静电纺丝聚偏氟乙烯压电仿生骨膜的细胞相容性

背景:聚偏氟乙烯具有压电性能、良好的生物相容性和无毒性,使其成为骨膜修复合适的候选材料。目的:评价掺锌镁离子静电纺丝聚偏氟乙烯压电仿生骨膜的体外细胞毒性。方法:采用静电纺丝技术分别制备纯聚偏氟乙烯、掺锌离子聚偏氟乙烯、掺镁离子聚偏氟乙烯、掺锌镁离子聚偏氟乙烯压电仿生骨膜,依次命名为PVDF、PVDF-Zn、PVDF-Mg和PVDF-Zn-Mg,其中锌、镁离子的质量分数均为1%。将成骨细胞、血管内皮细胞分别与4组仿生骨膜共培养,通过碱性磷酸酶染色、CD31免疫荧光染色、扫描电镜观察与CCK-8法检测仿生骨膜的细胞相容性。结果与结论:①成骨细胞:培养7 d的碱性磷酸酶染色显示,PVDF-Zn组碱性磷酸酶分泌多于其他3组。扫描电镜下可见,培养1 d时,细胞在PVDF-Mg和PVDF-Zn-Mg仿生骨膜表面得到了一定的铺展,伪足向四周伸展;到3 d时,各组细胞边缘向材料伸出伪足;到第5,7天时,细胞铺展充分、生长形态良好且牢牢地覆盖在纤维表面,细胞伪足向四周及纤维空隙中伸展。CCK-8检测显示,随着时间的推移,各组仿生骨膜上的细胞增殖呈上升趋势,培养1,3,5,7 d的细胞相对增殖率均≥75%,细胞毒性≤1级。②血管内皮细胞:培养3 d的CD31免疫荧光染色显示,细胞在各组仿生骨膜上良好地黏附和铺展,彼此连接,其中PVDF-Zn-Mg组细胞数量多于其他3组。扫描电镜下可见,培养1,3 d时,细胞开始黏附在各组纤维表面;到5 d时,细胞在纤维表面均铺展良好并伸出明显的伪足;到7 d时,PVDF-Mg、PVDF-Zn-Mg仿生骨膜上的细胞呈复层生长,并伸展伪足至纤维空隙内。CCK-8检测显示,随着时间推移,各组仿生骨膜上的细胞增殖呈下降趋势,培养1,3,5,7 d的细胞相对增殖率均≥125%,细胞毒性为0级。③结果表明:掺锌镁离子静电纺丝聚偏氟乙烯压电仿生骨膜具有良好的细胞相容性。

内源性骨膜引导骨再生过程中信号通路富集及FZD家族动态表达研究

目的研究内源性骨膜引导骨再生过程中信号通路富集及卷曲蛋白(FZD)家族动态表达。方法建立猪闭合肋骨膜引导下的骨再生模型,选择7个时间点采集骨膜和再生骨组织进行基因测序,分析差异基因筛选以及相关信号通路富集的情况。选取与骨再生过程中密切相关的FZD分子家族,检测并分析FZD各成员的动态表达变化及其表达相关性。结果实验组相较于对照组,共有7个基因在建模后1个月内的不同时间点持续存在差异表达。差异基因富集显示,早期主要存在免疫反应,后实现组织发展和重塑。FZD家族各成员在不同时间点的表达存在波动,大多数成员的表达高峰在术后3 d,而实验组的倍数改变高峰在术后1个月最为明显,FZD1和FZD2最高,且二者具有较高的相关性。结论本研究筛选出的骨膜引导性骨再生过程中的差异基因以及相关信号通路,为进一步的分子机制研究提供了理论依据,而FZD分子家族动态表达变化在该过程中发挥着重要作用,其具体参与的生物机制尚需进一步研究验证。

负压封闭引流联合携带骨膜的低位外踝上皮瓣在前足软组织缺损修复中的应用效果

目的探讨负压封闭引流联合携带骨膜的低位外踝上皮瓣修复前足软组织缺损的效果。方法本研究为随机对照试验。选取2020年2月至2023年2月武警陕西省总队医院收治的92例前足软组织缺损患者,采用摸球法分组,奇数为对照组(46例),偶数为观察组(46例)。对照组男25例,女21例,年龄(38.69±3.25)岁,机械损伤24例,车祸伤17例,压砸伤5例,予以传统清创联合携带骨膜的低位外踝上皮瓣修复治疗;观察组男24例,女22例,年龄(38.51±3.12)岁,机械损伤25例,车祸伤15例,压砸伤6例,予以负压封闭引流联合携带骨膜的低位外踝上皮瓣修复治疗,两组均随访6个月。比较两组临床相关指标、皮瓣成活率、疼痛程度[视觉模拟评分法(VAS)]、踝关节功能[美国足踝外科协会踝-后足评分系统(AOFAS)]、感觉功能、并发症发生情况。采用χ^(2)检验、t检验。结果观察组手术时间(44.96±4.25)min、抗生素使用时间(5.69±1.14)d、住院时间(18.98±2.87)d、换药次数(4.28±1.01)次、皮瓣切取面积(47.26±4.85)cm^(2),对照组分别为(61.02±5.69)min、(11.25±2.05)d、(28.65±3.16)d、(9.26±1.95)次、(55.36±5.12)cm^(2),差异均有统计学意义(t=12.753、16.464、16.251、12.355、8.309,均P<0.001)。术后6个月,观察组皮瓣成活总体优良率为95.65%(44/46),对照组为71.74%(33/46)],差异有统计学意义(χ^(2)=9.638,P=0.002)。治疗6个月后,观察组AOFAS评分高于对照组[(19.79±3.02)分比(16.02±2.84)分]、VAS评分低于对照组[(2.32±0.59)分比(4.21±0.85)分],差异均有统计学意义(t=6.168、12.389,均P<0.001)。术后6个月,观察组患者的感觉功能恢复效果优于对照组(χ^(2)=9.902,P=0.007)。观察组并发症总发生率低于对照组[6.52%(3/46)比21.74%(10/46)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.389,P=0.036)。结论负压封闭引流联合携带骨膜的低位外踝上皮瓣修复治疗前足软组织缺损效果显著,可以缩短治疗时间,提高皮瓣存活率,减轻患者疼痛,促进功能恢复。

骨囊肿刮除术后骨缺损修复的新方法

目的 介绍一种骨囊肿刮除术后修复骨缺损的新方法 ,并总结其治疗效果。方法 对 8例骨囊肿 ,经手术彻底刮除病灶后所形成的包容性骨缺损 ,在其骨缺损区的血肿内 ,植入自体骨膜碎片 ,通过术前、术后影像学对比和临床功能进行评价。结果 经 2～ 11年随访 ,X线片显示成骨良好 ,骨缺损修复 ,病变未复发 ,肢体功能正常。结论 病灶彻底刮除 ,在骨缺损区血肿内植入自体骨膜碎片 ,是治疗孤立性骨囊肿的有效新方法。

组织工程骨膜异体体内成骨修复兔骨缺损的初步观察

目的探讨以兔BMSCs和猪SIS复合构建的组织工程骨膜,在异体兔体内成骨的可行性。方法取新西兰大白兔BMSCs与SIS复合构建组织工程骨膜。选2月龄新西兰大白兔12只,制备双侧桡骨1.5～2.0cm缺损模型。随机选一侧植入组织工程骨膜,作为实验组;另一侧仅植入单纯SIS,作为对照组。术后观察动物一般情况,4周后摄X线片观察,取骨缺损中段标本行HE及Masson染色观察。结果两组动物术后饮食及日常活动基本正常;伤口无红肿、溢脓等;伤肢基本能负重行走。X线片观察:实验组骨缺损处有长条状新生骨形成,密度与正常骨相同,新生骨桥接骨缺损;对照组骨缺损无骨形成征象,骨缺损处密度与周围软组织影相近。组织学观察:实验组骨缺损处有新骨形成,骨组织中可见血管腔及不规则髓腔样结构;未见明显异物巨噬细胞及淋巴细胞浸润征象;对照组骨缺损处仅为胶原瘢痕组织,无骨组织形成。结论以SIS和BMSCs构建的组织工程骨膜在同种异体体内可以成骨,有修复骨缺损的可行性。

骨膜原位成骨促进兔下颌骨缺损修复的研究

目的动态观察并验证骨膜在骨缺损修复过程中的作用。方法12只6个月龄新西兰大白兔随机分为去除骨膜组和保留骨膜组,每组6只,均制备下颌骨体10mm×8mm全层骨缺损,术后2周、4周、8周每组处死2只动物,标本行肉眼、X线、扫描电镜及组织学观察,计算缺损区新骨面积,两组间行独立样本t检验。结果X线、扫描电镜及组织学结果显示,第4、8周时保留骨膜组的成骨速度、新骨量及骨密度均优于去除骨膜组,第2周时两组间差异不明显。保留骨膜组后期出现少量中央成骨,去除骨膜组整个观察期间主要为边缘成骨。第2周时两组间新骨生成面积无明显差异,第4、8周时差异有统计学意义。结论保留骨膜能促进成骨,手术1个月后骨膜成骨的效果更明显。

骨膜游离移植修复膝关节软骨缺损及重建半月板

目的 对自体骨膜游离移植修复软骨缺损 ,重建半月板治疗膝骨性关节炎的方法、疗效进行评价。方法 1996年～ 1999年 ,在膝关节清理术中清除病损软骨及退变碎裂的半月板 ,取胫骨骨膜游离移植修复软骨缺损 2 8例 36膝 ,其中重建半月板 8膝。术后早期在 CPM器上作连续被动功能锻炼 4周 ;半月板重建者术后石膏固定 7天。结果 术后全部病例均获 1～ 4年随访 ,采用主观症状、客观体征及 X线片三方面综合评价。术后膝关节功能优 2 2膝 ,良9膝 ,可 5膝 ,优良率为 86 .1%。结论 采用自体骨膜游离移植修复软骨缺损 ,重建半月板治疗膝骨性关节炎 ,近期可取得较好效果 ,远期效果尚需进一步研究。

胚胎颅骨骨膜移植修复髋关节软骨大面积缺损

１９９０年５月～１９９４年４月，对４２例（４７个髋）关节软骨全厚缺损患者采用冷冻保存胚胎颅骨骨膜移植进行修复，其中１４例股骨头骨质Ⅳ期坏死者，同时施行带旋髂深血管蒂髂骨植骨。对３４例（３８个髋）进行了２年～６年（平均４０个月）随访。结果表明，按照吴之康髋关节人工置换术后疗效评定标准，优良２５例，很好５例，好３例，尚可１例。认为，与自体移植物修复关节软骨大面积缺损相比，这种方法无附加损伤，具有移植材料、形态与股骨头相似等特点，是治疗髋关节软骨大面积缺损的一种有效方法。

人骨膜细胞体外培养的实验研究与临床应用

目的 :研究体外培养的人骨膜细胞的形态学特征 ;探讨人骨膜细胞自体移植治疗骨不连及骨缺损的临床效果。方法 :常规细胞培养法行人骨膜细胞体外培养 ,观察其形态特征及超微结构 ;经皮注入体外培养的自体骨膜细胞治疗骨不连、骨缺损。结果 :人骨膜培养活细胞早期呈梭形 ,饱满透明 ,立体感强 ;分裂期呈立方形或短柱状 ;后期由长梭形逐渐变成宽梭和不规则形 ,分泌功能旺盛。电镜观察 :胞体呈梭形 ,膜面有少量微绒毛状突起 ,粗面内质网丰富 ,有大量异噬体等次级溶酶体 ,线粒体体积较小、基质致密有少量嵴。有原代细胞生物形态学特征。治疗骨不连、骨缺损 11处 ,治愈率为 73 % ;骨延迟愈合 4处 ,治愈率为 10 0 %。移植后均无明显全身和局部反应 ,12～ 16周达到骨性愈合。结论 :人骨膜成骨细胞可经体外培养大量增殖 ,且细胞传代进化后 ,其形态学结构与原代细胞无明显差异 ,可用于细胞移植。骨膜细胞移植能促进骨不连。

骨膜覆盖对骨髓基质细胞移植修复软骨缺损的影响

目的 :了解在软骨缺损修复过程中 ,骨膜覆盖对移植细胞存留的影响及与早期病理结果相关性以及核酸荧光染料标记法用于追踪移植细胞的可行性。方法 :将体外培养MSC用核酸荧光染料标记后 ,复合胶原海绵植入兔关节软骨全层缺损中 ,一组用骨膜覆盖 ,另一组不加覆盖。分别于 2周、 6周切取修复组织标本 ,2周标本胶原酶消化流式细胞仪检测 ,6周标本做光镜与电镜组织形态学观察。结果 :标记细胞荧光强度仍可被荧光镜和流式细胞仪所检测 ,骨膜覆盖组荧光标记率明显高于非骨膜覆盖组 ,差异有显著性 ,组织学观察也好于对照组。结论 :核酸荧光染料标记法可以作为短期追踪移植细胞的方法。骨膜覆盖能够提高种子细胞在缺损处的存留率 ,影响早期修复组织的病理结果。

新方法治疗长骨骨化性纤维瘤刮除术后骨缺损

目的 :介绍一种长骨骨化性纤维瘤刮除术后骨缺损修复的新方法 ;并总结其治疗效果。方法 :对 3例长骨骨化性纤维瘤 ,在经手术彻底刮除病灶后所形成的包容性骨缺损的血肿内 ,植入自体骨膜碎片 ,通过术前、术后影像学对比和临床功能进行评价。结果 :经 3～ 6年随访 ,X线片显示成骨良好 ,骨缺损修复 ,病变未复发 ,肢体功能正常。结论 :长骨骨化性纤维瘤属良性肿瘤 ,发病率较低 ,术前易误诊 ,术后易复发。病灶彻底刮除 ,在骨缺损区血肿内植入自体骨膜碎片 ,是治疗骨化性纤维瘤的有效新方法。

骨膜移植修复骨缺损的实验研究及临床应用

为探寻大块骨缺损修复方法的新途径，进行了自体骨膜游离移植修复骨缺损的实验及临床研究。实验用４２只兔，于双侧胫骨作人工骨缺损模型（６ｍｍ×１８ｍｍ×５ｍｍ）。一侧随机植入自体游离骨膜片，另一侧不植入，作为对照。以组织学、Ｘ线和放射性同位素为观察指标，研究成骨过程。结果表明，骨膜植入侧骨缺损的愈合比对照侧缺损的愈合快一倍。原因可能是骨膜提供了大量成骨细胞并直接呈膜内成骨而非软骨内化骨。在此基础上，为２１例骨缺损患者应用自体胫骨骨膜片植入治疗骨缺损，面积最大１０．５ｃｍ×４ｃｍ×４ｃｍ，最小２ｃｍ×２ｃｍ×２ｃｍ；其中１７例为良性骨肿瘤，４例为骨慢性感染。骨缺损均得到修复，关节功能恢复满意。为腔洞性骨缺损的修复提供了一种新方法。

自体游离骨膜移植修复关节软骨大面积缺损的实验研究

目的 采用自体游离骨膜移植修复关节软骨大面积缺损 ,并对其组织形态学进行观察。方法 2 4只新西兰幼兔随机分成两组 ,用利刀切除股骨头全层关节软骨达关节软骨表面积的1/ 3,制成关节软骨大面积缺损模型。实验组取股骨全层游离骨膜 ,移植修复股骨头关节软骨缺损 ;对照组关节软骨缺损不作任何处理。于术后第 4、8、12、2 4周取股骨头关节软骨进行大体、光镜观察 ,Wston blot法检测关节软骨缺损的修复组织中Ⅱ型胶原蛋白。结果 骨膜移植 2 4周后 ,肉眼下实验组关节软骨缺损区被透明、光滑的软骨覆盖 ,与周围正常关节软骨组织已难以区分。而对照组软骨缺损区在 2 4周后仍清晰可见 ,基底部少量暗红色纤维结缔组织。光镜下 ,实验组移植 4周后软骨缺损区被骨膜再生组织完全填充 ,为幼稚透明软骨 ;12周后新生软骨细胞明显增多 ,逐渐成熟 ,但排列紊乱 ;2 4周后新生软骨排列趋于规则 ,与周围正常透明关节软骨结构相似 ,甲苯胺蓝呈异染性。对照组 2 4周后软骨缺损区由纤维样结缔组织覆盖 ,与周围正常组织分界清晰 ,边缘可见少量幼稚软骨细胞 ,甲苯胺蓝异染性不明显。通过Wston blot法检测证实自体骨膜移植后第 4周起关节软骨缺损的修复组织中Ⅱ型胶原蛋白呈持续高度表达。结论 自体游离骨膜移植于受损关节软?

胶原蛋白膜包裹自体骨膜修复兔桡骨缺损

目的 :比较胶原蛋白膜包裹自体骨膜是否较单纯植入等量的自体骨膜在修复骨缺损方面更具有优越性。方法 :LaneX线评分、骨钙素、碱性磷酸酶和血清钙指标方面进行统计学分析。结果 :复合体组在整个骨愈合过程中成骨活动更活跃、持续时间更长。结论 :本方法克服了缺损区骨膜来源有限的缺点 ,胶原蛋白能引导新骨生长 ,阻挡周围软组织进入缺损区 。

带血运骨膜管移植和骨充填物修复桡骨长段缺损的研究

目的 探讨联合应用带血运骨膜管移植和骨充填物治疗兔桡骨长段缺损的效果。 方法 实验分两部分 ,分别选用幼兔和成年兔各 4 0只 ,根据填充物的不同分为 4组。将兔双侧桡骨干中段切除 3cm制成骨长段缺损模型 ,保留切骨段骨膜 ,重新复原缝合后作带血运骨膜管移植模型。左侧分别用自体骨、同种异体脱钙骨、磷酸三钙陶瓷和羟基磷灰石进行填充 ,右侧不行任何填充作为对照。观察 3个月。通过 X线片、骨强度、骨密度和组织学检查等方法 ,了解骨缺损的修复效果。 结果 幼兔术后 6周 ,所有实验组双侧的骨缺损均得到修复 ;术后 12周 ,磷酸三钙陶瓷和羟基磷灰石组桡骨抗弯曲强度较差 ,与自体骨组、同种异体脱钙骨组和对照侧比较具有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;骨愈合为膜内成骨和软骨成骨 ,以膜内成骨为主。成年兔 :各组实验侧骨缺损修复率分别为 :自体骨组 5 0 % ;同种异体脱钙骨组 4 0 % ;磷酸三钙陶瓷和羟基磷灰石组为 30 %。对照侧骨缺损修复率为 4 2 .5 %。 结论 幼兔单行带血运骨膜管移植或结合应用骨充填物均可有效修复骨长段缺损 ,但置换较慢的骨充填物不利于再生骨强度的恢复。成年兔带血运骨膜移植联合应用骨填充物不能有效修复骨长段缺损。

自发成骨修复小型猪下颌骨缺损的组织病理学研究

目的研究保留和去除骨膜情况下自发成骨修复小型猪下颌骨节段性缺损的组织学表现。方法选择18月龄雌性中国小型猪8只,拔除其右侧下颌前磨牙及第一磨牙,2个月后动物随机分为保留骨膜组(A组)与去除骨膜组(B组)。A组骨块切除长度分别为5cm与6cm,B组骨块切除长度分别为1cm与2cm,每个长度对应2只动物,骨块切除后均行坚固内固定。术后12周处死动物,标本行大体、X线及HE染色后组织学观察。结果保留骨膜5cm与去除骨膜1cm组完成骨连接,保留骨膜6cm与去除骨膜2cm组未完成骨连接。保留骨膜组可见膜内成骨,去除骨膜组可见软骨内成骨。两组未完成骨连接处可见纤维组织或纤维软骨组织。结论保留骨膜的成骨作用优于去除骨膜;保留骨膜时可以自行修复较大长度的骨缺损。

兔自体游离骨膜移植修复关节软骨缺损的远期效果观察

目的 评价自体游离骨膜移植修复关节软骨缺损的远期效果。方法 用中国白兔 2 0只 ,在股髁骨关节面制造 6mm× 8mm全层软骨缺损 ,实施自体游离骨膜移植术。术后 13个月取材做组织学及电镜观察 ,并进行评估。结果 (1)骨膜移植组优势修复组织为透明软骨 ,对照组为纤维组织。 (2 )修复组织厚度 :骨膜移植组与毗邻软骨厚度无显著性差异 ,对照组为缺损状。 (3)修复组织覆盖缺损的面积 :骨膜移植组明显大于对照组。结论 自体游离骨膜移植对关节软骨缺损修复的远期效果良好 。

3种方法修复关节软骨缺损生物力学的研究

目的评价骨软骨柱镶嵌移植、骨-骨膜柱镶嵌移植和Ⅱ型胶原骨形态发生蛋白(BMP)复合物3种方法修复关节软骨缺损的生物力学变化,为临床应用提供实验依据。方法将20只成年新西兰兔制成膝关节缺损模型,修复1组在缺损局部镶嵌移植骨软骨柱,修复2组为骨-骨膜柱,修复3组为Ⅱ型胶原BMP复合物,空白组软骨缺损处不作处理,另取4只兔作为正常对照。术后12周取材制成宽3mm、长5mm、厚0·5mm的条状试件进行单向拉伸试验、黏弹性蠕变和松弛试验,所得数据结果进行统计学分析。结果3种方法对关节软骨缺损修复的修复物应力-应变曲线、时间-应力曲线和时间-应变曲线都具有一定的黏弹性表现,与对照组比较差异具有显著性(P<0·01),但较正常组仍有差距(P<0·05),其中修复1组标本力学性能强于修复2组和修复3组(P<0·05)。结论骨软骨柱镶嵌移植、骨-骨膜柱镶嵌移植和Ⅱ型胶原BMP复合物3种方法对关节软骨缺损具有良好的修复作用,骨软骨柱移植近期效果最佳,而Ⅱ型胶原BMP复合物来源广泛,适合修复大面积的关节软骨缺损。

骨膜联合骨髓间充质干细胞/乳酸乙醇酸共聚物修复兔大段尺骨缺损的研究

目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)/乳酸乙醇酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)联合骨膜修复大段兔尺骨骨缺损的研究。方法 20只成年新西兰大白兔随机分成4组:PLGA组、PLGA/骨膜组、MSCs/PLGA组和MSCs/PLGA/骨膜组。所有动物构建双侧尺骨中段15 mm的长度节段性骨缺损,随后PLGA组、PLGA/骨膜组、MSCs/PLGA组和MSCs/PLGA/骨膜组分别植入PLGA、PLGA/骨膜、MSCs/PLGA、MSCs/PLGA/骨膜生物材料。正常环境下饲养,在术后6 w和12 w时,对缺损区域进行大体观察、影像学及组织学研究。结果研究结果表明相同时间点MSCs/PLGA/骨膜组缺损修复效果明显优于其他组,MSCs/PLGA/骨膜植入组有最高的X线评分及缺损区最多骨缺损被修复(P<0.05)。PLGA/骨膜、MSCs/PLGA组在X线评分和骨量上差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于PLGA组(P<0.05)。结论 MSCs/PLGA联合骨膜可以较好地修复大段兔尺骨骨缺损。

深低温保存的同种异体骨膜与胎骨联合移植的实验研究

目的 探讨有生物活性的移植材料对骨缺损修复能力的影响。方法 实验采用兔桡骨缺损模型 ,经深低温保存的同种异体骨膜加胎兔骨移植为实验侧 ,胎兔骨移植为对照侧 ,分别在术后 2、4、8及 12周对实验侧和对照侧骨缺损模型进行大体观察、组织学检查、X线片及钙、磷含量检查。观察异体骨膜加胎骨复合体修复骨缺损的可行性及移植后骨膜、胎骨的动态变化。结果 实验侧术后 4、8及 12周钙、磷含量明显高于对照侧 (P<0 .0 5 ) ,随着时间的推移 ,钙、磷含量有升高的趋势。实验侧 8周可见髓腔再通 ,组织切片可见骨陷窝及板层骨形成。结论 胎骨是良好的移植材料。