Peroxiredoxin 2基因RNAi慢病毒载体构建及对SW480细胞增殖的影响

目的构建Peroxiredoxin2(PRDX2)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,探讨PRDX2基因干扰后对结直肠癌SW480细胞增殖的影响。方法设计、合成靶向PRDX2的RNA干扰的序列,构建pGC-EGFP-shPRDX2慢病毒载体并进行鉴定,同时应用qRT-PCR和Western blot方法观察转染的SW480结肠癌细胞PRDX2 mRNA和蛋白表达的抑制效果,并通过MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖变化。结果成功构建PRDX2基因慢病毒载体并经测序证实;pGCEGFP-shPRDX2可有效抑制结直肠癌SW480细胞PRDX2的表达,感染慢病毒的SW480细胞中PRDX2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);SW480细胞经PRDX2 RNA干扰后其生长和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论 PRDX2基因RNAi慢病毒表达载体在SW480细胞中表达稳定可靠,PRDX2基因干扰后有效抑制了结直肠癌SW480细胞的增殖和生长,为进一步探讨PRDX2在结直肠癌发生、发展及转移中的作用奠定基础。

线粒体内抗肿瘤靶点研究进展

总结了肿瘤细胞的特点,包括瓦尔格效应和更高的细胞膜电势和线粒体膜电势,线粒体有关的抗肿瘤靶点及针对一些靶点目前药物,对于提高肿瘤治疗有效性和选择性以及克服癌细胞对传统化疗药的耐药性具有重要的意义。

硫氧还蛋白过氧化物酶2在人结直肠癌的表达及其对HCT116细胞增殖、迁移的作用

目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2（PRDX2）蛋白在结直肠癌、腺瘤及正常黏膜组织中的差异性表达及其与结直肠癌的生物学关系；利用RNA干扰（RNAi）技术，特异性沉默PRDX2基因的表达，观察沉默PRDX2对结直肠癌细胞HCTJ16增殖与迁移的影响并探讨其机制。方法采用Westernblot、免疫组织化学检测并分析PRDX2蛋白的表达与结直肠癌发生及预后的关系。构建稳定沉默PRDX2细胞株，设立阴性对照组（shContr01）和沉默PRDX2实验组（shPRDX2-F3），通过细胞计数试剂盒（CCK-8）、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell小室检测体外迁移能力，WesternNot检测E-钙黏蛋白（E—cadherin）、N．钙黏蛋白（N—cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Snail、Slug蛋白表达。结果PRDX2蛋白在结直肠癌、腺瘤和正常黏膜组织中的表达阳性率依次减低（P〈0．01）。其表达与结直肠癌的TNM分期（P〈0．01）、肿瘤分化程度（P〈0．01）有关，PRDX2蛋白阳性表达者生存率（71．90％）明显低于阴性表达者（86．28％，P〈0．05）。沉默PRDX2基因后能抑制HCTI16细胞的增殖生长；PRDX2沉默后HCT116细胞克隆数量[（69．53±5．20）个]少于空载对照组[（98．33±10．69）个，P〈0．05]；沉默PRDX2的细胞迁移能力增强，且E—cadherin蛋白表达下降，N—cadherin、Vimentiu、Snail、S1ug蛋白表达增强。结论PRDX2蛋白表达参与结直肠癌的发生、发展，并与结直肠癌的预后有关。沉默PRDX2可抑制结直肠癌细胞HCT116增殖，促进迁移，其机制可能与转录因子Snail、Slug表达有关。

TXNDC5-Prx2途径对前列腺癌细胞耐药性的调控

目的研究硫氧还原蛋白5(TXNDC5)-过氧化物还原酶2(Prx2)对前列腺癌细胞耐药性的影响。方法体外培养前列腺癌PC3细胞,采用化疗药物环磷酰胺(5、10、15μmol/L)干预24 h,另设空白对照组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测PC3细胞中TXNDC5的表达水平。在PC3细胞中给予不同浓度环磷酰胺处理的同时沉默TXNDC5,CCK-8法检测siTXNDC5组和siNC组细胞增殖活力,活性氧检测试剂盒测定活性氧自由基含量。在PC3细胞株及其环磷酰胺耐药细胞株中给予10μmol/L环磷酰胺处理并同时沉默TXNDC5表达,检测细胞增殖活力。蛋白质印迹法检测在PC3细胞中沉默TXNDC5对Prx2蛋白表达的影响。在过表达TXNDC5的PC3细胞中沉默Prx2表达,检测Vec-Ctrl组、pcTXNDC5组、siNC组、siPrx2组、pcTXNDC5+siPrx2组的细胞增殖活力和活性氧自由基含量。结果与空白对照组相比,环磷酰胺处理可显著提高前列腺癌PC3细胞中TXNDC5 mRNA和蛋白的表达量。10、15μmol/L环磷酰胺处理PC3细胞12 h后,与siNC组相比,siTXNDC5组细胞增殖活力明显受抑(0.44±0.08vs.0.74±0.10,t=3.647,P=0.031;0.30±0.04vs.0.53±0.06,t=6.115,P=0.006)。10μmol/L环磷酰胺处理PC3细胞6、12 h,与siNC组相比,siTXNDC5组细胞内活性氧自由基的生成量显著增加(2.68±0.19vs.1.58±0.26,t=-6.027,P=0.005;4.56±0.37vs.2.73±0.26,t=-6.995,P=0.003)。采用10μmol/L环磷酰胺处理PC3及其耐药细胞株12 h,与siNC组相比,siTXNDC5组细胞增殖活力均明显受抑。蛋白质印迹法结果表明沉默TXNDC5可显著抑制Prx2的表达。沉默Prx2表达可显著抑制因TXNDC5过表达导致的细胞增殖活力升高和活性氧自由基含量降低的趋势。10μmol/L环磷酰胺处理PC3细胞12 h,Vec-Ctrl组、pcTXNDC5组、siNC组、siPrx2组和pcTXNDC5+siPrx2组细胞增殖活力分别为0.52±0.07、0.69±0.03、0.56±0.05、0.43±0.05、0.58±0.07,差异有统计学意义(F=8.868,P=0.003),pcTXNDC5+siPrx2组细胞增殖活性低于pcTXNDC5组(P=0.045);上述5组细胞活性氧自由基含量分别为3.26±0.46、2.09±0.49、3.16±0.38、4.62±0.26、2.87±0.36,差异有统计学意义(F=16.037,P<0.001),pcTXNDC5+siPrx2组活性氧自由基含量高于pcTXNDC5组(P=0.036)。结论TXNDC5可通过调控Prx2的表达,降低前列腺癌细胞中活性氧自由基的水平,从而增强前列腺癌细胞对化疗药物的耐药性。