Peroxiredoxin Ⅰ和Ⅱ在小鼠输卵管和子宫的分布与表达

目的:观察PeroxiredoxinⅠ和Ⅱ(PrxⅠ和Ⅱ)在小鼠输卵管和子宫的分布及其周期性变化。方法:免疫组织化学和蛋白免疫印迹技术。结果:在输卵管中,PrxⅠ和Ⅱ免疫阳性反应见于输卵管上皮;而子宫内,PrxⅠ免疫阳性反应分布于内膜上皮、腺体上皮和内膜基质,而PrxⅡ主要见于内膜基质。蛋白免疫印迹技术也显示这两型蛋白在输卵管和子宫均表达,动情期和动情间期这两型蛋白在输卵管和子宫中的表达水平无显著性差异。结论:提示PrxⅠ与Ⅱ在输卵管和子宫中表达稳定,可能为受精和早期胚胎发育提供抗氧化的良好微环境。

PeroxiredoxinⅡ在小鼠早胚发育中的作用及机理

目的观察PeroxiredoxinⅡ对小鼠植入前胚发育的影响,并探讨其可能的机制。方法收集昆明种小鼠的1细胞胚,采用微滴培养法连续培养48h,观察不同浓度PeroxiredoxinⅡ抗体对植入前胚发育的影响,以胚胎发育到各期的比例为判断发育效果的标准。同时,应用共聚焦扫描显微镜术结合特异性荧光探针2′,7′二氯氢化荧光素双乙酸酯,检测小鼠胚中氧自由基水平。结果抗体添加组和未添加组的1细胞胚经24h培养后96%以上发育成2细胞胚,但经48h培养,抗体添加组的胚发育明显受抑,多数停滞于2细胞期。激光共聚焦成像的结果表明,PeroxiredoxinⅡ抗体添加组的2细胞胚内荧光强度明显增强。结论PeroxiredoxinⅡ抗体可引起2细胞胚发育阻滞,这可能与胚内的氧自由基水平升高有关,提示植入前胚内PeroxiredoxinⅡ可减少或消除细胞内氧自由基,促进植入前胚的发育。

Peroxiredoxin Ⅱ在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义

目的探讨Peroxiredoxin Ⅱ在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及临床意义。方法用蛋白免疫印迹(westernblot)的方法检测71例新鲜卵巢组织及卵巢上皮肿瘤组织的Peroxiredoxin Ⅱ的表达情况,其中正常卵巢组织16例,良性卵巢肿瘤16例,卵巢癌39例。结果Peroxiredoxin Ⅱ在正常卵巢组织表达为(1.00±0.44),在良性卵巢上皮性肿瘤组织中表达为(0.83±0.50),在卵巢癌组织中表达为(0.60±0.23),卵巢癌与正常卵巢组织的表达差异有显著性(P<0.01);良性卵巢上皮性肿瘤组织与正常卵巢组织、癌组织比较差异均无统计学意义;且Peroxiredoxin Ⅱ在卵巢癌组织表达降低与其临床分期、病理类型、细胞分化及绝经等参数无关。结论Peroxiredoxin Ⅱ可能在卵巢上皮癌的发生中起抑制因子作用,而在其发展中无明显作用。

Peroxiredoxin Ⅱ酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活效应检测

目的:应用酵母双杂交体系,构建人peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)蛋白酵母双杂交诱饵载体,并检测该载体的表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用。方法:用PCR扩增PrxⅡ基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与pGBKT7载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;用醋酸锂法(Li-Ac)将序列正确的重组质粒pGBKT7-PrxⅡ转化入AH109酵母菌株,在缺陷性培养基上观察pGBKT7-PrxⅡ在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和单倍体及二倍体自激活功能。结果:成功构建pGBKT7-PrxⅡ重组质粒。转化有重组质粒和pGBKT7空载体的酵母菌都能在SD/-Trp/X--αgal平板上长出粉红色菌落,在SD/-His/-Trp/X--αgal,SD/-Ade/-Trp/X--αgal平板上不能生长,两种酵母菌在SD/-Trp液体培养基中培养16 h后,菌液的OD600均值均为0.9,说明AH109[pGBKT7-PrxⅡ]转化成功,对酵母菌株AH109无毒性且不具自主激活报告基因的功能。结论:成功获得了在酵母细胞中正确表达,并对酵母细胞无毒性且未自主激活报告基因的诱饵表达载体pGBKT7-PrxⅡ,该载体可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”,该诱饵载体可应用于酵母双杂交系统3筛选PrxⅡ相互作用蛋白。

子痫前期患者胎盘组织氧化应激与PeroxiredoxinⅡ

目的:研究子痫前期胎盘组织氧化应激情况及PeroxiredoxinⅡ的表达,探讨PeroxiredoxinⅡ在子痫前期氧化应激机制中的作用。方法:用蛋白免疫印迹法检测15例子痫前期患者及15例正常妊娠者胎盘组织中PeroxiredoxinⅡ表达,测定相应组织中SOD活力及MDA、H2O2含量。结果:子痫前期患者胎盘组织中,PeroxiredoxinⅡ的表达明显低于正常妊娠组(P<0.05)。子痫前期组氧化应激指标SOD活力为89.74±18.26U/mg-prot,明显低于正常妊娠组105.23±21.88U/mgprot(P<0.01);MDA含量96.69±32.88nmol/mgprot,明显高于对照组63.29±13.74nmol/mgprot(P<0.05);H2O2含量为81.65±17.93nmol/mgprot,显著高于对照组的68.58±13.55nmol/mgprot(P<0.01)。H2O2含量与PeroxiredoxinⅡ表达量呈负相关。结论:PeroxiredoxinⅡ与子痫前期发生发展中的氧化应激机制存在密切关系。

Peroxiredoxin Ⅱ基因敲除对高脂膳食下小鼠脂肪蓄积的影响

利用高脂饲料诱导小鼠肥胖模型和苏木精—伊红染色法(H&E染色)检测PeroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)基因敲除对小鼠体重、内脏脂肪、肝脏和皮下脂肪的影响。结果表明,高脂饲料饲养9周后,高脂饲料饲养组PrxⅡ基因敲除对小鼠(HFD-PrxⅡ-/-)体重、腹膜后脂肪重量、肾脏周围脂肪重量和附睾脂肪垫重量与高脂饲料饲养组野生型小鼠(HFD-PrxⅡ^(+/+))相比均无统计学意义,HFD-PrxⅡ-/-小鼠的肝脏重量与HFD-PrxⅡ^(+/+)小鼠相比显著增加(P<0.01),H&E染色观察发现,HFD-PrxⅡ-/-小鼠肝脏脂肪空泡明显多于HFD-PrxⅡ^(+/+)小鼠。高脂饲料饲养9周后,H&E染色观察小鼠皮下脂肪厚度,HFD-PrxⅡ-/-小鼠皮下脂肪厚度与HFD-PrxⅡ^(+/+)小鼠相比显著增厚(P<0.001)。研究证明,PrxⅡ基因敲除小鼠经高脂饲料喂养后能显著增加脂肪在肝脏和皮下的蓄积,为进一步探究PrxⅡ抑制脂肪形成和异常蓄积提供了基础研究数据。

氧化应激时Peroxiredoxin Ⅱ膜质转移对红细胞渗透脆性的影响

为了探讨氧化应激时peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)膜质转移对红细胞渗透脆性的影响,检测了H_2O_2处理后红细胞渗透脆性的变化,并利用蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测了红细胞内PrxⅡ膜质转移情况,以及红细胞膜蛋白——带3蛋白(band 3)和血影蛋白(spectrin)的变化情况。研究结果显示,氧化应激时红细胞渗透脆性增加,红细胞内PrxⅡ从细胞膜转移至细胞质中,同时维持红细胞膜稳定、细胞骨架结构功能完整的相关蛋白质——band 3和spectrin在红细胞膜上表达量减少。实验结果证明氧化应激时红细胞内PrxⅡ发生膜质转移,引起维持红细胞膜稳定、细胞骨架结构功能完整的相关蛋白质band 3和spectrin表达量降低,导致红细胞渗透脆性增加。

不同浓度过氧化氢对Peroxiredoxin Ⅱ与血红蛋白结合的影响

为探究不同浓度的过氧化氢对抗氧化蛋白(Peroxiredoxin Ⅱ)与血红蛋白结合的影响,利用蛋白质体外结合实验,将带有GST标签的鼠重组Prx Ⅱ蛋白和鼠血红蛋白进行结合,以及利用蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白,检验在不同浓度的过氧化氢存在时,Peroxiredoxin Ⅱ(Prx Ⅱ)与血红蛋白的结合情况。结果表明,随着过氧化氢浓度的增加,Prx Ⅱ与血红蛋白的结合程度受到抑制,同时发现血红蛋白只与Prx Ⅱ的二聚体形式结合。为过氧化氢存在时Prx Ⅱ保护血红蛋白提供了基础理论。

M16添加硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ无法克服昆明小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞

目的观察硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ,PrxII)是否可以克服昆明(Kunming)小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞。方法取昆明小鼠1-细胞胚置于含PrxII蛋白的M16培养液中培养,观察PrxII对昆明小鼠早胚发育潜能和2-细胞胚内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;同时比较昆明和B6C3F1小鼠1-细胞胚在M16中各自的发育情况;激光扫描共聚焦显微镜分别检测比较昆明与B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平以及昆明小鼠体外培养与体内发育2-细胞胚内ROS水平。结果M16培养液中添加PrxII蛋白(1nmol/L和100nMol/L)可以明显降低昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P<0.05),但不能克服昆明小鼠体外发育2-细胞阻滞;昆明小鼠1-细胞胚在M16中培养存在2-细胞阻滞现象,而B6C3F1小鼠无2-细胞阻滞现象;昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平显著低于体内发育2-细胞胚(P<0.05),亦略低于B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P>0.05)。结论M16培养液中添加PrxII可以明显降低2-细胞胚内ROS水平,但并不能克服2-细胞阻滞。与昆明小鼠体内发育2-细胞和B6C3F1体外发育2-细胞胚相比,体外培养昆明小鼠2-细胞胚内ROS水平并不升高,这些结果提示昆明小鼠体外培养出现2-细胞阻滞的原因并非是胚内ROS水平升高引起。

PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MII卵和植入前胚的表达和定位

目的 观察PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位 ,为探讨PeroxiredoxinII在小鼠卵母细胞发育成熟和早期胚发育的作用提供依据。 方法 根据小鼠PeroxiredoxinIImRNA序列 (AccessionNo :BC0 0 2 0 34)设计引物 ,对小鼠生发泡完整卵细胞 (GV卵 )中的PeroxiredoxinII可能编码区进行扩增。同时 ,取生后 3d和 2月小鼠的卵巢 ,免疫细胞化学染色显示PeroxiredoxinII蛋白在卵泡中的分布。此外 ,运用RT PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinII在植入前胚的表达。 结果 从GV卵中扩增所得 6 84bp的cDNA序列 ,与小鼠PeroxiredoxinII具有 99%同源性 ;其推导的编码氨基酸序列与小鼠PeroxiredoxinII氨基酸序列完全相同。免疫细胞化学染色显示 :生后 3d小鼠卵巢内未见PeroxiredoxinII阳性反应 ;2月小鼠卵巢内阳性反应见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质。卵泡细胞未见PeroxiredoxinII阳性反应。RT PCR结果表明 :PeroxiredoxinIImRNA在GV卵中处高水平 ,从MII卵开始略有下降 ,在 4 细胞胚和早期囊胚期间未检到。免疫细胞化学染色显示 :GV卵、MII卵、1 细胞胚、2 细胞胚、4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈PeroxiredoxinII阳性反应。

PRXⅡ蛋白及mRNA在小鼠卵巢不同发育阶段的表达

目的:探讨PRXⅡ在小鼠卵泡发育不同阶段的表达。方法:选择不同发育时期的昆明小鼠卵巢,用免疫组化SP染色法,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同发育期卵巢组织中PRXⅡ蛋白、mRNA的表达水平。结果:PRXⅡ蛋白在各级卵泡的卵母细胞及颗粒细胞中均有表达,其表达水平随卵泡发育逐渐增强。始基卵泡与初级、次级、窦状卵泡相比,其卵母细胞及颗粒细胞中PRXⅡ蛋白表达水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.005)。初级卵泡分别与次级、窦状卵泡相比其颗粒细胞中PRXⅡ蛋白表达水平较低,有显著差异(P<0.005)。闭锁卵泡PRXⅡ蛋白呈强阳性表达,明显高于生长卵泡中的表达水平。黄体及间质中亦见少量PRXⅡ表达。PRXⅡmRNA在卵巢组织中的表达水平随卵巢的生长发育呈先增高后降低的趋势。3、6、11周小鼠卵巢中PRXⅡmR-NA表达水平无统计学差异(P>0.05),但其表达水平是8天及15周小鼠卵巢组织的两倍。结论:卵泡发育不同阶段PRXⅡ均有表达,在卵泡发育后期和闭锁卵泡中强表达,提示PRXⅡ在卵泡的生长发育及闭锁过程中可能起重要的调控作用。

Prx Ⅱ缺失的真皮间充质干细胞提前衰老加速皮肤老化进程研究

通过比较野生型和Prx Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ)基因敲除型小鼠皮肤老化情况,阐明皮肤老化过程中Prx Ⅱ对真皮间充质干细胞的保护作用。体内试验采用病理组织切片,蛋白免疫印迹等方法检测两种129/SvJ小鼠皮肤组织及生理功能的差异;体外试验采用SA-β-gal染色对比两种真皮间充质干细胞衰老情况。结果表明同月龄的PrxⅡ基因敲除型小鼠与野生型小鼠相比真皮厚度层变薄,伤口愈合速度减慢,皮肤组织中P16、p21表达水平增加,PCNA表达水平降低;同代数的PrxⅡ基因敲除型的真皮间充质干细胞与野生型相比衰老细胞数量明显增多。综合分析,Prx Ⅱ基因敲除小鼠皮肤细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子表达上升,皮肤发生提前老化,与真皮间充质干细胞的细胞衰老存在相关性,为通过Prx Ⅱ延缓皮肤老化,减少因皮肤老化而引发的多种疾病提供基础理论。

Peroxiredoxin II mRNA在小鼠卵泡发育中定位的研究

目的 观察PeroxiredoxinIImRNA在小鼠卵巢各级卵泡和MII卵中的分布 ,为了解PeroxiredoxinII在卵母细胞发育及成熟过程中的功能意义提供形态学依据。 方法 原位杂交方法。 结果 在小鼠卵巢内 ,原始卵泡的初级卵母细胞未检到PeroxiredoxinIImRNA的杂交信号 ,初级卵泡的初级卵母细胞可检到杂交信号 ,次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的信号明显增强。离开卵巢的GV卵也能检到较强的杂交信号 ,排到输卵管的次级卵母细胞 (MII卵 )杂交信号与GV卵相比明显减弱。从原始卵泡到近成熟卵泡周围的卵泡细胞均可检到杂交信号 ,其信号强度在卵泡发育成熟过程中未见有明显变化。卵母细胞和卵泡细胞的PeroxiredoxinIImRNA杂交信号均分布在胞质。 结论 提示PeroxiredoxinII可能参与了卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节。

硫氧环蛋白过氧化物酶3对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的影响

目的观察硫氧环蛋白过氧化物酶3(Prdx-3)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养心肌细胞(H9C2)随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+转染对照组和AngⅡ+Prdx-3转染组。脂质体转染法将Prdx-3表达质粒转染心肌细胞,Western blot法检测Prdx-3蛋白表达,Real-time PCR法检测脑钠素(BNP)m RNA表达,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prdx-3表达质粒转染心肌细胞后,Prdx-3蛋白表达值为(0.88±0.12),高于转染对照组(0.38±0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组BNP m RNA[(1.00±0.00)比(1.72±0.29)]、ROS[(3473±81)比(4439±111)]及Prdx-3蛋白表达水平[(0.33±0.05)比(0.72±0.14)]均明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AngⅡ+转染对照组和AngⅡ组的BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.94±0.34)]、ROS[(4439±111)比(4285±167)]及Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(0.75±0.11)]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+Prdx-3转染组BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.29±0.15)]和ROS水平[(4439±111)比(3648±254)]明显下降,但Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(1.89±0.37)]显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 AngⅡ可通过ROS诱导心肌细胞肥大,而Prdx-3通过降低ROS抑制AngⅡ的作用。

硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ诱饵质粒的构建和检测

目的构建硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)诱饵质粒,同时检测其在酵母菌内的表达和对酵母细胞的毒性。方法提取人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞的RNA,利用RT-PCR获得其cDNA,PCR方法扩增PrxⅡ基因片段,纯化后以内切酶双酶切PrxⅡ和酵母表达载体pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为pGBKT7-PrxⅡ,将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用。结果构建的诱饵载体pGBKT7-PrxⅡ测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确。将pGBKT7-PrxⅡ成功转化入酵母感受态AH109,并证明PrxⅡ蛋白对酵母无毒性作用。结论证实了PrxⅡ蛋白无酵母毒性,诱饵质粒pGBKT7-PrxⅡ可以用于酵母双杂交研究前列腺癌发病机制。

硫氧环蛋白过氧化物酶3在血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大中的表达

目的观察硫氧环蛋白过氧化物酶3(Prdx-3)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的表达。方法体外培养心肌细胞(H9C2)随机分为对照组和AngⅡ组(AngⅡ1×10^(-6)mol/L处理)。Real time PCR法检测脑钠素(BNP)mRNA表达,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,Western blot法检测Prdx-3蛋白表达。结果①与对照组比较,AngⅡ刺激6、12、24、48 h的BNP mRNA分别增长(1.10±0.08)、(1.30±0.18)、(1.80±0.25)、(2.00±0.37)倍,除刺激6 h外,其他时间点的差异均有统计学意义(P<0.05)。②AngⅡ刺激5、10、20、40 min和1 h ROS水平分别是(3740±75)、(3911±91)、(4330±143)、(4073±335),(3879±226),与对照组(3426±197)比较,刺激5、10、20 min时差异有统计学意义(P<0.05)。③AngⅡ刺激30 min、1 h、3 h和6 h时Prx-3蛋白的表达值分别为(0.72±0.11)、(0.50±0.07)、(0.42±0.08)和(0.35±0.08),与对照组(0.33±0.05)比较,AngⅡ刺激30 min和1 h时差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在AngⅡ诱导心肌细胞肥大过程中伴随着Prdx-3表达的上调,推测Prdx-3表达与降低ROS有关。

过氧化物还原酶Ⅱ在热损伤诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用

探究过氧化物还原酶Ⅱ(PeroxiredoxinⅡ,PrxⅡ)在热损伤诱导皮肤角质细胞HaCaT细胞凋亡中的调控作用。利用慢病毒转染技术构建Prx Ⅱ基因敲降细胞系,采用MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜照相技术检测细胞凋亡情况及活性氧水平,蛋白质免疫印迹法检测蛋白质表达水平,并对比分析基因敲降细胞和正常细胞的各项指标差异。结果显示,热损伤处理的PrxⅡ基因敲降细胞的凋亡率及活性氧水平均明显高于热损伤处理的正常细胞,凋亡相关蛋白质表达水平均有显著性差异。证明PrxⅡ可利用清除活性氧的功能来调节Bcl-2的表达、caspase-3的活化从而有效缓解热损伤HaCaT细胞的凋亡。

过氧化物还原酶Ⅱ在胃癌中的表达及临床病理意义

背景与目的:过氧化物还原酶Ⅱ(peroxiredoxinⅡ,PrxⅡ)是具有过氧化物酶活性的蛋白,相关研究提示其参与多种恶性肿瘤的发生、发展。该实验通过研究人类胃癌组织及细胞中的PrxⅡ的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征的关系,探讨其与胃癌发生、发展及预后的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测45例胃癌患者的癌组织及相应的癌旁组织、胃正常细胞(GES-1)及胃腺癌细胞(MGC-803、MKN-45和MKN-28)的PrxⅡm RNA及蛋白表达情况。应用免疫组织化学S-P法检测胃癌组织芯片中116例胃癌患者癌组织及癌旁组织的PrxⅡ的表达量,分析PrxⅡ表达与胃癌临床病理特征的关系并做生存分析。结果:RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示,胃癌组织中PrxⅡm RNA及蛋白表达水平明显高于相应的癌旁组织(P<0.05)。胃癌细胞中PrxⅡm RNA及蛋白表达水平明显高于胃正常细胞(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,胃癌组织中PrxⅡ蛋白的表达阳性率(76.7%)同样明显高于相应癌旁组织(30.1%,P<0.01)。PrxⅡ蛋白表达与胃癌的肿瘤大小、分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤部位及远处转移无关(P>0.05)。PrxⅡ蛋白高表达者的生存时间要显著低于低表达者(P<0.01),PrxⅡ是影响胃癌预后的独立危险因素。结论:PrxⅡ促进胃癌的发生、发展,是胃癌的不良预后因素,其研究可能为胃癌的治疗提供新的靶点。

抗氧化蛋白PrxⅡ对心肌收缩力的调控及其机制研究

目的过氧化氢过氧化物酶（peroxiredoxinⅡ，PrxⅡ）主要位于细胞的胞浆，可将体内多余的过氧化氢还原为水，PrxII属于过氧化氢过氧化物酶超家族成员之一，其余成员还有PrxI、Ⅲ、Ⅳ、V和Ⅵ，我们前期的研究发现：PrxⅡ可以保护氧化应急诱导的心肌细胞损伤，而且我们还发现PrxⅡ在心力衰竭的病人心脏中表达量降低，但是在两个心肌收缩力增强的转基因动物模型中，包括：phospholamban（PLN）基因敲除和蛋白磷酸化酶I抑制剂I过表达的小鼠心脏中表达量明显升高，但是到目前为止还不清楚PrxlI这一抗氧化蛋白是否可调控心肌收缩。方法构建正义和反义的PrxⅡ腺病毒，并转染入成年大鼠的心肌细胞，以诱导PrxII的瞬时过表达或表达下调，同时检测了心肌细胞收缩功能的变化。结果腺病毒中介的PrxU在心肌细胞的过表达或表达下降伴随明显的心肌细胞收缩功能的下降或升高，同时心肌细胞的钙瞬变和肌浆网的钙含量也发生了类似的与收缩功能相一致的改变。另一方面，我们还发现：B-肾上腺素能激动剂异丙肾上腺素可以完全反转PrxⅡ过表达对心肌收缩的抑制作用。我们进一步的研究证实：PrxⅡ对心肌细胞收缩功能的调控作用可能与phospholambanl6位丝氨酸和17位苏氨酸的磷酸化的改变相关。结论抗氧化蛋白PrxⅡ可能是心肌收缩功能的一个新的调控因子，其对心肌细胞收缩功能的调控作用与调控phospholamban的磷酸化相关。

PeroxiredoxinⅡ基因在Hep3B细胞中的生物学功能和作用机制

目的探讨peroxiredoxinⅡ（PrxⅡ）基因在肝癌发生发展中的作用及其机制。方法化学合成两对针对PrxⅡ基因的小干扰RNA，即PrxⅡ1和PrxⅡ2，分别用脂质体Lipofectamine^TM2000介导转入人肝癌细胞系Hep3B。通过实时荧光定量PCR和Western blot检测确定PrxⅡ在转染细胞中mRNA和蛋白表达水平受到明显抑制后，对PrxⅡ基因沉默的Hep3B细胞分别进行细胞生长、细胞凋亡、细胞集落形成等检测，观察PrxⅡ对Hep3B细胞生物学功能的影响；通过二氯荧光素双乙酸和硫代巴比妥酸试验，检测细胞内过氧化代谢产物活性氧类和丙二醛的水平，探讨PrxⅡ的作用机制。结果与阴性对照组和空白对照组相比，PrxⅡ基因沉默的Hep3B细胞生长受到抑制，生长抑制率在转染96h后达40％以上；细胞凋亡增加；细胞形成集落的能力降低，PrxⅡ-1组和PrxⅡ-2组的细胞集落形成数分别为42.0±2．8和40．5±0．7，明显低于阴性对照组和空白对照组的121．5±2．1和130．0±1．4（P〈0．05）。PrxⅡ基因沉默的Hep3B细胞内活性氧和丙二醛水平明显增加（P〈0．05）。结论PrxⅡ具有促进Hep3B细胞生长的生物学功能，其机制可能与通过抗氧化作用形成有利于肿瘤细胞生长的微环境有关。