牙龈卟啉单胞菌菌毛相关外膜蛋白pgmA基因的克隆和表达

目的 :克隆牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonasgingivalis,Pg) pgm A基因 ,构建 pgm A基因表达载体 ,鉴定其表达产物的免疫性。方法 :采用高保真 PCR分别从牙龈卟啉菌 ATCC332 77和 4 7A- 1菌株中扩增 pgm A基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列 ,构建 p ET32 a的 pgm A表达载体 ,在 E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达 ,采用兔抗融合蛋白血清的 Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性 ,采用 ELISA检测 6 5株临床分离牙龈卟啉单胞菌与 Pgm A融合蛋白抗血清的反应情况。结果 :所克隆的牙龈卟啉单胞菌 ATCC332 77与 4 7A- 1菌株 pgm A基因的核苷酸序列同源性为 10 0 %,与报道的相应核苷酸序列同源性为 98.98%,氨基酸序列同源性高达99.18%。p ET32 a- pgm A- BL2 1DE3系统的 Pgm A融合蛋白表达量为细菌总蛋白的 5 0 %左右。Pgm A融合蛋白免疫家兔能获得相应抗体并与 Pgm A蛋白发生结合反应。 ELISA结果证实 92 .3%的牙龈卟啉菌临床菌株 (6 0 / 6 5 )能与Pgm A融合蛋白抗血清发生结合反应。结论 :本研究成功地构建了 Pg pgm A高效表达系统 ,所表达的 Pgm A融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性 ,可作为 Pg检测试剂盒和 Pg疫苗的候选抗原。