柿叶提取物对HEK293-APPswe转基因细胞模型的抗氧化作用及对Nrf2/HO-1途径的影响

目的:观察柿叶提取物(PLE)对阿尔茨海默病细胞模型HEK293-APPswe(20E2)的抗氧化应激的影响,并从核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路研究其作用机制。方法:Western blot检测APP蛋白表达水平,ELISA检测各组细胞上清Aβ_(1-40)的量,确定细胞模型是否建立成功。用CCK-8检测不同浓度的柿叶提取物对细胞活性的影响,选定干预最佳浓度。设分组:SH-SY5Y为空白对照组(NC组),20E2为模型组(20E2组),用柿叶提取物干预为加药组(20E2+PLE组)。DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内ROS的变化,ELISA检测各组细胞上清Aβ_(1-42)的量,Western blot检测胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白的表达水平变化。结果:与模型组相比,加药组ROS表达减少,细胞外Aβ_(1-42)浓度降低,细胞核内Nrf2表达增多,HO-1蛋白含量增加。结论:柿叶提取物能有效降低模型组氧化应激的水平,可能是通过降低Aβ_(1-42)的聚集,激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达来减弱氧化应激的损伤。氧化应激的影响,并从测APP蛋白表达水平,提取物对细胞活性的影提取物干预为加药组量,Western blot检测胞外Aβ_(1-42)浓度降低,细胞是通过降低Aβ_(1-42)的聚氧化应激的损伤。

柿叶单宁提取技术研究

对恭城月柿绿叶和落叶中的单宁含量进行了测定,对柿子叶单宁的甲醇提取工艺进行了研究。结果表明,恭城月柿绿叶中的单宁含量高于落叶中的单宁含量;柿子绿叶单宁的甲醇最佳提取工艺为:以含盐酸1.2%的无水甲醇为提取溶剂,提取时间40min,提取温度70℃,料液比1:12,提取次数2次,柿子绿叶单宁的提取量可达14.89mg/g。

脑心清片化学成分、药理作用与临床应用研究进展

脑心清片是以柿叶为原料经水提、醇沉、乙酸乙酯精制而成的柿叶提取物制剂。自2000年临床应用以来,脑心清片被广泛用于冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的治疗。随着现代科学技术的快速发展,脑心清片的研究也取得了一定的进展。本文从化学成分、药理作用和临床应用三方面展开,对柿叶提取物及其制剂脑心清片的研究进展进行综述。

柿叶提取物对高血糖小鼠降血糖作用及其机制探讨

[目的]探讨柿叶提取物对四氧嘧啶(alloxan,ALX)诱导高血糖小鼠的降血糖作用及其可能机制。[方法]采用水提醇沉工艺制备柿叶提取物;小鼠尾静脉注射ALX建立高血糖小鼠模型,通过测定小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)值和血清果糖胺(fructosamine,FRU)值,评价柿叶提取物的降血糖效果;从糖消化吸收、肝糖原合成、肌肉己糖激酶(hexokinase,HK)活性、血清TC及TG含量、肝脏SOD活性和MDA含量及胰岛组织形态等方面,初步探讨柿叶提取物降血糖作用机制。[结果]与模型组比较,柿叶提取物高、低剂量均能显著降低小鼠FBG值,但对FRU无明显影响;柿叶提取物高剂量组能增加肝糖原的合成、提高肌肉HK的活性、降低血清TC、TG、肝组织MDA的含量及增加肝组织SOD的活性;但对胰腺损伤无明显修复作用。[结论]柿叶提取物可降低高血糖小鼠空腹血糖值,其作用可能与增加肝糖原的合成、提高肌肉HK的活性、降低血清TC、TG、肝组织MDA的含量及增加肝组织SOD的活性等有关。

柿叶提取物在缺血性脑血管疾病二级预防中的疗效观察

目的探讨柿叶提取物干预治疗对缺血性脑血管病患者二级预防的临床疗效,以及对缺血性脑血管病患者在血压、血糖、血脂、血液流变学、血流速度、血同型半胱氨酸等指标水平的影响。方法选取2013年1月~2013年12月在武汉市东湖医院就诊的缺血性脑血管病患者200例,随机分为对照组与观察组各100例,对照组予以神经内科常规治疗,观察组在对照组基础上给予柿叶提取物干预治疗,记录比较2组治疗前、治疗3、6个月后缺血性脑血管病的复发率及血压、血糖、血脂、血液流变学、血流速度、血同型半胱氨酸等指标水平。结果治疗3月末,观察组复发率4.40%,对照组复发率3.70%;治疗6月末,观察组复发率8.24%,对照组复发率13.75%,但2组比较差异均无统计学意义。2组治疗6月末收缩压、舒张压比治疗前下降,且观察组下降较对照组显著（均P〈0.05）。2组治疗3、6月末与治疗前比较,血清TC、TG、LDLC水平下降,HDLC水平升高;观察组治疗6月末上述指标变化较3月末显著;治疗6月末观察组上述指标较对照组变化显著（均P〈0.05）。2组治疗3、6月末FBG、2hPG以及HbA1C较治疗前下降显著;2组治疗6月末上述指标降低水平较3月末显著;观察组3、6月末上述指标下降较对照组同时点显著（均P〈0.05）。2组治疗3、6月末血清HCY水平较治疗前下降显著;观察组治疗3、6月末血清HCY水平较对照组同时点下降显著（均P〈0.05）。2组治疗6月末血液流变学各指标较治疗前改善显著;治疗6月末观察组血液流变学各指标较对照组改善显著（均P〈0.05）。2组治疗6月末脑部主要动脉血流速度均较治疗前显著升高;治疗6月末观察组与对照组脑部主要动脉血流速度变化升高较对照组显著（均P〈0.05）。结论柿叶提取物具有改善血压、血糖、血脂、血液流变性、血流动力学及抑制血小板聚集和血栓形成的作用。

响应面法优化柿叶总黄酮的超声波辅助提取条件

利用响应面法(Response surface methodology,RSM)优化柿叶总黄酮的超声波辅助提取条件。以提取温度、乙醇体积分数、液固比、提取时间为试验因子,以柿叶提取物中总黄酮含量为响应值,采用Box-Behnken试验设计进行试验。结果表明,提取温度对总黄酮含量影响最大,其次为液固比、乙醇体积分数和提取时间。柿叶总黄酮的最佳超声波辅助提取条件为:温度53℃、乙醇体积分数69%、液固比21∶1、提取时间32min。在此条件下,柿叶提取物总黄酮含量的预测值为35.05mg/g,验证试验所得总黄酮的含量为35.36mg/g。回归方程的预测值和试验值差异不显著,所得回归模型拟合情况良好,达到设计要求。因此,超声波辅助提取法能提高提取效率、缩短提取时间和保护有效成分,具有一定的实际应用价值。

超声波辅助提取柿子树叶单宁的研究

以70%的丙酮溶液为提取溶剂,采用超声波辅助提取野柿叶中的单宁,考察了超声波的功率、提取温度、提取时间等因素对单宁提取量的影响。采用响应面法对提取条件进行优化,并建立了二次回归模型。实验结果显示:当提取温度为52℃、超声波功率为80 W、提取时间为42 min,在此条件下单宁的提取量为203.15 mg/g,比无超声波辅助提取提高了38.87 mg/g。

柿叶提取物通过MAPK/ERK1/2通路减轻心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨柿叶提取物(PEL)减轻心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法 健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组(MIRI组)、柿叶提取物组(PEL组)、MAPK抑制剂组、MAPK抑制剂+PEL组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30min后再灌注60min建立心肌缺血再灌注模型。PEL组大鼠灌胃50mg/(kg·d)柿叶提取物,MAPK抑制剂组大鼠尾静脉注射PD0325901;MAPK抑制剂+PEL组大鼠灌胃50mg/(kg·d)柿叶提取物前30min尾静脉注射PD0325901。假手术组和MIRI组灌胃等量生理盐水。每天相同时间给药1次,连续给药21d。全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)水平,试剂盒检测心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,采用1%氯化三苯基四氯唑测定心肌梗死面积,WesternBlot检测心肌组织中Bcl-2、Bax和p-ERK1/2蛋白表达。结果 与假手术组比,MIRI组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积,心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著升高(P<0.05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与MIRI组比,PEL组和MAPK抑制剂+PEL组大鼠血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P<0.05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达均显著升高(P<0.05);MAPK抑制剂组无显著差异(P>0.05)。与MAPK抑制剂组比,MAPK抑制剂+PEL组血清AST和CK含量、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、心肌组织MDA和LDH含量、Bax蛋白表达均显著降低(P<0.05),心肌组织SOD和GSH-Px活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 PEL可能通过激活MAPK/ERK1/2信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。

柿叶提取物对马铃薯多酚氧化酶的抑制作用

多酚氧化酶(PPO)是生物体内黑色素合成的关键酶。研究了甜柿叶乙醇提取物、涩柿叶乙醇提取物、甜柿叶水提取物、涩柿叶水提取物对马铃薯多酚氧化酶活性的抑制作用。结果表明,上述4种柿叶提取物对马铃薯多酚氧化酶具有明显的抑制作用,使该酶活力下降50%所需的浓度(IC50)分别为0.21、0.26、0.37、0.45 mg/mL。乙醇提取物较水提取物的作用效果更强,甜柿叶提取物的抑制作用比涩柿叶提取物的强,4种柿叶提取物对酶的抑制作用均为非竞争性可逆抑制,其抑制常数(KI=KIS)分别为0.18、0.23、0.34、0.45 mg/mL。

响应面分析法优化超高压提取柿叶单宁的研究

在单因素实验的基础上,采用响应面分析法对柿叶单宁超高压提取工艺进行优化。以总单宁得率为指标,考察固液比、提取溶剂浓度、压力值、保压时间对得率的影响。获得最佳提取理论条件为:固液比为1:25(g:mL),溶液浓度为56.31%,压力值为222.33MPa,保压时间为3min,总单宁得率为96.19%。与溶剂提取法相比,本方法耗时短,效率高。

不同方法提取柿叶总黄酮含量的比较

目的比较不同方法提取的柿叶总黄酮含量。方法分别采用水提取法、传统乙醇提取法、微波提取法、超临界CO2萃取法提取柿叶总黄酮,并用紫外分光光度计在510 nm处测定总黄酮的含量。结果水提取法测得总黄酮含量为0.721%,传统乙醇提取法测得总黄酮0.948%,微波辅助提取法测得总黄酮含量0.908%,超临界CO2萃取法测得总黄酮含量0.961%。结论超临界CO2萃取法提取总黄酮含量最高,传统乙醇提取法提取总黄酮含量次之,微波辅助提取法再次之,水提取法提取总黄酮含量最低。

柿叶提取物和银杏叶提取物治疗椎-基底动脉供血不足的临床疗效对比

目的观察比较柿叶提取物和银杏叶提取物在治疗椎-基底动脉供血不足所引起的头晕、目眩等临床症状方面的疗效。方法 60例患者,在尼莫地平、阿司匹林等治疗的基础之上,分别加入柿叶提取物和银杏叶提取物进行治疗干预。其中,柿叶提取物组和银杏叶提取物组各30例,两组均治疗30d,分别观察头晕、目眩等症状及血液流变学指标的变化。结果柿叶提取物组有效率88.3%,银杏叶提取物有效率73.1%,差异有统计学意义(P<0.05);柿叶提取物组全血粘稠度、血浆粘度、纤维蛋白原、红细胞压积、血小板粘附率等指标较银杏叶提取物组改善明显,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论柿叶提取物组较银杏叶提取物组能更有效地改善脑血液循环,扩张脑血管,降低血液高凝状态,改善椎-基底动脉供血不足所引起的头晕、目眩等临床症状。

柿叶中总黄酮的超声提取工艺研究

目的:考察超声法提取柿叶中总黄酮的最佳工艺。方法:通过单因素试验,考察不同乙醇浓度、溶剂用量、超声时间及超声温度对柿叶中总黄酮得率的影响,在此基础上采用超声提取法,以正交试验优选出柿叶总黄酮的最佳提取工艺。结果:各因素对柿叶总黄酮得率的影响顺序为:乙醇浓度>超声温度>超声时间>溶剂用量。柿叶总黄酮最佳提取工艺为:以40倍量的40%乙醇为溶剂,在60℃下超声50 min,柿叶总黄酮得率为6.36%。结论:超声法提取柿叶总黄酮操作简单,稳定可行。

柿叶精油的提取工艺研究

以柿叶为原料,用石油醚提取精油。结果表明,最佳提取工艺条件是:提取温度50℃,提取时间2 h,料液比1:12(g/mL),提取率可达3.80%,RSD为0.430%。

柿叶醋酸乙酯提取物对脂多糖刺激的小胶质细胞的抗炎及抗凋亡作用

目的研究柿叶醋酸乙酯提取物(EAEPL)对脂多糖(LPS)刺激的小胶质细胞(BV-2)的炎症因子及凋亡细胞的表达作用,探讨EAEPL对脑卒中的抗炎及抗细胞凋亡的作用。方法采用LPS诱导的BV-2细胞作为体外神经炎症模型,用EAEPL进行干预;采用ELISA法检测白介素6(IL-6),白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化;采用Western blot法检测IL-6、IL-1β、TNF-α、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化-细胞外信号调节激酶(p-ERK)、凋亡基因Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果 LPS刺激BV-2细胞24 h之后,IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子细胞表达及蛋白表达水平明显升高(P <0.01,P <0.001),p-AKT、p-ERK蛋白表达水平明显降低(P <0.01,P <0.001),促凋亡蛋白Bax表达水平明显升高(P <0.001),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显降低(P<0.001);EAEPL预处理后,相对于模型组,炎症因子细胞表达水平降低,IL-1β在10、20μg·mL^(-1)时差异具有统计学意义(P <0.05),IL-6、TNF-α在20μg·mL^(-1)时差异具有统计学意义(P <0.05);炎症因子蛋白表达水平均明显下降(P <0.05,P <0.01);p-AKT、p-ERK蛋白表达水平升高,p-AKT在各浓度差异均有统计学意义(P <0.05,P <0.01,P <0.001);p-ERK在10、20μg·mL^(-1)时差异具有统计学意义(P <0.01);Bax蛋白表达水平明显下降(P <0.05,P <0.01);Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05,P <0.01,P <0.001)。结论 EAEPL可调节LPS刺激的BV-2的炎症因子表达和激活AKT/ERK通路,具有抗炎和抗细胞凋亡作用,进一步阐明了EAEPL抗脑卒中的作用机制。

柿叶中黄酮类化合物提取和检测方法研究综述

柿叶中黄酮类化合物具有较高经济和实用价值。本文对柿叶黄酮类化合物提取和检测方法进行了详尽的阐述,旨在利用我国丰富的废弃柿叶资源,为开发柿叶黄酮类物质产品提供参考。

柿子叶对高血脂大鼠氧自由基及血脂代谢酶的影响

目的:观察柿子叶水提液对高血脂大鼠血脂、氧自由基及血脂代谢酶的影响。方法:60只SD大鼠,随机分成6组,正常组,模型组,血脂康组,高、中、低剂量柿子叶组,建立高血脂大鼠模型。药物干预42 d后,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、肝脂酶(HL)、脂蛋白脂酶(LPL)。测定肝脏SOD、GSH-Px、MDA、HL和心脏SOD、GSH-Px、MDA、LPL。结果:柿子叶水提液可明显降低高血脂大鼠模型大鼠血清TG、TC、LDL-C浓度(P<0.05或P<0.01),升高HDL-C浓度(P<0.05或P<0.01)。可明显提高血清、肝脏和心脏SOD、GSH-Px活性(P<0.05或P<0.01),降低血清、肝脏和心脏MDA含量(P<0.05或P<0.01)。可明显升高肝脏HL水平(P<0.05或P<0.01)。对血清和心脏LPL无明显影响。结论:柿子叶具有降血脂作用,其机制与降低体内氧自由基和提高HL水平有关。

柿叶提取物减轻大鼠心梗后心肌细胞凋亡和心室重塑相关机制研究

目的:探讨大鼠心梗模型下柿叶提取物对心室重塑的影响及相关机制。方法:用24只Sprague Dawley大鼠结扎左冠状动脉前降支制作心肌梗死大鼠模型,随机分为心肌梗死组(n=8)、柿叶提取物组(n=8)、假手术组(n=8)。6周后,用TUNEL法测定心肌细胞凋亡,免疫印迹法检测心肌Fas、Caspase-3蛋白含量,并测定大鼠血流动力学参数和左心室质量指数。结果:柿叶提取物组、心肌梗死组左心室质量指数分别为2.417±0.053、2.514±0.101(F=136.762,P=0.011),明显低于心肌梗死组;柿叶提取物组、心肌梗死组Fas分别是0.342±0.058、0.585±0.059(F=163.991,P=0.000);柿叶提取物组、心肌梗死组Caspase-3蛋白水平分别是0.124±0.019、0.478±0.079(F=183.553,P=0.000),明显低于心肌梗死组。柿叶提取物组、心肌梗死组心肌细胞凋亡指数分别是1.198±0.171、0.507±0.132(F=93.023,P=0.000),明显低于心肌梗死组。柿叶提取物组左心室舒张末期压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)明显降低(F=347.661,P=0.000),左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)明显增加(F=444.949,P=0.000)。结论:心肌细胞凋亡参与心肌梗死后心室重塑过程,柿叶提取物可能通过减少凋亡相关蛋白表达抑制心肌细胞凋亡从而预防心室重塑,改善心肌梗死后心脏收缩功能。

柿叶提取物的提取工艺研究

目的:研究柿叶黄酮提取物的工业化提取分离工艺。方法:采用三因素水平进行实验室小试筛选最近工艺条件,再通过车间中试确认工业化提取条件。结果:70%乙醇提取,容积倍量热回流4h,滤液水沉,再以2倍的乙酯萃取3次,浓缩,即得。结论:本提取方法适用于工业化生产。

柿叶主要成分及其在不同生长时期的动态变化

以元氏大红袍柿叶为原料,采用气相色谱-质谱联用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)测定乙醇提取物、火焰原子吸收法测定矿物质元素和紫外吸收法测定其不同生长时期可溶性糖、多酚、黄酮、VC及蛋白质含量,并对品质指标进行分析。结果表明:柿叶乙醇提取物主要成分是酸类、酯类和糖类,分别占23.94%、23.0%和18.32%。矿物质元素中Ca含量最高,约为91.56 mg/g。其次是K和Mg,约为23.85 mg/g和1.67 mg/g。不同生长时期成分探究表明黄酮、多酚和可溶性多糖5月达到了最高水平。VC含量7月初最高,8月中下旬蛋白质含量最高。通过对其主要成分及成分动态变化分析,为柿叶开发和利用提供理论依据。