牛脑钙调素的分离纯化、鉴定及其免疫原制备

【目的】从牛脑中分离纯化钙调素(CaM),并进行生化鉴定,同时用碳二亚胺法制备CaM偶联免疫原。【方法】以phenyl-Sepharose层析法从牛脑中分离纯化CaM,用PDE法检测其活性,以SDS-PAGE、PAGE检测其分子量并观察CaM有无Ca2+结合时的电泳行为,检测其紫外扫描光谱,同时用交联剂碳二亚胺制备CaM偶联抗原进行动物免疫,并用间接Elisa法检测动物血清免疫效价。【结果】纯化后的CaM对PDE有明显的激活作用,电泳结果显示为均一条带,分子量约为17.3 kDa,在SDS-PAGE中,CaM结合Ca2+时比未结合Ca2+时迁移率快;而在PAGE中,迁移率在结合Ca2+比未结合Ca2+时慢;紫外光谱扫描显示约在251、260、267、272和283 nm有5个吸收峰,动物血清免疫效价为1∶800。【结论】用phenyl-Sepharose层析法纯化CaM和用碳二亚胺法制备CaM偶联抗原是成功的。

疏水层析介质的制备及对谷胱甘肽转硫酶的分离纯化

通过向环氧氯丙烷活化的Sepharose CL-6B中引入苯基,制备了Phenyl-Sepha-rose CL-6B凝胶并优化了偶联条件,以该合成的层析介质分离纯化了猪肝中的谷胱甘肽转硫酶。结果表明,在NaOH浓度为0.25mol.L-1,苯酚加入量为0.5mL.g-1凝胶,60℃下反应4.5h的条件下,偶联效果最好,偶联率达到95.5%。用该疏水层析介质纯化猪肝中的谷胱甘肽转硫酶,活性回收率为54.54%,纯化倍数为2.6。