恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因体外扩增、克隆及序列分析

目的 构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因原核表达质粒pET2 8α -Pf12 ,测定Pf12基因序列 ,并为FCC1/HN株Pf12的体外表达奠定基础。方法 采用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增出Pf12基因 ,扩增产物经纯化后 ,用BamHI +XhoI双酶切 ,定向克隆入pET2 8α质粒 ,转化大肠杆菌DH5α,再用BamHI +XhoI酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定 ,并应用PCGENE软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 筛选出编码FCC1/HN株Pf12基因的原核表达质粒 pET2 8α -Pf12 ,FCC1/HN株Pf12基因序列与FMG株高度同源 ,Pf12基因序列中可能存在抗原表位。 结论 pET2 8α-Pf12重组质粒的构建 ,为恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因的体外表达奠定基础。

恶性疟原虫Pf12基因重组质粒DNA接种诱导小鼠的免疫应答

目的 观察重组质粒VR10 12 -Pf12DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠所产生的免疫应答 ,分析Pf12基因的抗原性和作为疫苗抗原候选分子的可能性。方法 构建重组质粒VR10 12 -Pf12 ,直接免疫BALB/c小鼠 ,通过NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平、ELISA、体外抑虫试验测定 ,观察其诱导的细胞和体液应答以及体外抑虫效果。结果 重组质粒VR10 12 -Pf12免疫BALB/c小鼠 ,NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平明显高于对照组 (P <0 0 1) ,诱导小鼠产生的抗体水平明显增高 (P <0 0 1) ,免疫血清在体外能抑制恶性疟原虫的生长、发育。结论 重组质粒VR10 12 -Pf12DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠产生一定水平的体液和细胞免疫应答 ,其免疫血清在体外对恶性疟原虫的生长、发育有明显的抑制作用。

恶性疟原虫Pf12基因在大肠杆菌中的表达及其产物的初步鉴定

目的 克隆并表达恶性疟原虫Pf12基因 ,为进一步研究其抗原表位奠定基础。 方法 将恶性疟原虫Pf12基因克隆入高效融合表达载体 pGEX 4T 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,2 8℃、IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Western blot免疫印迹分析表达产物。 结果 成功构建重组质粒 pGEX Pf12 ,经诱导后表达出含外源基因的融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物分子质量约 66ku ,Western blot免疫印迹表明 ,表达的产物能特异地被抗GST多抗 (1∶5 0 0稀释 )识别 ,亦能较特异地与抗疟原虫鼠免疫血清结合。 结论 恶性疟原虫Pf12在原核表达系统 pGEX 4T 1/BL2 1(DE3 )中获得成功表达 ,为下一步表达蛋白纯化 ,以及研究Pf12基因包含的抗原表位提供试验依据。

相容的聚甲基丙烯酸甲酯/[C_(12)MIM][PF_6]离子液体体系在超临界CO_2中的发泡性能

通过快速卸压法,以超临界CO2为物理发泡剂,研究了相容的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)/1-n-十二烷基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C12MIM][PF6])离子液体(IL)复合体系的发泡性能.加入IL后,PMMA对CO2的吸收量增加;复合体系的玻璃化转变温度(Tg)随IL含量的增加而降低.IL对PMMA发泡行为的影响取决于发泡条件.在较低温度和压力下,纯PMMA无法发泡,IL的加入可促进泡孔形成;提高温度和压力,纯PMMA可以发泡,IL的加入在提高泡孔尺寸的同时使泡孔仍然保持尺寸分布均匀的微米级结构.