周围神经65KD蛋白单克隆抗体的制备

神经化学诱向生长的研究是神经科学中的一个重要方向。本文以自然系统聚丙酰胺凝胶电泳,分离提取坐骨神经损伤后的远侧端中具有诱神经生长作用的65KD蛋白。以该蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术获得一株(VI5E)稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫印迹法表明,该单克隆抗体特异性地与65KD区带结合。免疫组化法显示,在损伤后的坐骨神经远侧端组织中的雪旺氏细胞呈阳性反应。单克隆抗体的制备为进一步阐明该蛋白的生物学特性奠定了基础。

周围神经43kD蛋白免疫化学研究

目的 制备周围神经 43k D蛋白单克隆抗体 ,并检测该蛋白在正常及损伤坐骨神经中的表达。方法 实验用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统 ,从周围神经中分离回收 43k D蛋白作为抗原 ,免疫 BAL B/ c小鼠 ,通过杂交瘤技术和点膜印迹法检测 ,获得分泌识别 43k D蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,以 Western blot方法检测单克隆抗体的特异性 ,并检测43k D蛋白在正常坐骨神经及损伤坐骨神经远侧端中的表达。结果 经检测获得了识别 43k D蛋白的单克隆抗体 ,Westernblot显示在正常大鼠坐骨神经与损伤后 2周的坐骨神经远侧端组织电泳图谱 43k D处均出现特异的阳性反应条带 ,在损伤神经中 43k D蛋白阳性反应产物着色较深。结论 43k D蛋白具有独特的免疫化学特性 ,在正常与损伤坐骨神经中均有表达 ,在损伤坐骨神经中表达更强。

周围神经18kD蛋白单克隆抗体的制备

本实验用不连续、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统，以损伤坐骨神经远侧端提取的具有神经诱向生长作用的、PI为5．2的18kD蛋白作为抗原，免疫BALB／C小鼠，通过杂交瘤技术，Elisa法筛选，获得二株（Ⅲ8G、Ⅳ3C）稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫印迹结果表明单克隆抗体能特异性识别分子量为18kD蛋白。免疫组化法显示：在实验组坐骨神经远侧端为阳性反应，对照组坐骨神经的神经膜为阴性。