水平,同时检测超过3年的RA患者血浆中这3种物质的水平。采集健康者以及系统性红斑狼疮(SLE)患者的血样进行分析,作为对照。结果 68.7%的早期RA患者的PADI4水平明显高于早期OA患者。长时间患RA患者的PADI4表达量高于SLE患者,但与健康人水平没有多大的差别。在RA患者血液中,PADI4的水平与RF和anti-CCP的水平密切相关。结论 PADI4可能在RA发病起始过程中发挥作用,PADI4的表达水平可能与疾病活动和一些临床表现有关。

肽基精氨酸脱亚氨酶4在类风湿关节炎中的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种常见的自身免疫性疾病,其发病机制复杂,多种细胞因子在RA患者血清中均高表达,同时RA患者血清中也会出现多种自身抗体,如类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)和抗角蛋白抗体等,但仍有部分RA患者这些抗体为阴性。肽基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)是一种酶,在多种细胞中均表达,其在RA中异常表达,诊断RA的特异性较高,对RA的诊断和治疗有重要作用,是RA新型的血清学指标;PAD4不仅在表达水平上对RA有诊断价值,而且单核苷酸多态性也与RA发病、抗CCP抗体水平以及影像学的严重程度密切相关。

基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4的表达对胶原诱导关节炎小鼠肺间质病变的影响

目的:研究基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidyl arginine deaminase 4,PAD4)的表达对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肺间质病变的治疗作用及可能机制。方法:DBA/1小鼠建立CIA模型,尾静脉注射PAD4-siRNA表达载体制备的病毒液,每周1次,共8次。处死小鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肺中PAD4 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测PAD4蛋白的表达;取脾组织进行细胞培养,流式细胞术检测Tfh细胞和Tfr细胞比例的变化;HE染色观察肺病理学的改变。结果:(1)与空白组比较,模型组小鼠肺组织PAD4 mRNA的表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05),PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠肺组织中PAD4 mRNA的表达水平较模型组和阴性对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);(2)空白组小鼠肺组织红色荧光较少,而模型组和阴性对照组小鼠肺组织的炎细胞浸润区和气管周围可见较多的红色荧光,PAD4-siRNA治疗后3组的红色荧光明显减少;(3)与空白组比较,模型组脾细胞中Tfh细胞比例升高,差异有统计学意义(P<0.05),PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠脾细胞中Tfh细胞比例较模型组和阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白组比较,模型组小鼠脾细胞中Tfr细胞比例略有降低,但差异无统计学意义,PAD4-siRNA治疗后小鼠脾细胞中Tfr细胞比例升高,但只有PAD4-siRNA2组与模型组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)模型组脾细胞中Tfh/Tfr值升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);PAD4-siRNA治疗后3组Tfh/Tfr值均下降,差异有统计学意义(P<0.05);(5)与空白组比较,模型组小鼠肺组织的肺泡壁增厚,炎性细胞浸润增加,PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠的肺组织破坏及炎性浸润减少,纤维化程度减轻。结论:基因沉默PAD4的表达可以降低Tfh细胞的比例,升高Tfr细胞的比例,逆转Tfh/Tfr值,减轻肺组织的间质病变程度和炎症浸润程度。

白血病细胞的定向诱导分化及PADI4在诱导分化中的作用

白血病是血液系统的常见病和多发病,定向诱导白血病细胞分化是治疗白血病的重要策略之一。肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PAD/PADI)是催化精氨酸转化为瓜氨酸的关键酶,在白血病诱导分化过程中起关键作用。国内外学者在白血病诱导分化的机制及策略方面开展了众多研究。本文对诱导白血病细胞定向分化为粒细胞、树突状细胞及巨噬细胞的研究概况及PADI4在白血病细胞定向分化中的机制研究进展作一综述。

中性粒细胞胞外诱捕网通过肽基精氨酸脱亚胺酶4促进前列腺癌增殖及侵袭的机制研究

目的探究肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)和中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对前列腺癌增殖、侵袭的影响及其相关机制。方法收集前列腺癌患者肿瘤及其癌旁组织,通过免疫组化和实时荧光定量聚合酶链反应检测PAD4表达水平。将PC-3细胞分组为PMN组、NETs组、PMN+cl-amidine组和NETs+cl-amidine组。通过CCK8和Transwell实验检测各组细胞增殖和侵袭能力。采用Western blot法检测各组细胞组蛋白H3的瓜氨酸化(H3cit)、P53表达水平。结果患者肿瘤组织中PAD4 mRNA和蛋白水平均高于癌旁组织。与PMN组相比,NETs组PC-3细胞的增殖、侵袭能力显著提高,H3cit蛋白表达水平增加、P53蛋白表达水平降低。与NETs组相比,NETs+cl-amidine组PC-3细胞的增殖、侵袭能力显著降低,H3cit蛋白表达水平降低,P53蛋白表达水平增加。结论NETs通过释放PAD4诱导前列腺癌细胞增加H3cit表达,减少P53表达,促进肿瘤细胞增殖和侵袭。

中性粒细胞胞外诱捕网在肝移植术后并发症诊疗中的作用

肝移植术后并发症的防治对于维护移植肝功能,改善移植受者预后至关重要。中性粒细胞胞外诱捕网(NET)是由中性粒细胞激活后释放到胞外的一种以DNA为骨架,多种组蛋白和颗粒蛋白构成的纤维网状结构,研究表明肝移植术后供肝内中性粒细胞激活和NET的释放参与了包括缺血-再灌注损伤、急性排斥反应、急性肝衰竭和肝细胞癌复发在内的多种肝移植相关并发症的发生。本文将重点探讨NET对肝移植术后并发症的影响,详述NET作为肝移植术后并发症防治潜在靶点的研究进展,以期为肝移植受者术后并发症的防治提供参考,提高临床肝移植疗效,改善肝移植受者预后。

Cl-amidine通过JAK3-STAT5抑制巨噬细胞M1型极化在强直性脊柱炎中的作用

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义。方法 选择60例AS患者,根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组,同期纳入30例健康受试者作为对照组。EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平,皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性;流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68^(+)CD86^(+))比例。培养THP-1单核细胞系,体外诱导为M1型巨噬细胞,期间加入Cl-amidine共孵育,分组为:M0组、M1组、M1+Cl-amidine组,Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平。RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析,Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平。结果 与对照组相比,低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高;与低AS疾病组相比,高AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高。PAD4水平与iNOS水平呈正相关,PAD4、iNOS水平与BGP水平呈负相关。与M0组相比,M1组PAD4和iNOS蛋白表达升高;与M1组相比,M1+Cl-amidine组有163个基因表达上调,272个基因表达下调。上调基因主要参与JAK-STAT信号通路。与M1组相比,M1+Cl-amidine组iNOS、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5蛋白表达降低。结论 PAD4和M1型巨噬细胞水平与AS疾病程度呈正相关。PAD4抑制剂Cl-amidine可能通过JAK3-STAT5信号通路抑制巨噬细胞向M1极化,该作用机制有助于AS临床治疗的研究。

抗PAD2和抗PAD4自身抗体在类风湿关节炎中的临床应用价值探讨

目的评估类风湿关节炎(RA)患者中抗PAD2自身抗体(α-PAD2)和抗PAD4自身抗体(α-PAD4)联合检测的临床应用价值。方法本研究收集了2018年11月至2019年11月北京大学人民医院住院的RA患者148例和非RA的关节炎对照(DC组)35例。同时收集了2019年6—7月北京大学人民医院体检的健康体检者44名。通过ELISA方法检测血清中α-PAD2和α-PAD4水平。根据需要,采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis(KW)检验、χ^(²)检验或Fisher精确检验进行统计学分析。相关性分析采用逻辑回归模型。结果α-PAD2和α-PAD4在RA组、DC组及HC组中的阳性率分别为26.4%(39/148)和20.9%(31/148)、5.7%(2/35)和5.7%(2/35)、4.5%(2/44)和2.3%(1/44)。α-PAD4阳性的RA患者较α-PAD4阴性患者病程更长(17.3±13.2年比8.6±10.2年,P<0.001),其肺间质性疾病(ILD)发生率更高(54.8%比25.6%,P=0.002)。α-PAD2与RA-ILD间未发现显著相关(OR:0.797,P=0.579),而α-PAD4与RA-ILD间存在显著相关(OR:3.521,P=0.002)。对于血清阳性的RA患者,α-PAD4抗体仅与RA-ILD呈现弱相关(OR:2.324,P=0.046),而联合检测α-PAD2和α-PAD4,即α-PAD2阴性同时α-PAD4阳性可以显著提高其与RA-ILD的相关性(OR:4.059,P=0.007)。结论α-PAD2存在于RA中,其对于RA的诊断具有一定的潜在价值。此外,α-PAD2联合α-PAD4检测可以增强α-PAD4对于RA-ILD风险的预测价值。因此,α-PAD2作为RA新的潜在生物标志物,可能作为现有RA血清学标志物的重要补充。