层粘连蛋白受体Ⅰ与hPeriod1相互作用的研究

目的寻找与节律蛋白hPeriod1(hPer1)相互作用的蛋白,并对筛选出的层粘连蛋白受体Ⅰ(Lamr1)在节律系统中的功能作初步研究。方法分别构建pGAD rec脑/cDNA文库和pGBKT7/hPer1bH LH-PAS重组诱饵蛋白质粒,酵母双杂交筛选下丘脑里与hPer1相互作用的蛋白。利用RT-PCR技术检测新蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织中的表达及在SH-SY5Y细胞中的节律性质。通过RNA干扰技术研究新蛋白与hPer1的关系。结果通过酵母双杂交筛选,证明Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用。该蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织广泛表达,灰度比较显示经马血清诱导后的SH-SY5Y细胞的hPer1表达呈现近日节律,而Lamr1表达无节律变化。RNA干扰显示hPer1表达下调不影响Lamr1的表达。结论Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用,但其表达在RNA水平无节律变化。Lamr1参与细胞的黏附、转移和侵袭。其前体蛋白作为核蛋白参与细胞蛋白的合成。Lamr1可能参与hPer1相关的生物节律系统的信号传出。

抑制节律基因per1表达后对小鼠吗啡奖赏效应及DBI mRNA表达的影响

目的:采用脱氧核酶DRz164对periodl mRNA进行切割,使其表达降低后,探讨对吗啡奖赏效应及苯甲二氮(?)结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)的影响。方法:BALB/C小鼠,雄性,4—6周龄24只,随机分为3组。每组8只.A组为:脂质体+0.9%氯化钠注射液组;B组为:脂质体+吗啡组;C组为脂质体包裹的脱氧核酶(DRZ164)+吗啡组。建立小鼠条件性位置偏爱模型,观察脱氧核酶对吗啡奖赏效应的影响,测试后将动物处死,原位杂交检测皮层DBI mRNA表达的变化。结果:脱氧核酶DRz164阻断了小鼠对吗啡的条件性位置偏爱形成,皮层DBI mRNA表达脂质体包襄的脱氧核酶(DRZ164)+吗啡组明显低于脂质体+吗啡组。下降了65.41%。结论:mPerl基因在吗啡条件性位置偏爱效应中可能起着重要作用,同时它也可能与小鼠皮层DBI mRNA表达有关。

PMA诱导C6细胞rPer1,rDbp基因的近日节律表达

目的寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况。方法采用PMA(phorbol12-myristate13-acetate),100nmol/L)及50%的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞,RT-PCR检测不同时间点mPer1mRNA的表达水平,比较两者的诱导效率;PMA刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞,RT-PCR检测不同时间点rPer1,rDbpmRNA的表达水平。结果PMA及50%的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPer1的近日节律表达且诱导效率近似;并首次发现C6细胞的rPer1,rDbp基因存在着近日节律振荡。结论PMA是一种有效的体外节律诱导剂;经PMA诱导后,C6细胞的节律基因存在近日振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供依据。