神经红蛋白突变体Tyr44Phe的制备、表征和稳定性研究

构建了突变体蛋白Tyr44Phe的基因,进行了蛋白的表达、分离纯化、谱学表征和稳定性研究.由电喷雾质谱所得突变体蛋白的分子量与理论值一致;UV-Vis吸收光谱、荧光光谱和圆二色光谱表明,Tyr44Phe的点突变虽没有改变血红素的六配位结构,但对血红素的构象有所影响.突变体蛋白的热、酸稳定性研究表明,定点突变降低了血红素与蛋白肽链之间的结合力,导致血红素易从疏水腔中脱出,说明Tyr44对蛋白的结构稳定性起一定的作用.

两个巴西种族及反复性流产患者Tyr204Phe和Val34Leu基因的多态性

This study investigated the prevalence of Tyr204Phe and Val34Leu polymorphisms in two Brazilian ethnic groups (171 Caucasians and 27 Blacks, and 117 men and 81 women) and in patients with recurrent miscarriages (RM) (86 women: 53 Caucasians and 33 Blacks). Study groups were matched to control groups by race and age. The prevalence of these polymorphisms did not differ between patients with RM and controls or between Caucasian and blacks, suggesting that these polymorphisms cannot be considered a risk factor for RM.

三棱的环二肽类成分抗凝活性

目的研究从三棱中分离得到的环-(酪氨酸-亮氨酸)、环-(苯丙氨酸-苯丙氨酸)和环-(苯丙氨酸-酪氨酸)这3个环二肽类成分的体外抗凝活性。方法使用试剂盒测定三棱乙醇提液分离得到3个环二肽类成分对取自雄性SD大鼠腹主动脉贫血小板血浆的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶时间(TT)。结果环-(酪氨酸-亮氨酸)、环-(苯丙氨酸-苯丙氨酸)和环-(苯丙氨酸-酪氨酸)均可使大鼠血浆PT、APTT和TT显著延长(P<0.1)。前二者未呈现出量效关系,后者呈现正性量效关系。结论三棱的环二肽类成分均具有抗凝活性,以环-(苯丙氨酸-酪氨酸)的抗凝作用尤为显著。

凌云乌鸡0～6周龄对代谢能、粗蛋白质和苯丙氨酸+酪氨酸适宜需要量的研究

研究主要探索凌云乌鸡0~6周龄日粮中代谢能(ME)、粗蛋白质(CP)及苯丙氨酸+酪氨酸(Phe+Tyr)的适宜水平,日粮代谢能水平设计为11.51、12.12 MJ/kg和12.73 MJ/kg;粗蛋白水平设计为19%、20%和21%;Phe+Tyr的水平设计为1.6%、1.8%和2.0%,试验采用L9(3^4)正交试验设计,选取1日龄健康状况良好、体重一致的凌云乌鸡母鸡540只,随机分为9组,每组3个重复,每重复20只,通过饲养试验和消化代谢试验以确定该阶段凌云乌鸡日粮最适的代谢能、粗蛋白质和苯丙氨酸+酪氨酸水平。试验结果表明:高能水平日粮显著降低了凌云乌鸡的料重比、血清白蛋白、血清尿素氮,其对能量、粗脂肪、钙、磷的表观消化率显著提高(P<0.05);随着日粮粗蛋白水平的提高,凌云乌鸡的日增重、对磷的表观消化率得到显著提高,料重比显著降低(P<0.05);除了中等Phe+Tyr水平日粮显著提高凌云乌鸡的平均日增重和血清尿素氮(P<0.05),日粮Phe+Tyr水平对其它指标无显著影响。综上所述,0~6周龄凌云乌鸡日粮适宜代谢能、粗蛋白质和苯丙氨酸+酪氨酸组合为12.73 MJ/kg、19%、2%。

凌云乌鸡13〜16周龄对代谢能、粗蛋白质和苯丙氨酸+酪氨酸适宜需要量的研究

研究旨在探索凌云乌鸡母鸡13~16周龄日粮中代谢能(ME)、粗蛋白质(CP)及苯丙氨酸+酪氨酸(Phe+Tyr)的适宜水平。试验设定3个ME水平(11.93、12.54和13.15 MJ/kg)、3个CP水平(15%、16%和17%)和3个Phe+Tyr水平(1.3%、1.5%和1.7%),共9种日粮。选取84日龄健康状况良好、体重一致的凌云乌鸡母鸡540只,随机分为9组,每组3个重复,每重复20只。结果表明:随着日粮代谢能水平的提高,母鸡对能量、粗蛋白表观消化率显著提高(P<0.05);而母鸡血清尿素氮、总蛋白和球蛋白的水平、母鸡的料重比显著降低(P<0.05)。中能水平显著提高母鸡的全净膛率和胸肌率(P<0.05)。随着日粮粗蛋白水平的提高,母鸡的血清球蛋白水显著提高(P<0.05);母鸡对粗蛋白和钙的表观消化率显著降低(P<0.05)。中蛋白水平日粮显著提高母鸡的屠宰率、半净膛率和全净膛率(P<0.05)。中等Phe+Tyr水平日粮显著降低母鸡的半净膛和全净膛率(P<0.05)。随着日粮Phe+Tyr水平的提高,母鸡血清血糖、总蛋白、白蛋白、球蛋白含量显著提高(P<0.05),母鸡的腿肌率显著降低(P<0.05)。研究表明,13~16周龄凌云乌鸡母鸡日粮适宜代谢能、粗蛋白质和苯丙氨酸+酪氨酸组合为:12.54 MJ/kg、16%、1.7%。

凌云乌鸡母鸡7～12周龄对代谢能、粗蛋白质和苯丙氨酸+酪氨酸适宜需要量的研究

为探索凌云乌鸡母鸡7~12周龄日粮中代谢能(ME)、粗蛋白质(CP)及苯丙氨酸+酪氨酸(Phe+Tyr)的适宜水平,试验采用L9(34)正交试验设计,通过饲养试验测定其生长性能、血清生化指标和养分的表观消化率。试验结果表明,随着日粮代谢能水平的提高,能量、钙和磷的表观消化率有升高的趋势;平均日采食量、料重比、血清总蛋白和球蛋白显著降低(P<0.05)。随着日粮粗蛋白水平的提高,料重比显著降低,能量和粗脂肪的表观消化率显著提高(P<0.05)。随着日粮Phe+Tyr水平的提高,母鸡的血糖水平显著提高(P<0.05)。由试验结果得出凌云乌鸡母鸡7~12周龄日粮的适宜代谢能、粗蛋白质和Phe+Tyr分别为13.13MJ/kg、20%、1.8%。

猪血复合氨基酸系统分离的研究

本文报道了从猪血制备的复合氨基酸中分离和纯化 L - Pro、L - Phe、L - Tyr、L - His、-L- L ys和 L- Arg的系统分离法 ,平均收率分别为 80 .965%、4 7.0 0 %、58.4 6%、72 .0 2 %、4 1.65%和 36.2 %。除去 L- Pro和 L- His外 ,其它四种 L- Amin

HPLC法快速测水产品中游离芳香族氨基酸含量的研究

建立了水产品中3种游离芳香族氨基酸含量的HPLC测定方法。试验确定了流动相的最佳pH、流速及浓度,并评价了方法的准确度、精密度和检测限。采用5%高氯酸溶液提取,用KOH溶液中和后进行HPLC分析。采用WatersAtlantis T3 C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱分离,以15%甲醇-85%磷酸盐溶液为流动相,用磷酸调pH为6.0;色谱条件流速:0.9 mL/min;柱温:27℃;检测波长:256.7 nm;12 min内完成测定。结果表明:Tyr、Phe、Trp分别在6～500μg/mL、30～1 000μg/mL和3～250μg/mL范围内有良好的线性关系,其线性相关系数(R2)在0.998 6～0.999 5之间。三者的检测限分别为2μg/mL、10μg/mL、1μg/mL,加标回收率在88.0%～105.2%之间。方法操作简便且定性可靠、定量准确。

金振口服液氨基酸特征指纹图谱及29种氨基酸同时定量的质量控制方法研究

目的氨基酸自动分析仪建立金振口服液(JOL)氨基酸特征指纹图谱及29种氨基酸(磷酸丝氨酸、牛磺酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、肌氨酸、甘氨酸、丙氨酸、瓜氨酸、α-氨基丁酸、缬氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、β-丙氨酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、3-甲基组氨酸、精氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸)同时定量的分析方法。方法采用日立855-4507型离子交换色谱柱(60mm×4.6mm,3μm);检测波长分别为570、440 nm;流动洗脱泵体积流量0.35 mL/min;衍生泵体积流量0.30 mL/min;反应柱温135℃;以柠檬酸缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱,建立JOL氨基酸特征指纹图谱,对29个主要特征峰进行化学成分指认,运用中药指纹图谱相似度软件对16批市售制剂进行相似度评价,同时对29种氨基酸进行含量测定。结果建立了JOL氨基酸特征指纹图谱结合29种氨基酸同时定量的方法;16批市售制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值在0.989~1.000;29种定量成分线性关系良好(R2=1.000),且平均回收率为95.71%~101.87%;16批市售制剂29种氨基酸的质量浓度分别为磷酸丝氨酸15.4572~29.3624μg/mL、牛磺酸64.4234~114.2386μg/mL、天冬氨酸19.0564~32.5490μg/mL、苏氨酸6.704 8~7.841 8μg/mL、丝氨酸22.609 4~39.382 8μg/mL、天冬酰胺61.134 0~115.456 0μg/mL、谷氨酸32.254 6~63.127 2μg/mL、谷氨酰胺5.2238~8.9532μg/mL、肌氨酸4.0810~44.0076μg/mL、甘氨酸12.4030~23.5164μg/mL、丙氨酸33.876 8~44.257 4μg/mL、瓜氨酸3.514 2~9.881 0μg/mL、α-氨基丁酸1.126 4~2.287 8μg/mL、缬氨酸11.584 6~15.469 0μg/mL、胱氨酸1.660 2~4.041 8μg/mL、异亮氨酸4.087 8~5.469 2μg/mL、亮氨酸8.295 2~11.724 0μg/mL、酪氨酸7.492 6~10.761 2μg/mL、苯丙氨酸4.856 4~9.248 0μg/mL、β-丙氨酸2.309 4~6.782 6μg/mL、β-氨基丁酸0.175 0~14.790 6μg/mL、γ-氨基丁酸17.654 4~26.621 8μg/mL、鸟氨酸42.338 4~58.172 6μg/mL、赖氨酸12.994 9~28.498 0μg/mL、组氨酸1.802 6~4.0674μg/mL、3-甲基组氨酸2.6084~4.3840μg/mL、精氨酸107.1416~301.6498μg/mL、羟脯氨酸15.8116~37.8076μg/mL、脯氨酸143.714 6~243.956 6μg/mL。结论氨基酸自动分析仪法测定JOL中氨基酸具有重现性好、结果可靠的优点;且JOL中氨基酸类成分定性定量研究在一定程度上明确了君药山羊角对制剂组方的成分贡献,为构建JOL全方位质量评价体系提供了有益补充。

多棘蜈蚣化学成分的研究(I)

目的研究多棘蜈蚣Scolopendra multidens的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、反相柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、中低压制备色谱、制备HPLC等方法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果从多棘蜈蚣乙醇冷浸提取物中分离得到了10个化合物,分别鉴定为尿嘧啶(1)、7,8-二甲基异咯嗪(2)、吲哚-3-乙酰胺(3)、N-乙酰基-2-苯基乙胺(4)、(3S)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(5)、环(L-异亮-L-脯)二肽(6)、环(L-亮-L-脯)二肽(7)、环(L-苯丙-L-脯)二肽(8)、环(L-苯丙-L-酪)二肽(9)、环(L-缬-L-脯)二肽(10)。结论所有化合物均为首次从多棘蜈蚣中分离得到。

零余子中环肽类化学成分及其生物活性研究

目的探究零余子(bulbils of Dioscorea opposita Thunb.)中含氮类化学成分及其生物活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI gel CHP-20、ODS等柱色谱及制备型高效液相分离纯化,结合理化性质及其波谱数据鉴定化合物结构。采用多柔比星诱导的NRK-52E细胞损伤模型及皮质酮诱导的PC-12细胞损伤模型分别检测所得化合物的肾细胞保护作用及神经细胞保护作用。结果从零余子中分离得到15个含氮类化合物,分别鉴定为环(L-苯丙-L-酪)二肽(1)、环(L-缬-L-脯)二肽(2)、环(D-色-D-酪)二肽(3)、环(L-脯-L-酪)二肽(4)、环(L-苯丙-L-丙)二肽(5)、环(L-亮-L-脯)二肽(6)、环(L-异亮-L-脯)二肽(7)、环(D-脯-L-酪)二肽(8)、环(L-苯丙-L-脯)四肽(9)、3-羟基-3-(2-丙酰)-2,4(1H,3H)-喹啉二酮(10)、3-吲哚甲醛(11)、木瓜新碱A(12)、1-核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲基-喹喔啉(13)、白曼陀罗酰胺(14)、苯丙氨酸(15)。化合物2、5、9、14能显著提高NRK-52E细胞活力。化合物对PC-12细胞活力均无明显影响。结论化合物2~5、7~9、11~14均为首次从薯蓣属植物中分离得到。首次报道化合物2、5、9、14在体外中表现出较好的肾细胞保护作用。