Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响

牛冷冻精液解冻后，在Ｐｅｒｃｏｌ梯度液中４００ｇ离心２４ｍｉｎ，有效地获得了５７．８７％±８．０％的精子回收率；对照组上游法精子回收率仅为１５．８７％±１．９％（Ｐ＜０．０５）。Ｐｅｒｃｏｌ和上游２种方法分离的精子在受精液中８、１８ｈ后的活率，分别为６０％、１０％和７０％、２０％。２种浓度Ｐｅｒｃｏｌ法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）卵裂率的影响：精子最终浓度为２×１０６／ｍＬ时，成熟组Ⅰ（ＬＨ＋ＦＳＨ）和成熟组Ⅱ（ＰＭＳＧ＋ｈＣＧ）的卵裂率分别为５６．１９％和５８．１６％；精子最终浓度为５×１０６／ｍＬ时，２组的卵裂率分别为５９．３０％和６２．７７％，卵裂率在精子浓度不同组间及添加不同激素组间的差异不显著。本试验还研究了２种方法处理的精子对不同成熟处理组的卵裂率和囊胚率，用Ｐｅｒｃｏｌ法处理的精子（２×１０６／ｍＬ）在成熟组Ⅰ获得了５７．１６％的卵裂率和２５．５８％的囊胚率，而上游法分别为６１．９５％和１９．０２％，２种方法相差不显著（Ｐ＞０．０５）；在成熟组Ⅱ获得了６２．１８％的卵裂率和２４．７７％的囊胚率，而上游法分别为７１．１８％和２０．９６％，２种方法的卵裂率相差显著（Ｐ＜０．?

采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞

以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P<0.05),分别为94.2%和95.1%。实验中发现,从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,实验组比对照组肝细胞的增殖明显加快(P<0.05)。白蛋白分泌功能、尿素合成能力及乳酸脱氢酶检测结果表明,实验组培养上清液中白蛋白分泌量、尿素合成能力明显高于对照组(P<0.05);而乳酸脱氢酶含量明显低于对照组(P<0.05)。结论认为,用Percoll梯度液分离纯化肝细胞,可提高肝实质细胞纯度和活力,适合体外原代培养。

Percoll梯度离心前后精子功能指标分析

目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。 方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。 结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。 结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。

Percoll密度梯度离心分离牛精子初探

用2.9％柠檬酸钠将奶牛原精密度调到5×10~8/ml,取其3ml经26％Percoll洗涤(1700转,25分钟),置于pH7.0、渗透压300mmol/kg的9级Percoll梯度溶液上分离(1000转,15分钟)从第9层取得精子作去Percoll处理(2500转,20分钟),再用含甘油和卵黄的牛冷冻稀释液平衡滴冻,解冻后活力可达0.4左右。分离后精子的受胎率为52.2％(47/90),母犊率为44.2％(19/43),对照组母犊率为36.8％(21/57)。说明分离后精子可正常受胎,并有提高母犊率的趋势。

Percoll分离法与多重PCR快速检测肉品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌

为从食品中有效分离致病菌,去除PCR反应的抑制因子,提高多重PCR检测灵敏度,本研究利用Percoll密度梯度离心的前处理法从鲜肉样品中高效分离沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌,以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和志贺氏菌ipaH基因为靶基因,经过PCR分别扩增出255 bp、506 bp、620 bp的DNA片段,DNA测序证实这些片段为目的扩增产物。该体系检测猪肉匀浆液中3种致病菌的灵敏度为6.2×103 cfu/mL、1.2×103 cfu/mL和2.4×103 cfu/mL,检测时间约6 h。Percoll前处理法与多重PCR检测肉中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌为同时检测肉类样品中多种致病菌提供了有效的检测方法。

不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织细胞浮游生物的比较

目的实验评估不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织中浮游生物的效果。方法大白兔肝组织匀浆后与3种藻类混合物混匀,分为混匀高速分离组、混匀低速分离组、叠加高速分离组、叠加低速分离组和未分离组(对照组)进行Percoll密度梯度离心分离浮游生物,镜检并提取其DNA,用PCR技术分别检测浮游生物16S rDNA和叶绿素基因特异性片段。结果混匀高速分离组有较多浮游生物呈分层条纹状分布于离心管中部,叠加高速分离组浮游生物紧邻组织细胞层下,低速分离组见较少浮游生物紧邻于组织细胞层之下,未分离组见浮游生物和组织细胞混杂沉于管底;经DNA检测,各分离组组织细胞层下液体均可检出浮游生物的1条447bp 16S rDNA片段及1条194bp叶绿体/叶绿素脱辅基蛋白基因片段,未分离组均未检出扩增产物且背景较深。结论混匀加样方式进行高速Percoll密度梯度离心,合并收集组织细胞层下所有液体,是分离浮游生物的最有效方法。

用Percoll分离的大鼠睾丸间质细胞对绒毛膜促性腺激素刺激的反应

目的:了解用分离液Percoll分离的Leydig细胞对人绒毛膜促性腺激素刺激的反应规律。方法:将大鼠睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度(20%～80%)Percoll分离液分离并进行为期5d的培养,观察不同培养时间Leydig对不同剂量hCG刺激的反应。结果:Percoll分离、纯化的Leydig细胞纯度可达80%～85%;随着培养时间的延长,Leydig细胞功能逐渐减低,对hCG刺激反应以培养d1和d2最大;小剂量hCG(1IU/ml)即可使睾酮分泌达到峰值,加大剂量则会抑制细胞分泌睾酮的功能。结论:Percoll分离液能明显的提高Leydig细胞纯度;培养的d1～2为最佳刺激时间。

Percoll优选对形态正常精子百分率和顶体酶活性的影响

目的 :了解形态正常精子百分率和顶体酶活性在Percoll优选前后的变化。 方法 :30例不育男性精液标本 ,应用计算机精液分析仪进行精子形态分析 ,分光光度比色法检测顶体酶活性。 结果 :Percoll优选后形态正常精子百分率和精子顶体酶活性均明显高于Percoll优选前 (P均 <0 .0 0 1)。 结论 :Percoll法优选精子后形态正常精子百分率和顶体酶活性增加。

Ficoll和Percoll法分离结直肠癌相关巨噬细胞的比较

目的：比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离结直肠癌中的巨噬细胞的效果，并进一步探讨贴壁分离巨噬细胞的最适宜贴壁时间。方法：取结直肠癌患者的肿瘤组织，制成单个细胞的悬液，分别使用100％ Ficoll、35％ Percoll 以及25％与65％双梯度 Percoll 进行巨噬细胞分离，37℃培养2 h后，去除未贴壁的细胞，使用免疫荧光实验来检测巨噬细胞的纯度。之后，将Ficoll分离得到的单个核细胞，分别培养1、2、4和9 h后比较巨噬细胞的纯度。结果：Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离的巨噬细胞的纯度为60．18％，Percoll 非连续密度梯度离心法分离的巨噬细胞的纯度分别为54．33％和10．93％，均低于Ficoll法分离所得到的巨噬细胞的纯度（P ＜0．05）。 Ficoll分离后贴壁1、2、4 h 分离得到的巨噬细胞纯度均达到60％以上，高于贴壁培养9 h得到的巨噬细胞的纯度（34．67％）。结论： Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离巨噬细胞，纯化程度好，是一种简单、高效的巨噬细胞分离方法，适于临床和科研中广泛应用。贴壁培养2～4h是贴壁分离巨噬细胞最适宜的时间。

Percoll梯度离心与精子运动轨迹图像分析

目的：研究Percoll梯度离心后精子运动轨迹的变化。方法：Percoll梯度离心法处理精子运动状况较差的精液标本，分析精子运动轨迹的变化。结果：在24例精液标本中，Percoll处理前后的精子平均运动速度分别为18.4±4.6μm／s和25.7±5.4μm／s.二者之间具有显著差异（P＜0.01）。结论：用Percoll梯度离心法处理精子，可提高精子运动速度，改善精子质量。

Percoll梯度离心前后精子功能参数的分析

作者通过Percoll梯度离心技术观察处理前后精子相关功能的指标 ,以评价该技术在精子体外处理中的效果 .方法 采用精子前向运动试验 (PMS)、精子尾部低渗肿胀试验 (HOS)和DNA荧光染色有效精子计数试验 (ESC) ,观察精子处理前后PMS ,HOS和ESC的变化 .结果 32例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,精子的PMS ,HOS及ESC等指标均明显高于处理前(P <0 .0 1) .该结果表明 ,体外精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显提高 .

酵母同步细胞的Percoll连续密度梯度改良方法分离及其单细胞拉曼光谱鉴别

利用改良后的Percoll连续密度梯度分离方法,分离不同酵母菌株稳定期的同步细胞,并在单细胞水平上,应用激光光镊拉曼光谱对分离的同步细胞进行鉴别。采用高速离心机角式转头和2mL聚丙烯离心管,20℃,19 320g离心15min,将大约1.75mL Percoll溶液形成1.00～1.31g·mL^-1连续密度梯度;将样品均匀铺加在离心管连续密度梯度液顶层,20℃,400g离心60min,酵母分成明显的2层细胞带;微分干涉差显微镜（DIC）、相差显微镜以及同步生长曲线分析显示,下层酵母细胞以单个细胞为主,大小均匀、致密,折光性强,生长呈现阶梯式增长,具有同步细胞生长的特性,确定其为同步的G0细胞。利用单细胞光镊拉曼光谱系统对所分离的G0同步细胞与非G0细胞进行分析,结果显示G0同步细胞和非G0细胞的特征峰位置基本一致,但G0细胞对应的蛋白质、糖类、核酸等生物大分子特征峰强度大于非G0细胞,说明G0细胞大分子物质含量要比非G0细胞的高;对G0细胞和非G0细胞进行主成分分析,结果显示,分离的同步化G0细胞之间成分含量差异少,比较均一,而非同步细胞之间内含物质差异大,呈不均一性,说明单细胞光镊拉曼光谱系统可以鉴别同步和非同步细胞。改良后的Percoll连续密度梯度分离方法,能够分离多数酵母菌株同步化细胞,是一种易操作、成本低、效率高的细胞分离方法。

基于Percoll密度梯度法的轻老龄红细胞膜表面电荷的研究

红细胞衰老过程中膜表面电荷的变化情况与其结构功能密切相关。针对以往研究对轻老龄红细胞膜表面电荷的差异性不确定的问题,本文从不同的细胞分离方法分离轻老龄红细胞的效果不同的角度,通过比较分离出的轻老龄红细胞表面唾液酸的含量和细胞膜的弯曲弹性模量Kc值,提出高速离心法和Percoll密度梯度离心法分离出的轻老龄红细胞间的细胞年龄差距不同,Percoll法分离出的细胞年龄差距更大。利用Percoll密度梯度离心法,进一步分离出四种不同细胞年龄的红细胞,由红细胞表面唾液酸的含量和表面Zeta电位值检验轻老龄红细胞膜表面带电状态的差异性,结果显示,轻老龄红细胞的膜表面电荷存在明显差别,且随着细胞年龄的增长,红细胞的膜表面负电荷逐渐减少。研究结果对红细胞的衰老机制及体内清除老化红细胞的途径等研究具有重要意义。

味蕾细胞的Percoll梯度离心纯化技术研究

以ICR小鼠的菌状味蕾细胞为研究对象,利用Percoll梯度离心技术纯化小鼠菌状味蕾细胞,通过台盼蓝染色和免疫组织化染色方法分别比较纯化前后的味蕾细胞存活率与纯度的变化,应用透射电镜从超微结构鉴定味蕾细胞。结果显示:通过不连续的Percoll密度梯度离心法对味蕾细胞进行纯化,细胞分层效果明显,主要位于体积分数20%与40%的Percoll工作液之间;免疫组化结果表明:纯化后味蕾细胞的纯度显著提高,从10%提高到65%(P<0.01),台盼蓝染色结果显示:纯化后细胞活度达94%,电镜则从超微结构上证实了纯化的细胞为味蕾细胞。

用Percoll试剂和DEAE-纤维素层析柱分离纯化鳝锥虫

用51%的Percoll分离液和DEAE-纤维素层析柱,从自然感染的黄鳝(Monopterus albusZuiew)中分离鳝锥虫(Trypanosoma monopteriChen et Hsieh,1964)。对含虫血液样品分别以2.1×103r/min、2.5×103r/min、2.9×103r/min、3.3×103r/min、3.6×103r/min离心5、10、15、20min,观察红细胞的去除和鳝锥虫存留百分数,结果表明:2.9×103r/min离心15min分离效果最佳。离心分离的混悬液含有锥虫、白细胞、血栓细胞和极少的红细胞,悬混液再经DEAE-纤维素过柱,得到纯净的鳝锥虫。过柱后光学显微镜观察,锥虫形态正常,运动活泼,无血细胞。本方法具有耗时短、回收率高的特点,是把梯度分离和离子交换结合在一起的一种快速有效方法,为鳝锥虫的进一步研究奠定了基础。另外,此方法还可以作为快速、准确检测自然状态下黄鳝是否感染锥虫的手段,为鳝锥虫的流行病学研究提供可靠的数据。

Percoll非连续梯度法分离未成年绵羊精原细胞的研究

为探索一种简单可行的分离未成年绵羊精原细胞的方法,采用0.3%的胰蛋白酶消化新鲜采集的4～6月龄未成年绵羊睾丸组织,制备单细胞悬浮液,经Percoll非连续梯度法离心分离,得到自下而上3条清晰的细胞带,用流式细胞仪对各层细胞进行倍性和抗体染色鉴定.结果表明:第一层细胞中的精原细胞含量达到了76.76%,形态良好,活率高于96%.表明试验中所采用的分离方法对未成年绵羊睾丸精原细胞的分离效果较好,所得细胞可用于进一步的研究.

改良Percoll梯度离心法优化精液宫腔内人工授精疗效观察

目的 观察改良Percoll梯度离心法 (简称改良法 )和常规Percoll梯度离心法 (简称常规法 )优化精液行宫腔内人工授精的疗效。方法 选择适应证患者 12 6例 ,共行宫腔内人工授精 2 0 4周期 ,其中 10 6周期应用常规法 ,98周期应用改良法。结果 改良法处理后精子密度、精子活力及周期妊娠率高于常规法 (P <0 .0 5 )。结论 改良法优化精液行宫腔内人工授精具有较高的周期妊娠率 ,疗效较为满意。

应用Percoll分离纯化NK细胞

目的 :从人外周血中分离纯化高浓度、高纯度及活性良好的静息状态NK细胞 ,为进一步研究其特性打下基础。方法 :应用Percoll非连续密度梯度离心法结合panning负分离法获得所需NK细胞 ,并用免疫组化Envision二步法、MTT还原法分别对NK细胞的纯度、酶活性及细胞毒活性进行全面鉴定。结果 :NK细胞纯度为 6 0～ 80 % ,浓度最低可达 10 6/ml,细胞酶活性良好 ,细胞毒活性平均达 5 0 %。结论 :此分离法所获NK细胞数量及纯度较高 ,不影响细胞的酶活性 ,也不会激活NK细胞 ,是一种良好的静息状态NK细胞的分离方法。