2型糖尿病患者血清Perilipin 1水平与大血管病变的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清Perilipin 1变化与大血管病变的相关性。方法回顾性分析2016年10月—2017年11月就诊于丹阳人民医院内分泌科的T2DM患者268例,根据有无大血管并发症分为合并大血管病变组(A组,168例)和单纯T2DM组(B组,100例),另选取同期来该院进行体检的健康人员作为对照组(C组,50名)。检测各组血清Perilipin 1水平,并测定空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)及其他生化指标;采用超声检查所有T2DM患者的颈动脉内膜中层厚度(IMT)。结果 A组和B组患者血清Perilipin 1水平明显高于C组(P<0.01),A组患者血清Perilipin 1水平高于B组(P<0.05)。血清Perilipin 1水平与年龄、HbA1c、FBG、LDLC呈正相关,与HDL-C呈负相关。Logistic回归分析显示,血清Perilipin 1是T2DM大血管病变的危险因素。结论血清Perilipin 1水平是T2DM患者大血管病变的独立危险因素之一,与大血管病变的发生发展密切相关。

PLIN1基因InDel位点检测及其与同羊尾脂和生长性状的关联分析

为了探讨同羊PLIN1基因结构及PLIN1基因的插入/缺失(inserted/deletion,InDel)位点对同羊尾脂和体尺性状的影响,试验对PLIN1基因结构进行了生物信息学分析,并测量了166只健康同羊的尾脂和体尺性状;通过测量同羊表型数据、提取基因组DNA,并采用PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和Sanger测序等方法检测PLIN1基因的InDel位点和分型情况,然后对PLIN1基因的InDel位点与同羊尾脂和体尺性状进行关联分析。结果表明:PLIN1基因位于绵羊的18号染色体上,有8个外显子和7个内含子。绵羊、山羊、普通牛、欧亚野猪、智人、小鼠的PLIN1蛋白结构高度保守,原鸡和绿头鸭的PLIN1蛋白结构与其他物种存在差异,以上8个物种的PLIN1蛋白有10个共同基序,2个特定的保守结构域,PLIN1基因在物种进化中相对保守。同羊的PLIN1基因存在1个26 bp(CGATCCTCGGTGCCCCAGAAACATTC)的InDel位点,包含DD、II和ID 3种基因型,I和D等位基因频率分别为0.2018和0.7982,II、ID和DD基因型频率分别为0.0663,0.2711,0.6627,该位点处于中间多态性(0.250.05);该位点对公羊的体尺性状无显著影响(P>0.05);但该位点的II基因型母羊背高显著高于ID和DD基因型(P<0.05)。说明PLIN1基因的InDel位点可被作为母羊育种的有用分子标记。

下调Perilipin 1基因表达对3T3-L1细胞脂解的影响

目的:研究下调围脂滴蛋白基因(PLIN1)表达对3T3-L1细胞脂解的影响。方法:采用RNA干扰技术,构建3组阳性及1组阴性sh-PLIN1重组载体,并进行菌液PCR和DNA测序鉴定。Western blot测定PLIN1A蛋白表达,评价载体下调效果。细胞转染有效载体2天后,Bodipy 493/503染色脂滴;酶学方法测定细胞中甘油三酯和甘油含量;Western blot检测甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)及其磷酸化蛋白(p-HSL)的表达。酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞中环磷酸腺苷(c AMP)和蛋白激酶A(PKA)的浓度。结果:各sh-PLIN1干扰载体构建成功,且3组阳性载体均能显著下调PLIN1A蛋白的表达(P<0.05)。转染有效载体后,与阴性转染组相比,sh-PLIN1转染组细胞中脂滴减小,甘油三酯含量降低,甘油含量升高,ATGL和HSL相对表达量显著升高(P<0.05),p-HSL相对表达量及c AMP、PKA的浓度无显著性差异(P>0.05)。结论:下调PLIN1基因表达可加快3T3-L1细胞脂解速率,其可能通过上调ATGL和HSL的表达而实现,c AMP/PKA信号通路对其无明显调节作用。

17β-雌二醇对脂肪细胞内脂滴增殖的抑制作用及其机制研究

目的探讨雌激素对h ASCs成脂分化过程中脂滴相关特异基因DNA断裂因子相似蛋白C(The cell death-inducing DNA fragmentation 45-like effector,CIDEc)、脂滴包被蛋白(Perilipin1,Plin1)m RNA表达的影响。方法对3例患者行脂肪抽吸术,并进行h ASCs培养及传代,鉴定表面标志物;经典鸡尾酒法诱导其成脂,不同浓度(10-8、10-7、10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用于细胞,分别于24 h、4、7、11d收获细胞,用RT-PCR检测CIDEc、Plin1 m RNA表达情况。结果各组细胞经药物作用后,脂肪细胞中CIDEc及Plin1 m RNA的表达水平随着17β-E2浓度的升高而下降;而随着作用时间的延长,CIDEc及Plin1 m RNA表达水平分别于7 d和4 d达到高峰期,其后逐渐下降。当17β-E2浓度为10-6mol/L时,细胞中CIDEc及Plin1 m RNA的表达水平最低,差异有统计学意义(P<0.01);而加入雌激素受体阻滞剂ICI182780的一组细胞,雌激素对CIDEc及Plin1 m RNA表达的抑制作用明显减弱。结论 17β-E2能够显著降低脂肪细胞分化过程中CIDEc及Plin1的m RNA表达,并可能通过这一途径抑制脂肪细胞内脂滴的增殖。

杨梅素联合围脂滴蛋白基因沉默促进前脂肪细胞系3T3-L1的降脂

目的探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响。方法采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素最佳干预浓度和时间。杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进行干预,实验共分为4组:对照组(control group)、转染组(sh-RNA group)、杨梅素组(Myric group)和联合干预组(Myric+sh-RNA group)。油红O染色脂滴,观察脂滴形态;Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、MEK、p-MEK和激素敏感性脂肪酶磷酸化蛋白(p-HSL)的表达;ELISA测定细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和磷酸化的蛋白激酶C(p-PKC)的含量。结果与Myric组和sh-RNA组相比,Myric+sh-RNA组脂滴形态变小,数量明显减少。与sh-RNA组和对照组相比,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内p-PKC含量、p-ERK/ERK和p-MEK/MEK的比值以及p-HSL表达显著升高(P<0.05)。同时,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内cAMP和PKA含量低于sh-RNA组和对照组(P<0.05)。结论杨梅素的促脂解作用可能是通过激活PKCMEK/ERK信号通路,增加该通路中p-HSL的表达量来实现的;杨梅素同时可能对cAMP/PKA信号通路中相关因子的活性有一定的抑制作用。

血清Fractalkine和SDC-1及PLIN2与脓毒症患者促炎/抗炎平衡失调的关系及对预后的影响

目的探讨血清不规则趋化因子(Fractalkine)、多配体蛋白聚糖1(SDC-1)、脂滴包被蛋白2(PLIN2)与脓毒症继发多器官功能障碍综合征(MODS)患者促炎/抗炎平衡失调的关系,分析影响脓毒症继发MODS患者预后的相关因素。方法选择2019年5月-2022年5月首都医科大学附属北京友谊医院收治的306例脓毒症患者,根据是否继发MODS分为MODS组(n=75)和非MODS组(n=231)。采集静脉血检测血清Fractalkine、SDC-1、PLIN2、促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6以及抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13水平,追踪患者临床结局。Pearson相关性分析Fractalkine、SDC-1、PLIN2与促炎和抗炎细胞因子的相关性。根据是否发生死亡将MODS组患者分为死亡组(n=26)和存活组(n=49)。多因素logisitc回归分析脓毒症继发MODS患者预后的因素。结果MODS组血清Fractalkine[(82.13±16.05)pg/mL vs.(25.43±4.37)pg/mL]、SDC-1[(205.32±43.09)ng/mL vs.(69.35±12.43)ng/mL]、PLIN2[(5.32±1.05)μg/dL vs.(1.89±0.47)μg/dL]、TNF-α[(40.32±9.72)ng/L vs.(18.42±3.07)ng/L]、IL-1[(26.35±7.49)ng/L vs.(13.05±4.11)ng/L]、IL-6[(25.31±6.37)ng/L vs.(16.35±4.19)ng/L]水平高于非MODS组,差异均有统计学意义(t=48.571、42.896、39.109、30.021、19.464、14.009,P均<0.001),IL-4[(26.13±5.17)ng/L vs.(35.02±6.49)ng/L]、IL-10[(18.53±4.19)ng/L vs.(30.12±6.09)ng/L]、IL-13[(16.35±4.27)ng/L vs.(28.16±5.49)ng/L]水平低于非MODS组(t=10.798、15.337、17.026,P均<0.001)。MODS组血清Fractalkine、SDC-1、PLIN2水平与TNF-α、IL-1、IL-6成正相关(P均<0.05),与IL-4、IL-10、IL-13水平成负相关(P均<0.05)。死亡组年龄、休克、急性生理与慢性健康评分系统Ⅱ(APACHE-Ⅱ)评分、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、血清Fractalkine、SDC-1、PLIN2、TNF-α、C-反应蛋白、降钙素原、IL-1、IL-6水平高于存活组,IL-4、IL-10、IL-13水平低于存活组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。高SOFA评分、Fractalkine、SDC-1、PLIN2是MODS患者预后不良的危险因素(P均<0.05)。结论脓毒症继发MODS患者血清Fractalkine、SDC-1、PLIN2水平均增高,且与促炎/抗炎平衡失调以及不良预后发生有关。

脂滴包被蛋白对鸡前脂肪细胞脂质蓄积的影响

目的:探讨脂滴包被蛋白(perilipin 1)对鸡前脂肪细胞脂质蓄积的影响。方法:首先构建pcDNA3.1-perilipin 1基因真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,24h后添加油酸诱导前脂肪细胞分化。然后利用Western blot方法检测perilipin 1的表达;利用油红O提取比色法研究perilipin 1对鸡前脂肪细胞脂质蓄积的影响;利用Real-time RT-PCR方法分析其他与脂类代谢相关的重要基因(FAS、ACC、ATGL)的表达变化。结果:转染pcDNA3.1-perilipin 1基因真核表达载体能明显上调perilipin 1的表达。perilipin 1表达量升高后,鸡前脂肪细胞脂质蓄积能力增强,但其他与脂类代谢相关的重要基因(FAS、ACC、ATGL)的表达量没有发生明显的变化。结论:过表达perilipin 1促进鸡前脂肪细胞的脂质蓄积。

枸骨叶水提物对小鼠肥胖的预防作用及对脂肪分化的影响

目的:研究枸骨叶水提物(ICAE)对高脂饮食(HFD)小鼠肥胖的预防作用及对脂肪分化的影响.方法:本研究采用HFD诱导小鼠肥胖,同时灌胃给予ICAE,以奥利司他(orlistat)为阳性对照药。39只昆明雄性小鼠分成4组,包括对照组(n=10)、肥胖模型组(n=9)、orlistat治疗组(n=10)和ICAE治疗组(n=10)。以体重、腹内和皮下脂肪含量、肝重以及血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平为指标,观察ICAE对肥胖的预防作用;在实验第5周,连续5 d监测ICAE对小鼠24 h平均摄食量的影响;HE染色观察ICAE对脂肪组织的影响。分离和培养大鼠附睾来源的前脂肪细胞,尼罗红染色观察ICAE对分化脂肪细胞内脂滴形态的影响,Western blot法检测ICAE对细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂滴包被蛋白1(Plin1)及激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白表达的影响。结果:ICAE可以显著抑制HFD引起的小鼠体重、腹内和皮下脂肪含量以及肝重的增加(P<0.01),并且显著降低血清TC和TG水平(P<0.01),但是对摄食量无显著影响;HE染色显示,ICAE能够显著减少HFD引起的白色脂肪细胞肥大。此外,在原代培养的大鼠分化脂肪细胞中,ICAE可以显著抑制细胞内脂滴的积累,并且显著下调脂肪分化关键转录因子PPARγ以及脂肪分化标志物Plin1和HSL的蛋白水平(P<0.01)。结论:ICAE对HFD诱导的小鼠肥胖具有预防作用,但对摄食量无明显影响;ICAE可以显著抑制脂肪分化过程,此作用可能与下调PPARγ的蛋白表达有关。

虫草素通过Fsp27和Perilipin1调节脂肪滴形成和降解减肥

为研究虫草素是否具有减肥的作用及其可能机制,以高脂饮食喂养大鼠构建肥胖型高脂血症动物模型,给予高、中、低不同剂量[50、25、12. 5 mg/(kg·d)]的虫草素,连续灌胃5周后观察大鼠体重和脂肪系数的变化,提取脂肪细胞并用BODIPY染色检测脂滴。培养3T3-L1细胞,给予不同浓度(1. 563,3. 125,6. 25,12. 5,25μg/m L)虫草素,作用168 h,Western blot检测脂滴相关基因Fsp27,Perilipin1的表达。结果表明:虫草素以剂量依赖的方式抑制脂滴的形成,并且诱导成熟脂肪细胞中的脂滴降解,促进脂肪细胞的去分化。虫草素还下调脂滴相关基因Fsp27和Perilipin1。表明虫草素可能通过下调Fsp27抑制脂肪滴的形成,下调Perilipin1来刺激脂解作用。虫草素可以阻止脂滴形成,促进脂滴降解。因此,说明虫草素具有减肥的作用,其可能的作用机制是通过下调Fsp27和Perilipin1的表达抑制脂肪滴的形成和促进其降解,该研究结果将为虫草素作为一种潜在的减肥药物的开发奠定理论基础。

鹅脂滴包被蛋白PLIN基因的全长cDNA克隆及组织表达分析

脂滴包被蛋白(perilipin, PLIN)是脂滴相关蛋白家族(PAT)中的成员,定位于脂滴表面.该蛋白对脂肪细胞的脂质代谢有重要的调控作用.本研究通过RT-PCR和RACE的方法,从太湖鹅脂肪组织总RNA中扩增出PLIN基因的全长cDNA,测序得到其长度为2 267 bp,其中包括长度为1 584 bp的CDS区,共编码527个氨基酸残基.利用DNAMAN软件将该序列与其他物种的PLIN基因的同源性比较,结果发现鹅PLIN与鸭的同源性最高,达到96.42%,与人的同源性最低,为58.44%.利用MEGA 7.0软件构建基于PLIN基因cDNA序列的系统进化树,显示出PLIN基因的高度保守性.用荧光定量PCR分析其在鹅脂肪、胸肌、腺胃、脑、肾、腿肌、脾、心脏、肺、肌胃、肝实验结果为进一步分析该基因对鹅脂肪性状的作用奠定了基础.

长链脂肪酸对脂周素2表达的影响

目的研究长链脂肪酸对肝细胞脂周素2表达的影响,并揭示其调控的相关分子机制。方法应用实时定量PCR测定不同长度脂肪酸对脂周素2mRNA表达的影响。应用实时定量PCR和West-ernblot分别测定长链脂肪酸油酸对脂周素2mRNA和蛋白表达的影响。应用荧光素酶活性分析方法检测油酸对脂周素2启动子活性的影响。结果长链脂肪酸油酸、软脂酸、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸明显增加了脂周素2的表达,而短链脂肪酸己酸没有作用。油酸以剂量和浓度依赖方式上调脂周素2mRNA和蛋白的表达,乙酰辅酶A合成酶抑制剂triacsinC没有抑制油酸诱导的脂周素2表达。小鼠脂周素2启动子含有Ets/AP-1结合位点和PPARs反应元件(PPRE)。油酸以剂量依赖的方式显著增强了脂周素2的-2090bp启动子活性。Ets位点突变没有影响脂周素2的启动子活性,但AP-1位点突变,及PPRE突变显著抑制了油酸诱导的启动子活性。结论在肝细胞中,长链脂肪酸油酸诱导脂周素2的表达,需要启动子区域的AP-1和PPARs反应元件,为防治脂肪肝新药研发提供了新的靶点。