Phb2/REA过表达慢病毒载体对体外Th17分化条件下小鼠单核细胞IL-17a表达的影响

目的探讨Phb2/REA过表达慢病毒转染小鼠初始T细胞后,在Th17细胞分化条件下对该细胞IL-17a表达的影响。方法提取小鼠脾脏淋巴细胞,分离纯化小鼠T淋巴细胞,将其分为空白组、空载体组、慢病毒组、Th17分化组和Th17+慢病毒组。空白组采用1640培养液培养,空载体组在37℃、5%CO2条件下用空载体慢病毒感染T淋巴细胞,14 h后换回常规培养基;慢病毒组在37℃、5%CO2条件下用含雌激素活性抑制因子(REA)过表达载体的慢病毒感染T淋巴细胞,14 h后换回常规培养基;Th17分化组在空白组培养条件下加用anti-CD3ε、anti-CD28、anti-IFN-γ、anti-IL-4抗体及IL-6、TGF-β1、IL-23等细胞因子,诱导原始T细胞向Th17细胞分化。Th17+慢病毒组在空载体组条件下加用Th17细胞分化。72 h后,收集5组细胞,采用Realtime-PCR检测REA、维甲酸依赖性孤核受体γt(ROR-γt)、IL-17a的mRNA的表达,验证Th17细胞分化的效果,探讨Phb2/REA过表达慢病毒载体对Th17细胞的分化及IL-17a表达的影响。结果Th17+慢病毒组的REA、RORγt mRNA表达较慢病毒组高,且慢病毒组、Th17+慢病毒组REA、RORγt的mRNA明显高于Th17分化组,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01);空载体组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Th17分化组的IL-17A mRNA表达明显上调(P<0.01),且高于Th17+慢病毒组(P<0.01);空白组、空载体组、慢病毒组的IL-17A mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论P hb 2/REA过表达慢病毒转染小鼠T淋巴细胞后,可以抑制Th17细胞的分化,同时抑制炎症因子IL-17的表达。