四君子汤复方总多糖对肠黏膜Peyer's结细胞凋亡的影响

目的探讨四君子汤复方总多糖对小鼠肠黏膜Peyer's结细胞凋亡的影响。方法取NIH小鼠随机分为正常组、模型组、四君子汤复方总多糖(SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(SJZFP)组,肉眼计数Peyer's结细胞个数和面积,流式细胞(FCM)定量分析法(Annexin V联合PI)测定Peyer's结细胞的凋亡率,免疫组化法测定Peyer's结细胞BCL-2蛋白的表达。结果模型组Peyer's结个数和面积均小于正常组,与模型组比较,SJZPS组和SJZFP组Peyer's结个数和面积,均具有非常显著性差异(P<0.01);模型组Peyer's结细胞凋亡率大于正常组,与模型组比较,SJZPS组和SJZFP组Peyer's结细胞凋亡率具有非常显著性差异(P<0.01);模型组Peyer's结BCL-2蛋白表达低于正常组,与模型组比较,SJZPS组和SJZFP组Peyer's结BCL-2蛋白表达具有非常显著性差异(P<0.01)。结论SJZPS和SJZFP均可抵抗肠黏膜Peyer's结细胞的凋亡,具有肠道黏膜免疫调节作用。

猪圆环病毒2型诱导小鼠Peyer's结淋巴细胞凋亡规律研究

为了用小鼠做模型探讨猪圆环病毒2型(PCV-2)诱导Peyer's结淋巴细胞凋亡的规律,本试验用PCV-2感染5周龄昆明系小鼠,分别在感染后第7天、第14天、第21天、第28天、第35天处死小鼠,取脾脏、腹股沟淋巴结、Peyer's结通过PCR鉴定PCV-2感染情况,同时从Peyer's结分离淋巴细胞,利用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测Peyer's结淋巴细胞的凋亡。结果显示,攻毒小鼠在感染后第7天、第14天、第21天、第28天和第35天5组中凋亡的细胞百分比分别是0.69%±0.13%、1.72%±1.00%、3.25%±0.59%、4.72%±0.30%和9.06%±0.96%。随着感染时间的延长,PCV-2感染小鼠的Peyer's结淋巴细胞凋亡数量逐渐增加。

早期肠内谷氨酰胺补给对烫伤大鼠Peyer's结淋巴细胞亚群的影响

目的:观察烫伤大鼠伤后不同时间Peyer's结细胞总数及淋巴细胞亚群在营养支持影响下的变化形式,了解不同肠内营养支持对Peyer's结内细胞亚群的影响.方法:选取健康SD大鼠,随机分为标准肠内营养组(EN组,n=32)和谷氨酰胺补给组(EN+Gln组,n=32),制成烫伤动物模型(30%TBSAⅢ度烫伤),伤后早期分别给予标准肠内营养制剂(能全力)和标准肠内营养制剂+谷氨酰胺,于伤后第1、4、7、10天观察Peyer's结细胞总数及进行流式细胞仪细胞亚群(CD3+、CD45Ra+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+)分析.结果:烫伤后Peyer's结淋巴细胞总数在伤后1d明显减少,主要体现为B细胞总数的减少,EN+Gln组在伤后7d时淋巴细胞总数恢复至伤前水平[(5.29±1.03)×106vs(6.13±1.14)×106,P>0.05],而EN组没有恢复;EN+Gln组B细胞比例及总数在7、10d时与伤前比较无明显差异[(2.87±0.69)×106,(3.05±0.72)×106vs(3.29±0.62)×106,P>0.05],而EN组B细胞总数在10d时与伤前比较明显减少[(2.07±0.63)×106vs(3.29±0.62)×106,P<0.05];CD4+和CD8+细胞在伤后两组变化不明显.结论:肠内谷氨酰胺补给支持能快速有效地促进Peyer's结淋巴细胞增殖,尤其是B细胞,增加Peyer's结内淋巴细胞总数;有利于肠道免疫屏障的恢复和强化.

早期肠内免疫营养对烫伤大鼠Peyer's结Th1/Th2细胞因子的影响

目的:观察伤大鼠烫伤后不同时间Peyer's淋巴细胞Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-10产生的变化.方法:选取健康SD大鼠随机分为标准肠内营养(EN)组和免疫营养(EIN)组,制成烫伤动物模型(30%TBSAⅢ度烫伤模型),伤后早期分别给予标准肠内营养制剂(能全力)和肠内免疫营养制剂,于伤后1、4、7、10d取回肠Peyer's结,分离并体外培养Peyer's结淋巴细胞24h,检测Th1/Th2细胞因子分泌的变化.结果:烧伤后1d时两组IL-2、IFN-γ的表达明显上升(19.7±7.3vs92.6±21.3、97.6±25.4;63.7±27.3vs279.4±89.7、292.7±97.4;均P<0.01),EIN组两者分别在10d及4、7、10d时明显低于EN组(41.6±16.5vs55.9±14.4;96.7±31.2vs182.6±52.9,73.9±26.5vs129.9±48.9,71.6±26.9vs104.3±31.7;P<0.01或0.05);EIN组在4、7、10d时IL-4、IL-10表达高于EN组(169.3±57.7vs94.9±28.6,157.6±74.3vs65.2±32.4).提示EIN能促进Peyer's结淋巴细胞Th2细胞因子IL-4、IL-10的表达.结论:烫伤能引起Peyer's结内细胞细胞因子IL-2、IFN-γ的表达明显上升,肠内免疫营养支持通过促进Th2细胞因子的分泌纠正局部Th2向Th1漂移的免疫偏差,改善局部的体液免疫,有利于肠道免疫屏障的恢复和强化.

环磷酰胺对小鼠Peyer’s结和肠道粘膜相关淋巴细胞的影响

目的 :研究环磷酰胺对Peyer’s结和肠道粘膜相关淋巴细胞的影响 ,建立肠道粘膜免疫障碍模型。方法 :剂量为10 0mg kg的环磷酰胺 ,观察不同时间处理后小鼠Peyer’s结的数目以及处理 2 4h时Peyer’s结内细胞总数、CD3+ 、IgA+ 细胞数量和细胞凋亡的情况。结果 :环磷酰胺可使Peyer’s结数目在 2 4h时降低最明显 ,结内细胞数量和CD3+ 、IgA+ 细胞也明显减少 ,而细胞凋亡明显增加。结论 :环磷酰胺可诱导肠粘膜免疫障碍 ,这可能是其引起淋巴细胞的细胞凋亡而产生的。

Peyer’s结淋巴细胞对上皮屏障功能的影响

目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1和ZO 2mRNA的表达。结果 :①Caco 2细胞单层与PPL共培养的第 2天 ,无论是混合共培养还是上下共培养组的TER均与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;②同时上下共培养或混合共培养组在第 8天TER仍保持较高水平 ,与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;③在上下共培养和混合共培养组中 ,半定量RT PCR检测ZO 1mRNA的表达也均明显高于对照。结论 :Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)可以较好地维持上皮屏障功能。

Peyer’s结淋巴细胞对结肠上皮细胞屏障功能的影响

为探讨粘膜上皮细胞与淋巴细胞相互作用的机制,利用Caco-2上皮细胞(系)与新鲜分离的小鼠Peyer’s结淋巴细胞共培养模型,采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻(TER)的变化,半定量RT-PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO-1和ZO-2mRNA的表达以及ELISA方法测定相关细胞因子mIL-6和hIL-8的变化。结果表明,Peyer’s结淋巴细胞可以较好地维持上皮的屏障功能,但当痢疾杆菌F2a-12脂多糖(LPS)作用后,却使跨上皮电阻明显降低。细胞因子mIL-6和hIL-8在不同共培养情况下的差异表达,揭示淋巴细胞与上皮细胞间的“对话”包括细胞间的直接接触作用。