枯斑盘多毛孢Pf-毒素活性组分的分离纯化

对枯斑盘多毛孢(Pestalotia funerea)培养滤液用70％乙醇沉淀,将其分为可溶性和不可溶(蛋白质等大分子)组分,浸渍法活性检测表明,蛋白质等大分子物质对马尾松、湿地松切根幼苗没有致病活力,非蛋白部分(Pf-毒素)则保留了病原菌培养滤液的致病活性,且与病原菌培养滤液相比活性有所增强。以最适流动相,正丁醇:甲醇:水(4:1:2)为洗脱液,采用硅胶H60型柱反复柱层析,从枯斑盘多毛孢的甲醇粗提物质中分离出9种组分,经致病活性测定出3种组分,Rf值分别为0.83、0.79、0.80,它们对马尾松切根幼苗、湿地松切根幼苗针叶都有致萎作用。

坚强芽孢杆菌的筛选及抗菌活性

采用兰层琼脂法初选对枯斑盘多毛孢Pestalotia funerea有抗生作用的细菌苗株共10株，4株Pseudomonas spp．对枯斑盘多毛孢的抗生作用小于6株Bacillus spp．；在Bacillus spp．中，以B5菌株拮抗带最大，初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属的坚强芽孢杆菌Bacillus firmus．对峙培养显示B5对枯斑盘多毛孢有明显的抑菌圈（平均6mm）；B5产生的非挥发性物质对枯斑盘多毛孢菌落的抑制总的表现为稀释度越小，菌落直径生长越小．抑制作用越大，抑制中量为1：1000～1：10000；B5产生的多糖、粗脂肪、蛋白质对枯斑盘多毛孢孢子萌发有抑制作用，粗脂肪可完全抑制枯斑盘多毛孢的孢子萌发（抑制率为100％）．多糖在24h可完全抑制孢于萌发，蛋白质相对较差，48～72h抑制率为85％左右．

枯斑盘多毛孢菌粗毒素的基本性质研究

本文对松赤枯病菌 (PestalotiafunereaDesm .)培养液粗提物的基本性质进行了初步研究。结果表明 ,松赤枯病菌培养液中有致病物质即毒素存在 ,该菌在PD培养液中能达到最大产毒量 ;松针浸出汁对毒素的产量和致病活性没有明显的促进作用 ,培养 15天的培养液有较高的致萎蔫的活性 ,随着培养时间的延长其致萎活性没有较大的提高。该毒素是一类极性较大的非蛋白类物质 ,能用甲醇将其从培养液中较好地提取出来。pH值对毒素粗提液致病活性无显著影响 。

绿粘帚霉与坚强芽孢杆菌对松赤枯病的协同生物控制

G．virens与B．firmus对松赤枯病的协同控制显示：（1）预先接种病原菌后（7天）再进行生物防治处理，防治效果在处理间差异不明显，浓度影响无显著差异，即使是两种生防制剂联合使用也未显著提高其防效，但不同树种间的感病性有明显差异；（2）颉抗菌与病原菌同时接种，对松赤桔病有一定防治效果，两菌联合有一定的协同作用。两种菌单独施用防效差异不显著，浓度变化对防效影响不大；（3）预先接种颉抗菌能显著提高防治效果，两种菌联合处理防效更优，感病树种（马尾松、云南松、油松）的感病指数可降至13～15，抗病树种的感病指数可控制在3％左右；在同一浓度下B．firmus与G．virens间无显著差异，在同一颉抗菌下，浓度愈高，防效愈高；（4）三种生防接种方式的平均效果分析表明，G．virens最高平均防效49．5％（黑松），B．firmus为50％（辐射松），两菌联合最高平均防效80％（辐射松）；在同一树种条件下，“预先接种颉抗菌”的方式显著高于“颊抗菌与病原菌同时接种”和“预先接种病原菌”，而“颉抗菌与病原茼同时接种”的方式也明显优于“预先接种病原菌”。从防治效果的绝对值来看，“预先接种病原菌”方式在实际生产中表现为病害已发生再进行生防菌处理，这种情况对松赤桔病的控制无实际意义。

枯斑盘多毛孢及其诱变生物型对寄生性种子植物和杂草的防除潜力

在35个枯斑盘多毛孢菌株中,以油松上的菌株所产代谢产物的毒力最强(PF-11),马尾松上的菌株(PF-2)次之。用PF-11为出发菌株在亚致死诱变剂量条件下经3次连续诱变获得10株抗紫外线的生物型。用硅胶H60型作柱层析的填料,正丁醇∶水∶甲醇(4∶2∶1)作洗脱剂进行柱层析,P11菌株代谢物可纯化出3种活性组分(Rf分别为0.83,0.79,0.80);诱变菌株P11-4可纯化出4种活性组分(Rf分别为0.83,0.79,0.80,0.60),表明诱变后增加了一种活性物质,通过红外光谱、质谱、核磁共振分析为一植物含氮多糖[C12H23O9N(Mr=325),分子式为OOONHCH2CH2CH3]。诱变菌株毒力研究表明:3株诱变生物型(PF11-1,PF11-3,PF11-5)为负突变,对目标寄生性种子植物无毒力;5株诱变生物型(PF11-7,PF11-8,PF11-9,PF11-10)毒力未明显增强,只有PF11-4,PF11-6诱变生物型为正突变,对寄生性种子植物和杂草的毒力显著提高。

蚧菌共寄生对马尾松针叶POD活性的影响

松突圆蚧与枯斑拟盘多毛孢菌都是严重危害福建省马尾松的主要林业有害生物。由于二者可共寄生于马尾松的松针,因此重点研究测定松针在二者共寄生条件下体内过氧化物酶的活性变化,对于探析松突圆蚧-枯斑拟盘多毛孢菌-马尾松针叶之间的互作关系具有重要作用。以5年生马尾松有虫有病(共寄生)、有虫无病(独寄生/虫)、无虫有病(独寄生/病)、无虫无病(健康针叶,对照)针叶为研究对象,采用紫外吸收法测定松针内过氧化物酶的活性特征。结果表明,不同松针的POD酶活性大小顺序为:有虫有病>有虫无病>无虫有病>无虫无病。显然,病、虫无论是共寄生还是独寄生都会诱导POD活性上升;但有虫有病、有虫无病处理的POD活性分别是无虫有病处理的POD活性的5.10、3.72倍,表明虫害在POD活性诱导过程中占据了主导作用;共寄生处理的POD实际测定值为435.0 U·g-1·min-1,显著高于二者单独处理条件下POD的理论相加值402.8 U·g-1·min-1(P<0.05),表明松突圆蚧、枯斑拟盘多毛孢菌在诱导POD活性上升过程中可能存在互惠共利关系并导致了联合增效作用。因此,防治松突圆蚧时建议兼治松赤枯病,可进一步提升防控效果。

云南松赤枯病的药剂防治试验

用 4种农药对云南松赤枯病 (Pestalotiafunerea)作药剂防治试验 ,结果表明 :70 %甲基托布津wp 80 0～ 1 0 0 0倍液、6 5 %代森锌wp 80 0～ 1 0 0 0倍液、5 0 %多菌灵wp 6 0 0～ 80 0倍液防治效果良好 ,可首选 ;百菌清防治效果极差 ,不宜选用 .应选择晴天施药 ,药量掌握在树冠滴液为宜 ,对受害林地内所有植被喷撒农药 ,防治效果好 .