抗肺炎链球菌工程多肽抗菌活性研究

目的检测制备纯化的抗肺炎链球菌工程多肽(Ph-SP)的体内外抗菌活性。方法将重组质粒转化入工程菌TG 1表达工程多肽(Ph-SP),经离子交换柱纯化后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示工程多肽(Ph-SP)对肺炎链球菌有较强的杀菌效力。按标化相对分子质量换算,分别是青霉素及万古霉素抗菌效力的200倍和50倍。结论构建的Ph-SP在体外及体内都呈现出对肺炎链球菌的靶向杀伤活性,为临床治疗肺炎链球菌感染提供了新的思路和发展方向,具有临床应用潜力。

抗金黄色葡萄球菌工程多肽体内外抗菌活性研究

目的 评价我室制备的抗金黄色葡萄球菌工程多肽 (Ph- SA)对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的体内外抗菌活性。方法 采用琼脂二倍稀释法测定 Ph- SA对 6 9株临床分离病原菌的最小抑菌浓度(minim al inhibitory concentration,MIC) ;采用腹腔感染后经尾静脉注射药物方法测定 Ph- SA及对照药物对小鼠的体内保护作用。结果 体外抗菌试验结果显示 Ph- SA对金黄色葡萄球菌呈现强抗菌作用 ,对金黄色葡萄球菌的甲氧西林 /苯唑西林耐药株和敏感株的 MIC50 分别为 8mg/L 和 0 .5 mg/L,按相对分子质量差异换算 ,强于万古霉素 12倍和 4 8倍 ;体内抗菌试验结果显示 :Ph- SA对 MRSA菌株 ATCC BAA- 4 2抗菌效力极强 ,按相对分子质量差异换算 ,至少强于万古霉素 5 9倍。结论 Ph- SA对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌体内外均呈现极强的抗菌活性 ,具有潜在的临床应用价值。

Ph-SA对金黄色葡萄球菌δ溶血素分泌影响的初步研究

目的 通过检测Ph- SA作用后,金黄色葡萄球菌δ溶血素分泌的变化,初步探究Ph- SA的作用机理。方法 实验分未处理、Ph- SA处理、青霉素处理三组,当菌的光吸收值A595达到0 .2时,加入相应的药物,分时段采集样品,用高效液相色谱法检测样品中δ溶血素的分泌量。结果 同一时间点比较,Ph- SA处理组δ溶血素分泌量明显低于其他两组(P均<0 .0 5 )。结论 Ph- SA除了形成孔道杀菌外,还可能具有抑制agr系统而降低细菌外毒素分泌的作用。

抗肺炎链球菌工程多肽的制备研究

目的:制备和纯化抗肺炎链球菌工程多肽(Ph-SP)。方法:将重组质粒转化入工程菌TGl表达工程多肽,经透析、离子交换柱纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白,微平板法测定蛋白浓度。结果:经透析、离子交换柱纯化后可获得较为单一的目的蛋白,蛋白浓度为0.18mg/ml。结论:本文的操作流程可以获得相对单一的目的蛋白。

重组融合蛋白Ph-PA对绿脓杆菌体内体外抗菌活性的初步研究

目的制备和纯化抗绿脓杆菌工程多肽Ph-PA,并检测其对绿脓杆菌的体内外抗菌活性。方法经离子交换柱纯化收集Ph-PA后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验并与现有抗生素对比,检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示Ph-PA对绿脓杆菌有较强的抗菌作用,且表现出相对的靶向特异性,对绿脓杆菌ATCC27853的最小抑菌浓度(MIC)为4μg/mL。按照相同相对分子质量进行标化后比较,Ph-PA的抗菌活性至少是哌拉西林的2200倍,头孢他啶的220倍。结论Ph-PA在体外及体内对绿脓杆菌都表现出较强的抗菌活性,为治疗绿脓杆菌感染提供了新的思路,具有临床应用潜力。

抗破伤风杆菌信息菌素Ph-CT的构建及其抗菌活性的初步研究

目的构建和纯化抗破伤风杆菌信息菌素(Ph-CT),并初步检测其抗菌活性。方法从分泌针对破伤风杆菌表面抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增出抗体可变区基因序列,利用双联寡核苷酸点突变技术将抗体模拟物与大肠菌素Ia融合构建Ph-CT,经离子交换柱纯化后,通过菌落培养加入不同剂量信息菌素Ph-CT(终浓度2、4、8、16μg/mL),观察Ph-CT的体外抗菌活性。通过培养液中接种破伤风杆菌,并加入不同剂量的Ph-CT(终浓度4、16μg/mL),厌氧培养16h后取滤液及菌液行小鼠腹腔注射,观察Ph-CT的体内抗菌活性。结果成功构建抗破伤风杆菌Ph-CT。体外实验结果显示,涂布加入Ph-CT 2、4μg/mL孵育菌液的固体培养基上仍见破伤风菌落生长,而涂布加入Ph-CT 8、16μg/mL孵育菌液的培养基上均无菌落生长;体内实验结果显示,滤液和菌液组中对照组小鼠1d内均全部死亡,滤液组Ph-CT 4、16μg/mL组小鼠3d内全部存活,菌液组中Ph-CT 4μg/mL组小鼠3d内存活3只(50%),Ph-CT 16μg/mL组小鼠3d内全部存活。结论构建的Ph-CT在体内和体外都表现出对破伤风杆菌有抗菌活性,为临床治疗破伤风提供了新思路和新途径,具有应用于临床的潜在价值。