荔枝霜疫霉对烯酰吗啉的抗性风险评估

【目的】检测荔枝霜疫霉对烯酰吗啉的敏感性,建立敏感性基线;测定抗烯酰吗啉突变株的生物学适合度,为荔枝霜疫病的化学防治提供依据。【方法】采用菌丝生长速率法,对2019—2020年来自中国广东、广西、福建、四川和云南5个省份荔枝主产区的320株荔枝霜疫霉单孢子囊菌株进行烯酰吗啉敏感性测定,通过药剂驯化获得抗烯酰吗啉突变株,测定其生物学适合度。【结果】经过异常值分析并剔除,317株荔枝霜疫霉菌株对烯酰吗啉的敏感性频率分布呈正态分布,EC_(50)值介于0.0863~0.1733μg·mL^(-1)之间,平均(0.1222±0.0009)μg·mL^(-1),以此建立荔枝霜疫霉对烯酰吗啉的敏感性基线。来自2020年的荔枝霜疫霉菌株对烯酰吗啉的EC_(50)均值较2019年显著增高。3株荔枝霜疫霉抗烯酰吗啉突变株的抗性指数介于77.17~360.11之间,为中到高抗水平,抗药性可稳定遗传,与亲本相比,抗性突变株的孢子囊萌发率及卵孢子产量均下降,但致病力相当。【结论】荔枝霜疫霉对烯酰吗啉敏感,烯酰吗啉可继续作为防治荔枝霜疫病的有效杀菌剂。

吡唑醚菌酯与代森锰锌对两种果树病原菌的联合毒力

为了明确吡唑醚菌酯与代森锰锌混配对荔枝霜疫霉病菌（Peronophythora litchii）和香蕉尾孢叶斑病菌（Pseudocercospora musae）的联合毒力,分别采用菌丝生长速率法、菌丝干重法测定了吡唑醚菌酯、代森锰锌及其不同配比混剂对荔枝霜疫霉病菌和香蕉尾孢叶斑病菌的毒力。结果表明：吡唑醚菌酯与代森锰锌质量比为1.35∶35的混剂对荔枝霜疫霉病菌表现为相加作用,增效系数为1.286 3;吡唑醚菌酯与代森锰锌质量比为8∶66、6∶77和4∶88的混剂对香蕉尾孢叶斑病菌同样表现出较好的相加作用,增效系数分别为1.299 9、1.378 0和1.390 7;综合考虑混配经济效益和降低病原菌对吡唑醚菌酯产生抗性风险等因素,吡唑醚菌酯与代森锰锌以质量比1.35∶35～8∶66进行混配较为合理。

开口箭甾体皂甙元的分离鉴定及其抗荔枝霜疫霉菌活性

在以荔枝霜疫霉菌为指示菌的生物活性测定导向跟踪下,运用TLC、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离纯化方法,从开口箭(Tupistra chinensis)甲醇提取物的乙酸乙酯分部萃取物中分离纯化得到2个抗菌化合物。经现代光谱(MS、IR、1D NMR和2D NMR)分析,确定化合物1为1β,2β,3β,4β,5β,7α-六羟基螺甾-25(27)-烯-6-酮,化合物2为螺甾-25(27)-烯-1β,2β,3β,4β,5β,6β,7α-七醇。离体抗菌活性测定化合物1和化合物2抑制荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii)孢子囊萌发的EC50分别为100.28 mg.mL-1和124.37 mg.mL-1。用质量浓度为500 mg.mL-1的两个化合物分别处理后接种霜疫霉菌,供试荔枝果实的发病率分别为16.7%和18.9%。

开口箭提取物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用及其对荔枝果实的贮藏效果

目的寻找植物源抗菌物质用于果蔬采后病害的控制。方法对开口箭(Tupistrachinensis)根茎甲醇提取物进行了液-液分部萃取,利用生长速率法和果实接种病原菌的方法测定了提取物(萃)对荔枝霜疫霉菌(Peronophythoralitchii)的离体与活体抗菌活性,并用提(萃)取物处理荔枝进行了贮藏试验。结果开口箭甲醇提取物及其乙酸乙酯分部萃取物和正丁醇分部萃取物抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长的EC50分别为1598.10、662.86和1147.31μg.ml-1,用甲醇提取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物溶液处理,荔枝果实接种感病率明显降低,并且上述提(萃)取物具有防治荔枝贮藏病害发生和延缓主要品质性状劣变的作用。结论开口箭甲醇提取物及其乙酸乙酯分部萃取物和正丁醇分部萃取物对荔枝霜疫霉菌具有明显的离体和活体抗菌活性,对荔枝果实具有较好的贮藏效果。

荔枝霜疫霉拮抗菌株链霉菌sp.SC120抗真菌活性代谢物的研究

从土壤样品中筛选、分离得到一株能拮抗荔枝霜疫霉的链霉菌。从此拮抗菌株的发酵液中分离得到了两个活性成分 ,经光谱分析 ,两个活性化合物分别鉴定为LeptomycinA和LeptomycinB。运用核磁共振技术 ( 1H 1HCOSY、13 C 1HCOSY和HMBC) ,正确地归属了两个化合物的碳谱数据。两个化合物对荔枝霜疫霉均显示出较强的抑制作用。

海洋真菌的筛选及其对离体荔枝果霜霉病和炭疽病的防效

从广西北部湾红树林区的近海海底沉积物与海水样品中分离出64株海洋真菌,以荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii和荔枝炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides为拮抗对象,发现有8株菌株对病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,其中菌株MF-3、MF-13、MF-15和MF-16的发酵滤液对荔枝霜疫霉菌的抑制效果较好,菌丝生长抑制率达到94%以上;菌株MF-3和MF-16的发酵滤液对荔枝炭疽病菌抑制效果较好,菌丝生长抑制率均在70%以上。用菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-13和MF-9的发酵滤液进行荔枝离体果防病保鲜试验,结果表明常温下保鲜处理2~4d后,鲜果的褐变指数小于对照组,其中菌株MF-9防褐变效果最好。在26~32℃下,用5株菌的发酵滤液分别浸泡鲜果1d后接种荔枝霜疫霉,3d后菌株MF-6、MF-8、MF-9和MF-13处理的发病率分别是68.3%、71.67%、66.18%和80%,显著低于对照组的87.2%和烯酰玛琳的84.2%（P〈0.05）,能推迟鲜果晚发病1d。接种炭疽菌3d后,菌株MF-6处理的发病率仅为64.44%,与多菌灵（62.76%）和代森锌（62.54%）效果相当。形态学观察结合分子鉴定,确定菌株MF-3、MF-6、MF-8、MF-9和MF-13分别为布雷正青霉Eupenicillium brefeldianum、微紫青霉Penicillium janthinellum、阿达青霉Penicillium adametzii、草酸青霉Penicillium oxalicum和短棒曲霉Aspergillus clavatonanicus。

链霉菌4301菌株的抑菌活性与液体发酵的优化

从土样中分离筛选链霉菌4301菌株的代谢产物,固体培养4301菌株.结果表明,4301菌株对荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii和荔枝炭疽病菌Glomerella cingulata的抑菌圈透明,对荔枝霜疫霉菌的抑菌圈直径达到25.5mm.以荔枝霜疫霉菌为指示菌,对菌株4301发酵培养基和发酵条件进行优化研究,得到的最佳培养基组成(w)为:葡萄糖2%、可溶性淀粉2%、黄豆饼粉浸液3%、蛋白胨0.3%、FeSO40.001%、NaCl 0.2%、CaCO30.25%、K2HPO40.02%;优化后的培养条件:发酵时间为96 h、发酵温度为28℃、接种量(w)为8%、装液量为75 mL,优化后4301菌株对荔枝霜疫霉菌的抑菌圈直径达到28.8 mm.

百泰对荔枝霜疫霉病的生物活性测定与防治试验

60%百泰(吡唑醚菌酯.代森联)水分散粒剂是由巴斯夫公司研发生产的一种新型杀菌剂,为拓宽其适用范围,采用室内生物活性测定与田间防治试验相结合的方式,测定了其对荔枝的主要病害荔枝霜疫霉病的作用。试验结果表明,60%百泰对霜疫霉病菌有优良的抑菌效果,浓度为10μg/mL的抑菌效果达96.98%,EC50和EC90分别为0.752、3.417μg/mL;大田防治效果优良,在荔枝挂果期施药3次,60%百泰1 000倍对荔枝霜疫霉病的防效达到80%以上,与对照药剂25%凯润乳油3 000倍处理的防效相近,显著优于另一对照药剂70%品润干悬乳剂700倍处理的防效,建议在荔枝产区推广应用。

53%金雷多米尔-锰锌水分散粒剂防治荔枝霜疫霉病试验

53％金雷多米尔-锰锌水分散粒剂是58％雷多米尔-锰锌可湿性粉剂的改进型新产品，是防治卵菌纲真菌病害的高效、环保新型药剂，使用时无粉尘，对人体、环境和作物更安全，是对环境友好型的新一代水分散性颗粒杀菌剂。田间花效试验和使用技术研究结果表明，53％金雷多米尔-锰锌水分散粒剂900倍、700倍、500倍在荔枝花期施药2次，对花期霜疫霉病的防效为63．35％～77．75％；在挂果期施药3～4次，对挂果期果实霜疫霉病的防效为65．40％～79．93％，对贮藏期果实霜疫霉病的防效为62．36％～75．24％，均显著优于对照药剂80％大生可湿性粉剂600倍的防效。其可作为58％雷多米尔-锰锌可湿性粉剂防治荔枝霜疫霉病替代药剂，值得在生产上进一步示范和推广使用。

荔枝霜霉病生物防治研究进展

【目的】对荔枝霜霉病生物防治研究现状及存在问题进行总结和分析,以期为后续研究及生产应用提供参考。【方法】以现有文献为依据,从植物活性筛选、微生物活性筛选、有效成分分析和产品开发4个方面总结荔枝霜霉病生物防治研究进展。【结果】自然界拥有丰富的荔枝霜霉菌生防资源。我国对荔枝霜霉病生物防治研究比较活跃,但现行研究以对拮抗植物、微生物的初筛为主要目的,停留在对拮抗生物代谢产物的活性测试水平,对活性物质的生化性质探讨不够深入,阻碍了荔枝霜霉病生防药物的开发与应用,资源价值没有真正得到实现。【建议】以拮抗荔枝霜疫霉菌活性成分为核心,加强对其结构鉴定、化学构效分析及其诱抗和抑菌机理等研究,为研制新型生物农药奠定更坚实的理论基础和物质基础。

绿僵菌SC0924含氮杂环类代谢产物及其抗荔枝霜疫霉活性

从绿僵菌(Metarhizium sp. SC0924)固体发酵物中分离得到12个含氮杂环类化合物,通过波谱分析,分别鉴定为环(丙氨酸-脯氨酸)(1)、环(脯氨酸-酪氨酸)(2)、环(缬氨酸-亮氨酸)(3)、环(亮氨酸-异亮氨酸)(4)、腺嘌呤(5)、腺嘌呤核苷(6)、尿嘧啶(7)、胸腺嘧啶(8)、胸腺嘧啶脱氧核苷(9)、4-乙酰氨基咪唑(10)、焦谷氨酸正丁酯(11)和光敏素(12)。滤纸片琼脂扩散法试验表明化合物2和3具有较弱的抗荔枝霜疫霉活性。

荔枝霜疫霉菌对烯酰吗啉的敏感性测定

荔枝霜疫霉病是荔枝最重要的病害之一,烯酰吗啉用于防治该病害.采用生长速率法测定了烯酰吗啉对2009-2012年采自广东、广西、福建和云南等地区的115个荔枝霜疫霉菌菌株的有效抑制中浓度值（EC50值）,结果表明：各菌株的EC50值介于0.0977～0.2226μg/mL之间,平均为0.1702 （±0.0026） μg/mL,最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的2.28倍;所有菌株的EC50值频率分布呈连续单峰曲线,表明无抗药性亚群体.

荔枝霜疫霉不同发育阶段对4种QoI类杀菌剂的敏感性

荔枝霜疫霉是荔枝上的严重病害。在离体条件下比较了4种QoI类杀菌剂烯肟菌酯、烯肟菌胺、SYP-2815和苯醚菌酯对荔枝霜疫霉不同发育阶段的影响。结果表明：供试药剂对荔枝霜疫霉病菌菌丝扩展及孢子囊产生量均表现出一定的抑制作用,EC50值分别在0.197 01.257 9μg/m L和0.212 70.816 0μg/m L之间,而对其游动孢子释放的抑制作用较低,EC50值在4.144 87.425 3μg/m L之间;4种药剂在一定浓度下会加速游动孢子的消解,抑制休止孢的形成;对孢子囊和休止孢萌发具有优异的抑制活性,EC50值分别在0.046 50.342 4μg/m L和0.036 50.187 7μg/m L之间。

霜疫霉菌侵染对荔枝氧化作用的影响

淮枝、桂味和糯米糍 3种荔枝经接种霜疫霉菌后 ,果皮超氧化物歧化酶 (SOD)和过氧化氢酶 (CAT)活性下降 ;而过氧化氢 (H2 O2 )含量升高 ,超氧阴离子自由基 (O2 .)产生速率增加 ,丙二醛 (MDA)积累增多 ,与果实感病指数增加相一致 ,表明霜疫霉菌侵染加速荔枝氧化作用的进程。

68%精甲霜·锰锌水分散粒剂防治荔枝霜疫霉病药效试验

68%精甲霜·锰锌水分散粒剂是防治卵菌纲真菌病害的高效、环保型杀菌剂,使用过程中无粉尘,对人体、环境和作物更安全,是新型的水分散性粒剂杀菌剂。田间药效试验结果表明,68%精甲霜.锰锌水分散粒剂1 000倍、800倍、600倍在荔枝挂果期施药3次后,对采收期果实霜疫霉病的防效为65.89%～79.95%,对贮藏期果实霜疫霉病的防效为61.39%～79.07%,显著优于对照药剂80%大生可湿性粉剂600倍的防效,近年作为替代58%甲霜灵.锰锌可湿性粉剂防治荔枝霜疫霉病的药剂,已在广东及邻近省份的荔枝产区推广应用。

荔枝霜疫霉游动孢子及卵孢子生物学特性研究

为了更深入理解荔枝霜疫霉在果园内侵染流行规律．利用植物病理学方法．通过离体培养研究了环境因素对荔枝霜疫霉游动孢子释放、萌发及卵孢子萌发的影响。结果表明，在荔枝果肉培养基中，孢子囊萌发的温度等于或小于孢子囊形成的温度时．孢子囊主要以释放游动孢子的方式萌发．28℃是荔枝霜疫霉孢子囊释放游动孢子的临界温度。荔枝霜疫霉在荔枝果肉培养基中，于26℃下培养7d后，游动孢子释放最适温度范围为12～20℃，最适pH值为5～7；游动孢子萌发的最适温度为20～24℃，最适pH值为7-9；孢子囊在水滴中才释放游动孢子．游动孢子在水滴中方可萌发。荔枝霜疫霉在荔枝果皮和叶片煎汁培养基中均可产生卵孢子。当温度为28℃，pH值为5，12h光暗交替光照时，卵孢子的萌发率最高，可达到49．68％；温度是影响孢子囊萌发和萌发方式的主要因素．水是游动孢子释放和萌发的必要条件。卵孢子广泛存在于果园中，为翌年初侵染源：荔枝霜疫霉主要以游动孢子再次侵染寄主．

温度和露时对荔枝霜疫霉侵染发病的影响

【目的】研究不同温度和露时条件下荔枝霜疫霉Peronophythora litchi病菌孢子囊的萌发和侵染动态,并以此为变量构建数学模型,以期为病害精准预测预报及防控提供参考和依据。【方法】在人工控温、控湿条件下,研究温度(15~30℃)和露时(2~24 h)对荔枝霜疫霉孢子囊萌发和侵染的影响;选用韦布尔模型的修正式,在SAS软件中拟合得到准确度较好的孢子囊萌发和发病严重度模型,进而绘制其对应的等高线风险预测图。【结果】温度、露时及其交互作用可显著影响荔枝霜疫霉孢子囊的萌发及寄主发病的严重度。荔枝霜疫霉孢子囊萌发率和寄主发病严重度随着露时的延长而逐渐升高。在温度为25℃时,所有露时处理条件下的孢子囊萌发率达到最高;露时相同的条件下,当温度为25℃时,孢子囊侵染荔枝果实发病严重度最强。当温度为22~30℃、露时为3~24 h时,叶片的病害严重度超过0.2;孢子囊侵染果实发病迅速且严重,当温度为15~30℃、露时约2~3 h时,果实发病的严重度高于0.6。荔枝霜疫霉侵染叶片和果实发病严重度模型分别为f(t,θ)={1−exp[−(0.1943×t)2]}/cosh[(θ−27.7696)×0.9277/2]和f(t,θ)={1−exp[−(0.4693×t)2]}/cosh[(θ−24.556)×0.1709/2]。【结论】荔枝霜疫病发生依赖于温度和露时,本研究建立的模型可以用于指导生产上防治该病害的施药时间和次数。

荔枝果皮多酚对荔枝霜疫霉生物学特性的影响

【目的】探讨荔枝多酚对荔枝霜疫霉生长发育的影响。【方法】溶剂浸提法提取荔枝果皮中的总多酚,采用常规植物病理学手段研究荔枝多酚质量浓度对荔枝霜疫霉菌落形态、生物量、孢子囊萌发方式、游动孢子萌发及卵孢子数量的影响。【结果】荔枝多酚质量浓度为150~300μg·mL^-1时,荔枝霜疫霉菌落致密,菌丝生长量和产孢量显著减少,孢子囊以释放游动孢子的方式萌发;培养基中荔枝多酚为100~300μg·mL^-1时,可显著促进游动孢子的萌发,抑制孢子囊的萌发;在无荔枝多酚的PDA培养基上荔枝霜疫霉不易产生卵孢子,当培养基中荔枝多酚质量浓度达到100μg·mL^-1时,荔枝霜疫霉产生卵孢子为10.8 mm^-2。【结论】荔枝多酚类物质参与荔枝霜疫霉生长发育的调控,抑制霜疫霉生长和产生孢子囊,具有开发新型安全性生物源杀菌剂的潜力。

荔枝霜疫病的研究进展

荔枝霜疫霉(Peronophythora litchii Chen ex Ko et al)引起的荔枝霜疫病是我国荔枝生产和贮藏运输过程中为害最严重的病害,极大地威胁着我国荔枝产业的健康发展。该病可为害荔枝嫩叶、嫩枝、花穗及果实,流行年份对荔枝产量影响极大。笔者主要从荔枝霜疫病的症状、病原菌的分类和生物学特性、发生与流行、致病机制及防治策略等方面进行综述,并提出今后研究的趋势和待解决的问题,为该病原菌的深入研究和病害防控提供参考。

31种植物甲醇提取物对荔枝霜疫霉菌和炭疽病菌的抑菌活性测定

以荔枝霜疫霉菌（Peronophythora litchii）和荔枝炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）两种荔枝上最为重要的病原真菌为供试菌,采用含毒介质的生长速率培养法,对采自广东省的31种植物的甲醇提取物对病原菌菌丝线性生长的抑菌活性进行离体测定。结果表明：在0.01 g/mL浓度下,对荔枝霜疫霉菌抑菌率大于60%的植物有9种,其中黄石斛（Dendrobium tosaense）、毛唇芋兰（Nervilia fordii）、葛（Pueraria phaseoloides）和土牛七（Thunbergia grandiflora）4种植物甲醇提取物的抑菌率达到100%;对荔枝炭疽病菌抑菌率大于60%的植物有2种,其中一点红（Emilia sonchifolia）的抑菌率达到100%,地丁草（Corydalis bungeana）的抑菌率为71.35%;同时对两种病原菌的抑菌率都大于50%的是地丁草（C.bungeana）。