基于病证结合特点的绝经后骨质疏松症动物模型分析

绝经后骨质疏松症(PMOP)病证结合动物模型在中医药研究中应用较多,但建立方法各式各样且缺乏统一的评价标准。文章从中医学和现代医学临床角度出发,就目前PMOP模型动物选择、构建方法和模型动物与临床吻合度进行对比,结合病证结合动物模型构建思路,从PMOP病证结合动物模型的构建和进一步完善评价方法进行归纳总结,以期为PMOP实验研究提供新思路。

绝经后骨质疏松大鼠实验性牙周炎动物模型研究

目的：通过卵巢切除术及钢丝结扎法建立绝经后骨质疏松大鼠实验性牙周炎动物模型。方法：选用3—4月龄雌性SD大鼠16只，随机分为假手术组（SHAM）、卵巢切除组（OVX），每组8只，卵巢切除术1周后进行钢丝结扎，于实验第8周处死大鼠，通过体重、骨密度测量、血清生化检测及组织学观察对动物模型进行评价。结果：与SHAM组相比，OVX组大鼠术后体重明显增加，血清碱性磷酸酶水平显著增高，而雌二醇水平及全身骨密度值明显降低（P〈0．01）。股骨骨小梁数量减少，较为稀疏不连续。钢丝结扎侧磨牙牙龈乳头炎症明显，上皮钉突增生，牙槽嵴顶高度降低，OVX组牙槽骨呈疏松性改变，骨吸收明显高于SHAM组。结论：采用卵巢切除术及钢丝结扎法可建立绝经后骨质疏松大鼠实验性牙周炎动物模型，为探讨绝经后骨质疏松与牙周炎的相互作用及其机制提供了有效的手段。

绝经后骨质疏松大鼠模型的综合评价

利用双能X线骨密度仪、扫描电镜和骨生物力学试验综合评价大鼠去卵巢后的骨骼状况。结果显示 :①大鼠卵巢切除后 ,活体、离体腰椎以及股骨 (除R3区 )、胫骨近端干骺端 (R1区 )的离体骨密度显著下降 (P <0 .0 1) ,离体L5和L6的骨丢失率最大 ,达 13% ;②骨小梁减少、变细 ,连接中断 ,骨小梁表面有吸收陷窝 ;③腰椎压缩强度和股骨力学性能均下降 ,前者更明显 ,腰椎最大压缩力下降率达 33.32 %。提示 :①类似于绝经后妇女 ,6月龄大鼠在卵巢切除 4个月后骨量和骨质量均下降 ,特别在富含松质骨的部位 ,如腰椎、股骨远端等 ;②利用绝经后骨质疏松大鼠模型评价骨质疏松新药的有效性 ,应包括该新药对骨量、骨结构和骨强度的作用。

骨质疏松大鼠胫骨元素含量变化及相关性研究

目的 :观察骨质疏松症骨骼中元素含量变化及其相互的关系。方法 :10月龄雌性 SD大鼠切除双侧卵巢(去卵巢模型组 ) ,并设假手术组 ,7个月后取胫骨 ,原子吸收分光光度法测定 Ca、P、Mg、Zn、Mn、Fe、Cu、Co、Mo和Cr含量 ,并对各元素的含量之间进行一元回归分析。结果 :骨质疏松症模型大鼠胫骨除 Ca、P和 Mg等常量元素分别下降 6 .6 % (P<0 .0 5 )、6 .3% (P<0 .0 5 )和 14 .9% (P<0 .0 1)以外 ,微量元素 Zn和 Fe分别下降 15 .2 % (P<0 .0 1)和 35 .1% (P<0 .0 1) ,Mo和 Cr分别下降 12 .2 % (P>0 .0 5 )和 14 .0 % (P>0 .0 5 ) ,而 Mn、Cu和 Co则无明显改变 ;Mg、Mn和 Zn等元素含量与 Ca、P经一元回归分析具有显著的相关性。结论 :去卵巢骨质疏松症模型大鼠骨骼 Ca、P、Mg、Zn和 Fe等含量明显下降。

中药骨康对去势大鼠骨生物力学的影响

为探讨补肾活血类中药骨康口服液对去势大鼠骨生物力学的影响，通过切除大鼠卵巢造成大鼠绝经后骨质疏松模型，观察了中药骨康不同剂量对造模大鼠骨质疏松的防治作用，并与尼尔雌醇作阳性对照，结果中药骨康中、低剂量组的去势大鼠最大扭矩高于模型组（Ｐ＜０．０５），而对扭转刚度无明显影响（Ｐ＞０．０５）。推测骨康口服液可能促进去势大鼠骨结构的再建，改善骨的内部构造，从而提高大鼠骨的机械性能，使骨组织的承载能力增强。

补肾壮骨冲剂对去势骨质疏松大鼠骨组织形态学的影响

【目的】观察补肾壮骨冲剂对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织形态学的影响。【方法】选用SD大鼠随机分为5组:假手术组,模型组,阳性对照组(仙灵骨葆胶囊,剂量为1.1 g.kg-1.d-1),补肾壮骨冲剂高、低剂量组(中药高、低剂量组,剂量分别为2.5、0.83 g.kg-1.d-1),每组雌雄大鼠各12只。各组在施行去势手术2周后给药,连续13周检测各组大鼠的胫骨近端骨小梁面积百分比、厚度、数目,骨小梁分离度。【结果】模型组雌性大鼠的胫骨近端骨小梁面积百分比、厚度、数目均显著减小(P<0.01),骨小梁分离度显著增加(P<0.01);雄性大鼠骨小梁面积百分比、数目均显著减小(P<0.01),骨小梁分离度显著增加(P<0.01),骨小梁厚度无显著改变(P>0.05)。中药高剂量组雌性大鼠骨小梁数目显著增加(P<0.05),骨小梁分离度显著减少(P<0.05),雄性大鼠骨组织形态指标均无显著改变(P>0.05)。中药低剂量组和阳性对照组雌雄大鼠骨组织形态指标与模型组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。【结论】高剂量补肾壮骨冲剂能对抗雌性大鼠去势后所引起的胫骨近端骨小梁面积百分比与数目减少以及分离度增加,对雄性大鼠去势后所引起的骨质疏松无明显改善。

骨质疏松症脾肾两虚型病证结合动物模型的建立

目的:建立骨质疏松症脾肾两虚型动物模型,为中医药治疗骨质疏松症的研究提供工具。方法:采用雌性大鼠卵巢切除法建立肾虚型骨质疏松模型,在此基础上灌胃给予200%大黄浓煎液以建立脾肾两虚型骨质疏松模型,并采用骨组织形态计量学方法检测大鼠胫骨的骨量、骨形成及骨吸收情况以对建立的模型进行验证。结果:脾虚模型组和脾肾两虚模型组大鼠均毛色不光、食量减少、体重下降、行为迟缓、喜聚堆、弓背蜷缩、稀便等与临床脾虚证相似的证候特征。与假手术组相比,肾虚及脾肾两虚模型组大鼠胫骨TBV%显著降低,TRS%、TFS%、OSW、MAR和mAR显著增高,而脾虚模型组则无明显差异。与肾虚模型组相比,脾肾两虚模型组TBV%的降低,TRS%和TFS%的升高更为明显。结论:去卵巢能够造成大鼠肾虚型骨质疏松症,而单纯给予大黄浓煎剂可造成大鼠脾虚但不能导致骨质疏松症。若将去卵巢和灌胃给予大黄2种方法合用,可造成大鼠脾肾两虚型骨质疏松症,且发病程度较单纯去卵巢明显加重。该模型有明显的脾虚证候特征,且其骨质疏松的病理过程与人类绝经后骨质疏松症相似,能反映脾肾两虚型骨质疏松患者的发病特点,具有可行性。

去卵巢法建立SD大鼠绝经后骨质疏松模型手术探讨

以维生素D类药物防治SD大鼠绝经后骨质疏松症的研究是近年来医学领域的一个热点。本研究探讨了建立绝经后骨质疏松模型的一种手术方法。试验对21只3月龄雌性SD大鼠进行了去除卵巢的手术,手术均采用腹正中切口,以利于卵巢的摘除。试验结果表明,该卵巢去除方法具有切口小,操作简便,成功率高的特点。文中归纳了卵巢去除手术的操作程序、术后护理,以及注意事项等,讨论了利用大鼠卵巢切除术建立绝经后骨质疏松模型的关键技术环节,为建立绝经后骨质疏松症动物模型的工作提供技术资料。

实验性牙周炎动物模型研究

目的通过给SD大鼠肌注糖皮质激素及牙间结扎建立实验性牙周炎模型。方法将大鼠随机分成对照组、激素组、结扎组及实验组 ,并分别给予生理盐水、醋酸泼尼松肌肉注射、左上颌第一磨牙钢丝结扎和肌肉注射激素加结扎处理。于实验第 4周及第 8周分两批处死大鼠。结果给予激素注射的大鼠于用药第 3天后便出现了进食下降、少动倦怠等表现 ,与中医肾虚的症状相似 ;而未注射激素的大鼠则无上述表现。结扎组大鼠牙间乳头出现了溃疡及慢性炎症变化 ,牙槽嵴轻度吸收。激素组大鼠的牙槽骨呈骨质疏松性改变 ,牙周组织则无炎症 ;而上述所有病理性变化均在实验组大鼠牙周组织中出现。对照组大鼠牙周组织则正常。结论糖皮质激素注射加牙间结扎的方法可成功的建立与临床相符的牙周炎模型 。

滋肾降糖丸对1型糖尿病骨质疏松大鼠骨组织miRNAs表达谱的影响

【目的】观察滋肾降糖丸干预后糖尿病骨质疏松(DOP)模型大鼠骨组织miRNAs的表达特征。【方法】将12只大鼠随机分为正常组、模型组、滋肾降糖丸组,每组4只。除正常组,其他2组采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导法复制DOP大鼠模型。造模后,滋肾降糖丸组给予滋肾降糖丸溶液(溶剂为羧甲基纤维素钠,剂量为1.5 g·kg^-1·d^-1)灌胃,模型组、正常组给予羧甲基纤维素钠灌胃,连续治疗8周后,检测DOP大鼠糖脂代谢标记物[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血浆葡萄糖(FPG)]和骨吸收标志物[β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)、骨硬化蛋白(sclerostin)],骨形成相关参数[骨钙素(OC)、骨密度(BMD)]水平。使用基因本体论(GO)和京都基因基因组百科全书(KEGG)生物信息学分析以及miRNAmRNA相互作用网络展示滋肾降糖丸对DOP大鼠作用相关的差异表达的miRNAs的整体表达概貌,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对miRNAs的表达进行验证。【结果】滋肾降糖丸干预可改善STZ诱导的DOP大鼠的糖脂代谢、骨代谢和骨形成指标改变。RNA-seq显示模型组大鼠中存在一系列差异表达的miRNAs,滋肾降糖丸干预后可恢复至正常组水平。生物信息学分析显示这些差异表达的miRNAs主要富集于DOP相关通路。qRT-PCR验证结果显示:模型组miR-343、miR-184、miR-295-3p表达较正常组下调(P<0.01),滋肾降糖丸组可使上述指标恢复至正常组水平(P<0.05);模型组miR-26a-5p表达较正常组上调,经滋肾降糖丸干预后下调。这一结果与RNA测序结果相一致。进一步的生物信息学分析表明,这些miRNAs的靶基因主要与糖脂代谢,细胞增殖、凋亡、分化有关。【结论】滋肾降糖丸可有效调节STZ诱导的DOP模型大鼠骨组织差异表达的miR-343、miR-184、miR-295-3p、miR-26a-5p,这些差异表达的miRNAs主要富集在糖脂代谢与细胞增殖、凋亡、分化有关的通路上。

幼鼠废用性骨质疏松动物模型的建立

目的探讨去坐骨神经方法建立幼鼠废用性骨质疏松动物模型,为研究生长期骨骼发生的废用性骨质疏松提供理论借鉴。方法20只4周龄SD雄性幼年大白鼠,随机分为2组行手术,8周后,将模型组(SN)及假手术组(SHAN组)比较,采用骨矿含量、骨密度测量、骨组织病理学及骨形态计量学指标、骨生物力学测量对幼鼠废用性骨质疏松动物模型进行综合评价。结果假手术组大白鼠左侧胫骨骨矿含量、骨密度、骨小梁体积密度、股骨几何参数以及结构力学性能皆不同程度高于模型组。结论采用去坐骨神经的方法可成功建立幼鼠废用性骨质疏松动物模型。

中药骨康对骨质疏松模型大鼠骨密度的影响

【目的】观察中药骨康对骨质疏松模型大鼠骨密度的影响。【方法】选用雌性SD大鼠72只,随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼尔雌醇组(剂量为1 mg/kg),中药骨康高、中、低剂量组(中药高、中、低剂量组,剂量分别为9.6、4.8、2.4 g.kg-1.d-1)。采用双侧卵巢切除术复制骨质疏松模型,术后3个月各组分别按相应剂量给药,治疗3个月后取材,采用双能X线检测活体骨密度及离体左股骨、左胫骨骨密度。【结果】模型组活体全身及腰椎骨密度显著降低(P<0.05或P<0.01),中药高、中剂量组及尼尔雌醇组均可显著提高活体全身及腰椎骨密度(P<0.05或P<0.01)。模型组离体左股骨的整体、股骨头区(ROI 1)、股骨近端(ROI 2)、股骨远端(ROI 4)骨密度显著降低(P<0.05或P<0.01),中药高剂量组可显著提高整体及ROI 4的骨密度(P<0.05或P<0.01),中剂量组可显著提高ROI 4的骨密度(P<0.05)。模型组离体左胫骨的整体、胫骨近端(ROI 1)骨密度显著降低(P<0.01),中药高、中剂量组及尼尔雌醇组均可显著提高离体左胫骨的整体及ROI 1骨密度(P<0.05或P<0.01)。【结论】中药骨康治疗骨质疏松的作用可能与其能提高骨密度水平有关。

补肾通络方对去卵巢大鼠破骨细胞组织蛋白酶K表达的影响

【目的】探讨组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)在骨质疏松症发病中的意义,观察补肾通络方对去卵巢大鼠破骨细胞CK表达的影响。【方法】选用30只雌性SD大鼠随机分成3组:假手术组、模型组及补肾通络方组(中药组,剂量为12.46 g.kg-1.d-1);后2组切除双侧卵巢,4周后中药组给予补肾通络方灌胃。分别于第6、12周测定各组大鼠全身骨密度(BMD),并采用Western blot及逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法测定体外分离培养破骨细胞中CK的蛋白及基因表达。【结果】体外分离培养椎骨来源的破骨细胞具有成熟破骨细胞的表型特征,去卵巢模型大鼠骨密度在时效上与CK的表达呈现负相关;补肾通络方以时效方式下调CK蛋白及CK mRNA的表达水平(均P<0.05)。【结论】CK的过度表达是导致骨密度下降的重要原因,是骨质疏松症发生的潜在危险因子;以时效方式下调CK蛋白及CK mRNA的表达进而治疗骨质疏松症可能是补肾通络方的作用机制之一。

葛根总黄酮对去卵巢大鼠骨密度及骨钙影响的实验研究

目的:观察葛根总黄酮防治骨质疏松的作用及机理。方法:选取雌性SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只。除假手术组外其他5组建立去卵巢大鼠的骨质疏松模型,低剂量组予葛根总黄酮水溶液,50mg·kg-1;中剂量组予葛根总黄酮水溶液,100mg·kg-1;高剂量组予葛根总黄酮水溶液,200mg·kg-1;雌激素组予力维爱1.25mg·kg-1;假手术组及模型对照组予蒸馏水灌胃。3月后测定各组大鼠骨重量、骨密度及骨钙含量。结果:葛根总黄酮低、中、高剂量组及假手术组、雌激素组大鼠的右股骨重、左股骨骨密度及右股骨骨钙含量与模型对照组比较,差异均有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:葛根总黄酮可有效地防治雌性大鼠的骨质疏松,其机理可能与其具有雌激素效应有关。

舒口散对大鼠实验性牙周炎的治疗作用

[目的]观察舒口散对实验性大鼠牙周炎的治疗作用。[方法]SD大鼠随机分为正常组,模型组,碘甘油组(20 g/L),舒口散高、低剂量组(200、100g/L);采用钢丝结扎牙齿加肌注泼尼松龙(1.25 mg/次,共8次)的方法复制大鼠实验性牙周炎模型;药物采用口腔局部涂搽,每次0.5 mL,每日3次,10 d为1疗程,模型组与正常组给予等容积生理盐水; 检测各组软垢指数、探诊深度、探诊出血阳性例数(率),并取牙周组织进行病理学检查。[结果]舒口散高、低剂量组均能降低探诊出血阳性率,高剂量组能降低牙面软垢指数,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01);病理检查结果显示,模型组牙周组织内可见大量炎症细胞,舒口散高、低剂量组牙周组织中炎症细胞浸润减少,高剂量组细胞增生明显,牙周组织处于炎症修复期。[结论]舒口散对大鼠实验性牙周炎具有一定的治疗作用。

从Wnt/β-catenin通路研究滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨质疏松的防治作用

【目的】观察滋肾降糖丸对糖尿病大鼠骨代谢指标、骨密度及骨组织形态的影响及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的调控作用,探讨其对糖尿病介导的骨量减少及骨质疏松形成的防治机制。【方法】采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,另设正常组,每组10只。中药组大鼠给予滋肾降糖丸浓缩液(剂量为5.85 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,西药组大鼠给予雷奈酸锶浓缩液(剂量为0.9 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃。干预3个月后,观察各组大鼠生化指标的变化;采用苏木素—伊红(HE)染色法观察各组大鼠骨组织形态变化;采用实时定量PCR(qPCR)方法检测骨组织Wnt3α、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、β-catenin、Runt相关转录因子2(RUNX-2)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)、硬化蛋白(SOST)基因表达水平。【结果】(1)与模型组比较,中药组大鼠空腹胰岛素(Fins)、血钙(BC)、血磷(BP)、骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、骨钙素(OC)、骨密度(BMD)水平均升高(P<0.01),空腹血糖(FBG)、β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)、1型前胶原酶N端肽(P1NP)、骨保护素(OPG)水平均明显降低(P<0.01),骨组织Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2基因表达量升高(P <0.01),而DKK-1及SOST基因表达量无显著性差异(P> 0.05)。(2)中药组骨组织结构紊乱较模型组明显减轻,基本接近正常。【结论】滋肾降糖丸可能通过上调Wnt/β-catenin信号通路中重要分子Wnt3α、LRP-5、β-catenin、RUNX-2的基因表达,促进成骨细胞的分化,抑制骨破坏,改善骨组织形态,增加骨密度,调节骨代谢紊乱,进而发挥对糖尿病大鼠骨量减少和骨质疏松形成的防治作用。

hBMP-7基因瞬时转染绝经后骨质疏松大鼠骨髓基质细胞的表达及对其生物学活性的影响

目的观察hBMP-7基因瞬时转染对去卵巢(OVX)大鼠的骨髓基质细胞(BMSCs)生物学特性的影响。方法通过去除双侧卵巢构建SD大鼠绝经后骨质疏松模型后,全骨髓法培养大鼠BMSCs,通过重组腺病毒将hBMP-7基因转染入OVX大鼠BMSCs。观察转染后细胞形态及生长情况以及碱性磷酸酶(ALP)变化。结果荧光显微镜下,转染24h后即可见大量绿色荧光蛋白表达阳性的细胞,基因转染效率高于70%。转染后细胞形态无明显改变,细胞增殖能力没有明显改变,ALP活性明显增高。免疫细胞化学染色结果表明,hBMP-7基因在OVX大鼠BMSCs中得到了有效的表达。结论重组腺病毒能够有效地将hBMP-7基因转染到OVX大鼠BM-SCs中,且hBMP-7能有效表达。基因转染对OVX大鼠BMSCs的增殖无明显影响,转染可促进OVX大鼠BMSCs向成骨细胞分化。

骨质疏松性骨损伤愈合过程中细胞生长因子的动态表达

目的:从分子水平上探讨细胞生长因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在骨质疏松大鼠骨损伤愈合过程中的表达水平及其相互作用。方法:3月龄雌性大鼠64只,以去卵巢方法建立骨质疏松大鼠模型,分为骨质疏松组(OVX组)32只和假手术组(SX组)32只。运用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、bFGF在OVX和SX组大鼠骨组织中的表达水平。结果:(1)OVX组和SX组组内骨损伤后不同时间点TGF-β1、bFGF表达水平的差别具有统计学意义(P<0.01)。5d开始逐渐升高,15d时达到高峰,30d时回落到低水平。(2)OVX组TGF-β1、bFGFmRNA的表达水平均低于同时期SX组的水平。结论:TGF-β1、bFGF在骨损伤后存在约4周的周期性表达,并且于骨质疏松性骨损伤处表达减少,这是其愈合质量下降的重要因素。TGF-β1、bFGF的表达趋势类似,提示它们之间可能存在某种协同作用。

中药骨康对去睾大鼠骨质疏松的防治作用

为探讨补肾活血类中药骨康口服液对去睾大鼠所造成的骨质疏松的影响 ,通过切除大鼠睾丸造骨质疏松模型 ,观察了不同剂量中药骨康口服液对该模型大鼠骨面密度 ( ρA ,bone)、骨矿含量 (mM ,bone)及股骨骨生物力学的影响 ,并与特乐定作阳性对照。结果 :中药骨康高、中剂量防治的去睾大鼠股骨扭转试验最大扭矩及血睾酮 (T)含量 ( ρT ,bl)高于模型组 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,高、中、低剂量组全身及左、右股骨ρA ,bone、mM ,bone高于模型组 (P <0 .0 5 )。提示骨康口服液能提高去睾大鼠血睾酮含量、骨的骨矿含量及骨密度 ,改善骨组织的生物力学性能 ,避免骨折的发生。为中药骨康口服液防治老年男性骨质疏松症提供实验依据。

雌激素及雷洛昔芬对骨质疏松大鼠牙周炎牙槽骨IL-1β表达的影响

目的探讨雌激素与雷洛昔芬对绝经后骨质疏松症(PMO)大鼠牙周炎牙槽骨白细胞介素(IL-1)β表达的影响。方法建立PMO大鼠实验性牙周炎模型,采用免疫组织化学染色的方法,观察PMO治疗药物(雌激素与雷洛昔芬)对牙周炎牙槽骨中IL-1β表达的影响。结果IL-1β在PMO大鼠牙周炎牙槽骨中有较强的表达,雌激素及雷洛昔芬组IL-1β的阳性表达程度降低,接近对照组。结论PMO可影响牙周炎牙槽骨中细胞因子的表达;雌激素及雷洛昔芬对牙周炎牙槽骨中IL-1β表达有一定的抑制作用。