Combined Effect of Temperature and Cadmium on Molecular Responses of Hsp70 and P-gp Genes in Crassostrea gigas

To evaluate the combined effect of temperature and cadmium on the molecular responses of heat shock protein 70(hsp70)and P-glycoprotein(P-gp)in mantle,digestive gland and gills of Crassostrea gigas,oysters were exposed to combinations of five temperature levels(10,15,20,25,and 30℃)and 10μg L^(-1)cadmium for 21 days.Oysters were sampled for mRNA quantification by qPCR,and the results showed that the P-gp gene expression changed significantly after treatment at different temperatures and different treatment times.The P-gp gene expression was the highest in the digestive gland.Compared with the control group,the P-gp gene expression in cadmium treatment groups at all the different temperatures were significantly higher than the control group.The control oysters(kept at 10℃during the whole experiment without cadmium)expressed low levels of hsp70,but the groups treated with cadmium displayed somewhat higher levels.The present study demonstrated hsp70 and P-gp played an important role in the detoxification of Cd in C.gigas,and confirmed temperature should be considered for the assessment of Cd-induced toxicity in oysters.

洗心汤对肠上皮屏障炎症模型P-gp/eCBs轴的影响

目的 观察洗心汤对肠上皮屏障(IEB)炎症及P-gp/e CBs轴的影响,基于“脑-肠轴”探讨其治疗阿尔茨海默病(AD)的可能机制。方法 将T84细胞接种于Transwell跨膜培养系统中模拟肠黏膜屏障,将细胞分为空白组、模型组和洗心汤24、48、72 h组,根据筛选后的造模及药物浓度进行干预,MTT法检测细胞存活率,上皮细胞电阻仪检测跨膜电阻(TEER),ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6、β淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)、p-Tau含量,Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)、大麻素受体1(CB1)、大麻素受体2(CB2)蛋白表达,免疫荧光染色检测P-gp表达,RT-PCR检测P-gp m RNA表达。结果 与空白组比较,模型组细胞存活率明显降低,TEER明显减小,细胞上清液TNF-α、IL-6、Aβ_(1-42)和p-Tau含量明显增加,CB2蛋白表达明显降低,CB1蛋白表达明显升高,P-gp蛋白和m RNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,洗心汤48 h、72 h组细胞存活率明显升高,TEER明显增大,细胞上清液TNF-α、IL-6、Aβ_(1-42)和p-Tau含量明显减少,CB2蛋白表达明显升高,CB1蛋白表达明显降低,P-gp蛋白和m RNA表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 洗心汤可能通过调节P-gp/e CBs轴相关蛋白表达改善脂多糖诱导的IEB炎症,影响AD病理进展。

高原低氧环境下HDAC5在大鼠体内P-gp表达中的作用及对苯妥英钠药代影响

目的探究高原低氧环境下HDAC5在大鼠体内P-gp表达中的关键作用及对苯妥英钠药代的影响。方法Wistar大鼠运至海拔4010 m的青海玉树巴塘,每组6只。不同组分别给予苯妥英钠、苯妥英钠联用金丝桃素、苯妥英钠联用维拉帕米。在高原地区收集服药后不同时间的血浆和肝组织。采用UFLC-MS法测定血浆中苯妥英钠的浓度,计算药代动力学参数。Western blot检测肝组织中HDAC5、P-gp蛋白表达的变化。结果UFLC-MS结果表明,给予P-gp激动剂后,AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、T_(1/2z)、CL_(z)/F、V_(z)/F增加;给予P-gp抑制剂后,AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、T_(1/2z)降低。同时,高原低氧环境下,HDAC5参与P-gp表达的调控。当给予P-gp激动剂和抑制剂时,HDAC5与P-gp表达呈现相同变化趋势。结论高原低氧环境下,肝中转运体P-gp的表达影响了P-gp底物苯妥英钠的药代动力学,P-gp的变化水平与HDAC5有关。

幽门螺杆菌感染胃癌患者胃黏膜MIF和P-gp与FasL的表达及意义

目的探究幽门螺杆菌(Hp)感染胃癌患者胃黏膜MIF、P-gp、FasL的表达及意义。方法选取2020年5月—2022年5月赤峰市医院病理科留存胃癌患者经病理学组织活检诊断确诊的癌变胃黏膜组织为A组(n=59)、距离癌组织边缘超过5 cm的正常黏膜组织为B组(n=59),采用HE染色、免疫组织化学方法进行MIF、P-gp、FasL水平测定,同时以Warthin-Starry银染法测定结果为依据,确定A组有无合并幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染分组:Hp阴性组(n=35)、Hp阳性组(n=24),比较A组与B组MIF、P-gp、FasL阳性表达率,在此次基础上,分析MIF、P-gp、Fas与Hp阳性组的临床病理特征关系,以及比较联合项目检测的诊断效能。结果A组MIF、P-gp、Fasl的表达阳性率较B组高,差异有统计学意义(χ^(2)=42.270、75.423、71.116,P<0.05);Ⅲ期+Ⅳ期Hp阳性组MIF、P-gp、FasL表达阳性率较Ⅰ期+Ⅱ期高,差异有统计学意义(χ^(2)=6.171、6.565、5.874,P<0.05);中低分化Hp阳性组MIF、P-gp、FasL表达阳性率较高分化组高,差异有统计学意义(χ^(2)=4.196、4.039、5.916,P<0.05);有淋巴结转阳性组MIF、P-gp、FasL表达阳性率较无淋巴结转高,差异有统计学意义(χ^(2)=6.171、6.171、5.531,P<0.05)。联合项目检测的敏感度、特异度较MIF、P-gp、Fas单一项目指标检测高。结论胃癌患者胃黏膜组织中MIF、P-gp、Fasl呈高表达,且胃癌合并Hp感染患者MIF、P-gp、Fasl水平更高,尤其是Ⅲ期+Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移患者,同时联合检测诊断效能更理想,利于提高胃癌合并Hp感染患者诊断效果。

TCP1表达对HL60和HL60/A 细胞增殖及细胞内药物蓄积的调控作用及其机制

目的:研究TCP1表达对HL60及HL60/A细胞增殖及细胞内药物蓄积的影响及其机制。方法:利用慢病毒转染技术构建敲低、过表达TCP1的HL60/A细胞和HL60细胞及其对照组细胞,Western blot评估敲低、过表达效率。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测细胞内的药物蓄积;流式细胞术及Western blot检测膜转运蛋白(MRP1、P-gP)及p-AKT的表达水平。结果:在HL60/A细胞中敲低TCP1的表达能够抑制细胞增殖,增加细胞内药物蓄积,降低转运蛋白MRP1及P-gP的表达,在HL60细胞中过表达TCP1能够促进细胞的增殖,减少细胞内药物蓄积,提高转运蛋白MRPI及P-gP的表达。同时利用PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT信号能够拮抗TCP1过表达所致的细胞增殖活性增强、细胞内药物蓄积减少及MRP1、P-gP表达的升高。结论:TCP1能够促进细胞增殖,并通过激活PI3K/AKT信号促进转运蛋白MRP1、P-gP的表达,降低细胞内的药物蓄积。

GST-π和P-gp在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨耐药蛋白GST-π和P-gp在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法用免疫组化法检测209例胃癌组织GST-π和P-gp的表达情况,并收集临床病理相关资料作回顾性分析。结果 GST-π表达阳性率为81.82%(171/209),与淋巴结转移数目有关(P<0.05);P-gp表达阳性率为79.90%(167/209),在印戒细胞癌中表达率较高(P<0.05);GST-π和P-gp表达具有相关性(r=0.241,P<0.05)。结论 GST-π和P-gp的表达与胃癌的生物学行为有一定的相关性。

P-gp、GST-л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨P gp、GST л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达及临床意义。 方法 采用免疫组化方法研究了P gp、GST л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达情况。 结果 P gp、GST л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达率分别为 5 9.74 %、6 7.5 3%、83.12 %。除TopoⅡ的表达与组织学类型有关外 (P <0 .0 0 1) ,其余与各项临床病理参数均无关 (P >0 .0 5 )。结论 胃癌组织中存在着P gp、GST л、TopoⅡ表达水平的变化 ,临床检测P gp、GST л、TopoⅡ对胃癌化疗方案的制定具有重要的指导意义。

P-gp,MRP,LRP和GST-π等多药耐药蛋白在肝癌中的协同表达研究

目的:探讨多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π在肝癌细胞中的共表达情况.方法:以69例肝癌患者为本次研究对象,应用免疫组化SP法检测多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π在肝癌组织的共表达情况.结果:不同分型、不同分期肝癌组织P-gp,MRP,LRP和GST-π阳性表达率及共表达差异无显著性(P>0.05);分化程度不同的肝癌组织多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π阳性表达率及共表达有明显差异(P<0.05).结论:多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π在不同分型、不同分期和不同分化程度的肝癌组织中均有明显共表达,在不同分化程度的肝癌组织中阳性表达率及共表达更为明显.

TopoⅡα、GST-π、P-gp在卵巢癌化疗耐药中的作用

目的探讨TopoⅡα、GSTπ、Pgp在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法采用免疫组化SP法、计算机图像分析技术对80例卵巢癌、20例良性上皮性卵巢肿瘤、20例正常卵巢组织中TopoⅡα、GSTπ、Pgp的表达进行检测。结果卵巢癌中TopoⅡα、GSTπ、Pgp的表达显著高于正常组及良性肿瘤组,P<0.05。TopoⅡα、GSTπ的表达与肿瘤分化程度有关,分化越差表达越高,P<0.05;Pgp的表达与多种病理因素无关,P>0.05。术前化疗组GSTπ、Pgp的阳性表达率显著高于术前未化疗组,P<0.05。结论TopoⅡα、GSTπ、Pgp在卵巢癌耐药中发挥重要作用,这三项指标的联合检测对制定合理的化疗方案具有积极的指导意义。

P-gp、GSTπ及TopoⅡ在胃癌中的表达及临床意义

目的 :探讨耐药基因蛋白P gp、GSTπ和TopoⅡ在胃癌中的表达及其临床意义。方法 :应用S P免疫组化法对 85例胃癌进行检测。结果 :胃癌组织P gp、GSTπ表达率分别为 37 6 5 %及 6 3 5 3% ,表达强度与临床分期有关 ,其中高分期者P gp表达较低分期者为高。TopoⅡ表达率为 5 5 2 9% ,阳性率与组织学分类相关 ,分化较低者 (5 9 5 7% )较分化较高者 (38 30 % )阳性率高。结论 :P gp、GSTπ、TopoⅡ的耐药机制各不相同 ,根据P gp、GSTπ和TopoⅡ表达情况进行药物选择对胃癌化疗具有重要的指导意义。

乳腺癌中耐药蛋白P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ的表达

目的明确乳腺癌中是否存在P-gp、GST-π、TopoⅡ三种原发耐药蛋白;三种耐药蛋白的表达与乳腺癌的组织类型、细胞分化程度、TNM分期是否相关;是否影响乳腺癌患者的预后。方法采用S-P免疫组化方法,检测260例乳腺癌患者中P-gp、TopoⅡ、GST-π的表达情况,同时取10例乳腺病及10例癌旁乳腺组织作对照。结果乳腺癌中三种耐药蛋白呈异质性表达。P-gp、GST-π和TopoⅡ在良性病变中弱表达,在伴有早期浸润的乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌中的表达同样明显高于乳腺导管内癌;其中P-gp和GST-π表达和预后相关,差异显著(P<0.01,P<0.05)。结论乳腺癌在发生早期浸润的同时就伴随着耐药的发生;P-gp和GST-π是乳腺癌患者预后的影响因素,综合检测优于单一检测。

常态虚寒状态小鼠CYP3A活性P-gp水平比较研究

目的:比较虚寒状态与常态小鼠肝和小肠细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平情况。方法:肌注氢化可的松复制小鼠虚寒状态模型,采用聚乙二醇法制备肝和小肠微粒体,测定肝和小肠细胞色素CYP 3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:虚寒状态组和正常状态组肝和小肠微粒体内CYP3A活性和P-gp水平存在差异,即正常状态CYP3A活性、P-gp水平高于虚寒状态,且差异显著(P<0.05)。结论:初步发现,CYP3A活性和P-gp水平存在机体状态差异。

胃癌中COX-2与P-gp表达及其预后的研究

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)与P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测COX-2和P-gp在60例胃癌组织中的表达情况。结果全组COX-2阳性率为63.3%(38/60),P-gp阳性率为68.3%(41/60)。COX-2的表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期相关(P<0.05);P-gp的表达与浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期相关(P<0.05)。COX-2和P-gp同时表达、单独表达及不表达时,胃癌的组织分化程度、病变浸润深度(T分期)、淋巴结转移(N分期)和临床分期组间差异有统计学意义(P<0.05)。COX-2和P-gp在胃癌组织中的表达具有相关性(r=0.374,P=0.004)。胃癌患者1、3、5年生存率分别为83.3%、40.0%和30.0%;COX-2阳性组和COX-2阴性组的1、3、5年生存率分别为79.0%、28.9%、15.8%和90.9%、59.1%、54.6%,两组间差异有统计学意义(χ2=7.885,P=0.005)。结论在胃癌组织中COX-2参与了P-gp的表达调控。COX-2的表达可能成为影响胃癌生存的重要预测因子。

以重组P-gp为抗原建立检测MDR 1抗体间接ELISA方法的研究

目的:构建MDR1基因原核表达质粒,表达P-gp重组蛋白,建立检测MDR1抗体的间接ELISA方法。方法:利用重组PCR技术扩增MDR1基因的1kb片段,克隆至pET-28b(+)中,构建原核表达质粒pETP-gp,转染感受态菌BL21(DE3)和BL21(DE3)plyss;以E.coli高效表达的P-gp基因主要抗原编码区重组蛋白为抗原,以HRP标记的兔抗人IgG为二抗,建立间接ELISA检测方法。结果:正确构建了pETP-gp原核表达质粒,并可在E.coli中高效表达,表达蛋白可用作检测MDR1抗体ELISA抗原。结论:成功表达出重组蛋白P-gp,建立了检测MDR1抗体的间接ELISA方法。

MCL-1蛋白在结肠癌中的表达及与耐药相关蛋白GST-π、P-gp的关系

目的探讨髓细胞白血病基因-1(MCL-1)、谷胱甘肽巯基转移酶π(GST-π)、P-糖蛋白(Pgp)在结肠癌发生发展及其在化疗耐药中的意义。方法应用免疫组化的方法检测168例结肠癌及相应癌旁正常组织中MCL-1蛋白的表达水平,分析其表达与结肠癌临床病理参数的关系并探讨其与GST-π、P-gp蛋白的相关性。结果结肠癌中MCL-1、GST-π、P-gp的表达均显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。结肠癌中MCL-1的表达与肿瘤分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05);P-gp与肿瘤浸润深度有关,与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移、性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);GST-π与分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移等各临床参数均无关(P>0.05)。MCL-1与P-gp呈正相关(P<0.01),与GST-π无关(P>0.01);P-gp与GST-π呈正相关(P<0.01)。结论 MCL-1的异常表达可能参与了结肠癌的发生发展,并且可能与肿瘤的多药耐药有关。MCL-1可能为临床肿瘤治疗提供新的药物干预靶点,并且可能成为判断结肠癌预后及指导临床化疗的重要因子。

P-gp调节对药物代谢动力学及药效学的影响

近年来,三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）结合盒转运载体蛋白对药物体内过程的影响已被广泛研究,P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）是其中最大的一个亚系.

甘草总皂苷及甘草酸对Caco-2细胞P-gp功能和表达的影响

目的研究甘草总皂苷及其主要成分甘草酸对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,进一步探讨甘草配伍解毒可能的作用机制。方法采用流式细胞仪检测罗丹明-123经甘草总皂苷和甘草酸处理后Caco-2细胞对其摄取量的差异评价P-糖蛋白的外排功能;采用western blot检测Caco-2细胞经甘草总皂苷和甘草酸处理后P-糖蛋白表达的差异。结果经过1 h的干预,5、10、50μg/mL的甘草总皂苷和甘草酸使细胞内罗丹明-123的荧光强度较阴性对照组相比显著减少41.4%、37.4%、34.8%;33.3%、29.9%、27.5%,对P-gp功能表现出诱导作用(P<0.05)。高质量浓度的甘草总皂苷(100、200、400μg/mL)和高浓度的甘草酸(100、200、400μmol/L)对细胞内罗丹明-123的荧光强度影响不显著(P<0.05)。经过72 h甘草总皂苷、甘草酸的干预,荧光强度较阴性组相比分别显著增加(P<0.05),呈现剂量依赖性。结论甘草总皂苷、甘草酸在一定剂量范围内既增强Caco-2细胞P-gp的功能,又能上调P-gp的表达。甘草酸可能是甘草总皂苷影响P-gp功能和表达的有效成分。

耐药相关基因MDR1、MRP、LRP及其表达产物P-gp、MRP、LRP在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的:研究探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织和癌旁组织中多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related proteins,MRP)、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)mRNA及其相应蛋白P-gp、MRP、LRP的表达情况及临床意义。方法:运用聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学法(IHC)检测43例NSCLC组织及癌旁组织标本中耐药基因MDR1、MRP、LRPmRNA及其蛋白P-gp、MRP、LRP的表达水平。结果:MDR1、MRP和LRP mRNA3种基因在43例肿瘤组织中的表达率分别为79.06%(34/43)、65.17%(28/43)和86.05%(37/43),癌旁组织中的表达率分别为20.00%(3/15)、13.33%(2/15)和13.33%(2/15);P-gp、MRP和LRP3种耐药蛋白在肺癌组织中的表达率分别为74.42%(32/43)、67.44%(29/43)和88.37%(38/43),癌旁组织中的表达率分别为13.33%(2/15)、20.00%(3/15)和6.67%(1/15),上述3种基因及其蛋白在肺癌组织与癌旁组织的表达差异有显著性(P<0.05)。肺癌组织中既存在耐药基因MDR1、MRP和LRP的共表达,也存在耐药蛋白P-gp、MRP和LRP的共表达,3种基因与其相应蛋白表达密切相关。肺腺癌组织中MDR1及其蛋白P-gp、LRPmRNA表达率较高,与其它病理类型相比差异有显著性(P<0.05),MRPmRNA及其蛋白MRP表达与肺癌病理类型、临床分期和组织学分级无关(P>0.05)。结论:NSCLC存在着广泛的原发性多药耐药现象,耐药基因MDR1、MRP和LRPmRNA及其相应蛋白参与了肺癌多药耐药的形成,检测多药耐药基因可为指导临床用药提供一定的理论依据及策略。