微小RNA-148a-3p靶向核心1β13-半乳糖基转移酶1增强肺腺癌细胞的放疗敏感性的研究

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)在肺腺癌中的表达及临床意义,分析miR-148a-3p靶向蛋白核心1β13-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)对肺腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法选取肺腺癌组织芯片中76例患者肿瘤组织及肺腺癌A549细胞株为研究对象。对组织芯片分别进行miR-148a-3p原位杂交(ISH)染色和C1GALT1免疫组织化学染色,分析76例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-148a-3p的表达与临床病理、预后及C1GALT1表达的关系。采用细胞转染技术对A549细胞进行miR-148a-3p过表达质粒的转染;转染细胞接受2 Gy放疗后采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性;采用蛋白质印迹法检测细胞C1GALT1蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与C1GALT1的靶向调控关系;采用共转染技术分析miR-148a-3p调控A549细胞放疗敏感性的机制。结果76例肺腺癌组织中低表达miR-148a-3p与患者淋巴结转移显著相关(P=0.012);miR-148a-3p高表达者预后显著优于miR-148a-3p低表达者(P=0.005);肺腺癌组织中miR-148a-3p与C1GALT1的表达呈显著负相关(P=0.023)。多因素分析显示,miR-148a-3p低表达、T分期及淋巴结转移是预后的独立危险因素。克隆形成实验显示,过表达miR-148a-3p组克隆形成数显著低于对照组(P<0.001);Western Blot结果显示,miR-148a-3p过表达可以显著下调细胞中C1GALT1蛋白水平(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-148a-3p通过结合C1GALT1的3′UTR来调控C1GALT1的表达。功能拯救试验显示C1GALT1能够部分抵消miR-148a-3p的放疗增敏效应。结论肺腺癌中miR-148a-3p低表达与淋巴结转移、C1GALT1高表达及预后不良显著相关,miR-148a-3p通过负调控C1GALT1的表达增强肺腺癌细胞的放疗敏感性。

四逆汤饼灸对兔膝骨关节炎软骨中Caveolin-1/p38 MAPK信号通路蛋白表达的影响

目的探讨四逆汤饼灸治疗膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法取新西兰兔50只,随机分为对照组、模型组、p38 MAPK抑制剂(抑制剂)组、四逆汤饼灸组、四逆汤饼灸联合p38 MAPK抑制剂(联合)组,每组10只。除对照组外,其他组采用右后肢膝关节伸直位石膏管型固定制备兔KOA模型。对照组、模型组不予治疗;抑制剂组于关节腔内注射p38 MAPK抑制剂TAK-715,1次/d,治疗2周;四逆汤饼灸组取鹤顶、内外膝眼穴位予以四逆汤饼灸治疗,1次/d,治疗2周;联合组于关节腔内注射p38 MAPK抑制剂TAK-715,并在鹤顶、内外膝眼穴位予以四逆汤饼灸治疗,1次/d,治疗2周。采用HE染色观察软骨病理变化,免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法(Western blot)检测软骨组织中Caveolin-1、p38 MAPK、MMP-13蛋白的表达。结果HE染色结果显示,模型组软骨表面明显粗糙,破坏严重,细胞排列紊乱,Mankin’s评分明显升高;抑制剂组、四逆汤饼灸组及联合组软骨表面较光滑,软骨细胞分布较均匀,Mankin’s评分降低。免疫组化与Western blot结果显示,与对照组比较,模型组软骨组织中Caveolin-1、p38 MAPK、MMP-13的表达均升高(P均<0.05);与模型组比较,抑制剂组、四逆汤饼灸组及联合组软骨组织中Caveolin-1、p38MAPK、MMP-13的表达均降低(P均<0.05)。结论四逆汤饼灸能延缓KOA软骨的进一步破坏,其机制可能与抑制Caveolin-1/p38 MAPK信号通路蛋白的表达有关。

miR-1271-5p靶向F13A1基因对口腔鳞状细胞癌的调控作用

目的:探讨miR-1271-5p靶向F13A1基因对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的调控作用。方法:培养OSCC细胞系SCC154细胞和人正常口腔角质形成细胞NHOK,检测miR-1271-5p、F13A1的表达。将细胞分为mimics NC组、mimics miR-1271-5p组,MTT检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,RT-qPCR和WB检测F13A1的表达。双荧光素酶报告验证miR-1271-5p与F13A1的靶向关系。将细胞分为mimics NC组、mimics miR-1271-5p组、mimics miR-1271-5p+OE-F13A1组,MTT检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡。结果:与人正常口腔角质形成细胞NHOK比,OSCC细胞miR-1271-5p表达降低,F13A1表达升高。相比于mimics NC组,mimics miR-1271-5p组细胞活力降低,细胞凋亡率增加,F13A1表达显著降低(P<0.05),inhibitors miR-1271-5p组F13A1表达显著升高(P<0.05)。相对于mimics miR-1271-5p组,过表达F13A1逆转miR-1271-5p对OSCC的抗增殖和促凋亡作用(P<0.05)。结论:miR-1271-5p靶向F13A1基因抑制OSCC细胞增殖,促进细胞凋亡。

干扰MS4A8对苦参碱抑制胃癌细胞生长的影响

目的探讨干扰MS4A8对苦参碱抑制胃癌细胞生长的影响.方法构建干扰MS4A8细胞株,将所有细胞分为对照组、苦参碱组、苦参碱+shMS4A8组.采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,细胞克隆实验检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况,Westernblot检测各组细胞中P13K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白[磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化氨基未端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶(p-p38)]和MAPKs信号通路相关蛋白[胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)]表达情况.结果与对照组相比,苦参碱组细胞增殖率降低(LSD-t=6.93,P=0.045);与苦参碱组相比,苦参碱+shMS4A8组的细胞增殖率更低(LSD-t=6.34,P=0.005).与对照组相比,苦参碱组AGS细胞克隆数明显减少(LSD-t=3.33,P=0.045);与苦参碱组相比,苦参碱+shMS4A8组的细胞克隆数更少(LSD-t=3.03,P=0.005).与对照组相比,苦参碱组AGS细胞凋亡率增加(LSD-t=-7.76,P=0.0004);与苦参碱组相比,苦参碱+shMS4A8组的细胞凋亡率更高(LSD-t=-16.66,P=0.0001).与对照组相比,苦参碱组p-ERK、p-JNK、p-p38、PI3K、p-Akt、mTOR的相对表达量均减少(LSD-t=5.95,P=0.0117;LSD-t=9.43,P=0.0027;LSD-t=11.41,P=0.0016;LSD-t=27.10,P=0.0002;LSD-t=34.75,P=0.0001;LSD-t=13.89,P=0.0010);与苦参碱组相比,苦参碱+shMS4A8组p-ERK、p-JNK、p-p38、PI3K、p-Akt、mTOR的相对表达量均更少(LSD-t=5.41,P=0.0115;LSD-t=7.08,P=0.0044;LSD-t=4.11,P=0.0284;LSD-t=10.18,P=0.0011;LSD-t=4.22,P=0.0262;LSD-t=10.26,P=0.0011).结论干扰MS4A8可通过P13K-Akt-mTOR和MAPKs信号通路增强苦参碱抑制细胞增殖和细胞克隆数形成,增加细胞凋亡.

伴与不伴躯体化症状青少年抑郁障碍病人白细胞介素水平研究

目的:检测青少年抑郁障碍病人血清白细胞介素(IL)水平,并分析其与躯体化症状的相关性。方法:选择2020年12月至2021年12月在合肥市第四人民医院治疗的13~18岁的青少年抑郁障碍病人93例,根据是否伴功能性躯体化症状(functional somatic symptoms,FSS),分为伴FSS组(40例)与不伴FSS组(53例)。同时选取32名正常青少年人群作为对照组。采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、儿童躯体化量表(CSI)对疾病抑郁障碍现状进行评估。采用酶联免疫吸附试验法检测被试儿童血清IL-13及IL-12/23p40因子水平。结果:伴FSS青少年抑郁组IL-13因子水平显著高于不伴FSS组和对照组(P<0.05),不伴FSS组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);伴FSS组IL-12/23p40因子水平显著高于不伴FSS组(P<0.05),两者与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-13水平与CSI总分及分因子分均呈正相关关系(r=0.360、0.286、0.366、0.310、0.336,P<0.01);IL-12/23p40水平与CSI总分及分因子分均呈正相关关系(r=0.333、0.360、0.275、0.280、0.313,P<0.01)。结论:伴躯体化症状的青少年抑郁病人的血清IL-13水平异常,且与躯体化症状呈正相关。

miR-186-5p靶向CXCL13基因通过Wnt/β-catenin信号调节胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭

目的探讨miR-186-5p对胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法在胃癌HGC-27细胞中通过脂质体转染miR-186-5p模拟物(mimics),采用实时荧光定量PCR检测转染效果,MTT实验分析HGC-27细胞增殖水平,流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡情况,Transwell实验分析HGC-27细胞迁移和侵袭能力,生物信息学、双荧光素酶报告基因实验以及Western blotting分析miR-186-5p和CXCL13的靶向关系,Western blotting分析Wnt/β-catenin信号通路活化情况。结果体外转染miR-186-5p mimics可上调HGC-27细胞中miR-186-5p的表达。上调miR-186-5p表达能够抑制HGC-27细胞体外增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,上调miR-186-5p表达能够抑制β-catenin和c-Myc的表达。结论miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路,并抑制胃癌HGC-27细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

基于转录组测序分析白藜芦醇促进山羊肌内脂肪沉积的机制

【目的】基于转录组测序(RNA-Seq)分析白藜芦醇促进努比亚山羊肌内脂肪沉积的机制,以期找到白藜芦醇影响肌内脂肪沉积的候选基因及调控网络。【方法】采用转录组测序技术对饲料中添加600 mg/kg白藜芦醇组山羊的背最长肌和对照组山羊的背最长肌进行分析。利用edgeR软件进行差异基因(Differentially expressed genes,DEGs)筛选[Fold Change≥2,错误发现率(FDR)<0.05],并对DEGs进行GO功能注释和KEGG富集分析。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测P13K-AKT信号通路关键基因及脂肪分化标志基因的表达。【结果】600 mg/kg白藜芦醇组山羊肌内脂肪含量极显著高于对照组(P<0.01,下同)。RNA-Seq结果显示共筛选出399个DEGs,包括328个上调基因及71个下调基因。DEGs共注释到48个条目,主要包括细胞过程、单有机体过程、细胞、绑定和催化活性。KEGG通路富集分析发现,DEGs主要富集到252个通路,主要包括P13K-AKT信号通路、MAPK信号通路、AMPK信号通路等与脂肪代谢相关的通路,从中进一步筛选出可能参与肌内脂肪沉积的基因(IGFBP7和IRX3)。qRT-PCR结果显示,试验组山羊背最长肌P13K-AKT信号通路关键基因(P13K、AKT和MTOR)和脂肪分化标志基因(PPARγ、FAS和CEBPα)的表达量极显著高于对照组。50µmol/L RSV诱导肌细胞8 d后发现,脂滴极显著多于对照组,P13K、AKT、MTOR、PPARγ、FAS和CEBPα的表达量极显著高于对照组。【结论】基于RNA-Seq分析白藜芦醇促进努比亚山羊肌内脂肪沉积的机制,结合其诱导肌细胞成脂分化,猜测白藜芦醇可能通过P13K-AKT信号通路促进努比亚山羊肌内脂肪的沉积。

miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖

【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响,进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中,选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只,同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织,收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitativePCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体,使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系,构建GAB2的野生型和突变型载体,利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体,探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Westernblot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达,抑制了山羊颗粒细胞的增殖,为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。

高表达MRPL13促进胃癌细胞增殖并影响患者预后:基于抑制p53信号

目的明确线粒体核糖体蛋白L13(MRPL13)在胃癌中的表达情况及对预后的影响,并分析其可能的作用机制。方法利用公共肿瘤数据库,对胃癌中MRPL13的表达及对预后的作用及发生机理进行初步分析。进一步纳入我院2014年1月~2017年10月开展胃癌根治术的100例患者,分析MRPL13表达量对肿瘤进展及术后5年生存期的影响。体外采用慢病毒转染的方式调控胃癌细胞系(MGC-803和SGC-7901)中MRPL13的表达,分析其对细胞增殖和周期的影响。通过裸鼠皮下移植瘤模型进一步验证MRPL13在体内对肿瘤生长的影响。结合体内外研究分析MRPL13影响胃癌细胞的分子机理。结果生物信息学和本机构的病例分析发现,胃癌组织中MRPL13的水平均显著高于癌旁组织(P<0.05)。相关性分析表明,MRPL13的表达与Ki67、外周血CEA和CA19-9均呈正相关(P<0.05)。单因素结合Cox多因素分析,证实MRPL13高表达是影响胃癌5年生存率的独立危险因素(HR:3.284;95%CI:1.537~7.016)。富集分析提示MRPL13的功能可能和细胞周期、p53信号有关。体外CCK-8、克隆形成、流式细胞术和免疫印迹检测显示:上调MRPL13促进胃癌细胞增殖、G1/S期转化和细胞周期蛋白(CyclinD1和CDK6)表达(P<0.05),下调MRPL13的结果则与之相反(P<0.05)。在体研究显示:上调胃癌细胞MRPL13表达显著促进裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),而下调则抑制(P<0.05)。机制分析显示,上调MRPL13抑制胃癌细胞和裸鼠移植瘤中p53和p21的表达(P<0.05),而下调则反之(P<0.05)。结论MRPL13在胃癌中表达升高且影响长期预后,其可能通过抑制p53信号促进胃癌细胞增殖和细胞周期进程。

急性胰腺炎患者血清微小RNA-340-3p、CXC趋化因子配体-13和CXC趋化因子配体-16的表达意义

目的:检测急性胰腺炎患者血清中微小RNA-340-3p(miR-340-3p)、CXC趋化因子配体-13(CXCL-13)和CXC趋化因子配体-16(CXCL-16)的表达特征,分析其相关性。方法:选择确诊为急性胰腺炎的患者69例作为观察组,选择经体检健康的成人69例作为对照组。留取所有研究对象的血清标本,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-340-3p的表达,应用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测CXCL-13、CXCL-16的表达。应用生物信息分析预测miR-340-3p和CXCL-13、miR-340-3p和CXCL-16的靶向关系。结果:miR-340-3p在观察组中的表达量明显低于对照组,CXCL-13和CXCL-16在观察组中的表达量明显高于对照组(均P<0.05)。miR-340-3p、CXCL-13和CXCL-16在观察组不同病变分级中的表达差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组中miR-340-3p和CXCL-13(r=-0.63,P=0.032)、miR-340-3p和CXCL-16(r=-0.62,P=0.022)均呈负相关性,CXCL-13和CXCL-16(r=0.61,P=0.014)呈正相关性。生物信息分析显示miR-340-3p与CXCL-13、miR-340-3p与CXCL-16具有可能的结合位点。结论:急性胰腺炎患者血清中miR-340-3p低表达、CXCL-13和CXCL-16高表达,miR-340-3p与CXCL-13、miR-340-3p与CXCL-16具有协同负向作用,参与病变的形成和进展。

miR-155-5p和TRIP13在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系

目的探讨miR-155-5p及甲状腺激素受体因子13(TRIP13)在结直肠癌(CRC)中的表达水平及与预后的关系。方法选取2015年1月—2017年5月本院经病理确诊的78例CRC患者为研究对象。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CRC组织及癌旁组织中的miR-155-5p、TRIP13 mRNA表达情况,免疫组化染色法测定CRC组织及癌旁组织中TRIP13蛋白表达情况;分析miR-155-5p、TRIP13蛋白表达对CRC患者预后的影响;采用Kaplan-meier分析组织中miR-155-5p、TRIP13蛋白对CRC患者预后的影响;采用Pearson检验分析CRC组织中miR-155-5p与TRIP13 mRNA表达水平的相关性;多因素Cox回归分析CRC患者预后的影响因素。结果CRC组织miR-155-5p、TRIP13 mRNA表达水平及TRIP13蛋白的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);CRC组织中miR-155-5p、TRIP13蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、浸润深度无关(P>0.05),与患者TNM分期、肿瘤分化、淋巴结转移具有显著相关性(P<0.05)。miR-155-5p高表达组5年内生存率(42.50%)低于低表达组(71.05%);TRIP13蛋白阳性组5年内生存率(43.48%)低于阴性组(75.00%);CRC组织中miR-155-5p与TRIP13 mRNA表达水平呈正相关(r=0.491,P<0.05);Cox回归显示,肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、miR-155-5p、TRIP13是CRC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论CRC组织中miR-155-5p、TRIP13表达上调,并与CRC的进展和患者的预后有关,检测miR-155-5p、TRIP13表达情况有助于患者的预后评估。

基于网络药理学、分子对接和实验验证研究续断散加当归、骨碎补调控PI3K/AKT信号通路治疗激素性股骨头坏死的潜在机制

目的基于网络药理学、分子对接技术,结合动物实验验证探究续断散加当归、骨碎补(Teasel Root Sanjia Angelica Sinensis and Drynaria Rhizome,TASDR)对激素性股骨头坏死的治疗作用,并初步探讨其潜在作用机制。方法采用TCMSP数据库检索TASDR中各味中药的化学成分和中药靶点,利用GeneCards数据库筛选激素性股骨头坏死的作用靶点,通过String平台构建核心靶点基因的蛋白质PPI(蛋白质互相作用)网络,通过Omic-Share Tools进行GO、KEGG分析。使用AutoDock 1.5.6软件对所得靶点以及姜黄素进行分子对接验证。动物实验选取24只新西兰大白兔,分为空白组,模型组及高、低剂量药物干预组,从中选取18只建立醋酸泼尼松龙诱导的激素性股骨头坏死模型,各组采取相应的药物干预,采用HE染色、免疫组化、Western blot检测,比较TASDR在治疗激素性股骨头坏死过程中对PI3K/AKT信号通路中某些关键蛋白表达水平的影响。结果经过筛选后TASDR治疗激素性股骨头坏死潜在核心靶点38个,靶点包括TNF、IL-6、VEGFA等,此外TASDR作用靶点中包括AKT蛋白家族-AKT1。TASDR通过肿瘤信号通路、VEGF信号通路等通路,并涉及酶结合、受体结合等分子功能,参与程序性细胞凋亡、程序性细胞凋亡负调控等生物过程来调控成骨分化。分子对接显示TASDR与TNF、VEGF、AKT1等靶点基因的结合活性良好。动物实验结果表明:在模型组中,PI3K、AKT等蛋白呈现高表达,而下游蛋白FOXO1及VEGF表达量减少,经TASDR干预后PI3K及AKT等蛋白表达量下降,FOXO1及VEGF等蛋白表达升高。结论TASDR有着靶点、通路多元化的优势,可在一定程度上调控TNF、IL-6、VEGF、AKT1等靶点基因的表达,动物实验表明PI3K/AKT信号通路过度激活时,TASDR可一定程度上下调上游蛋白AKT及PI3K的表达量,且使得下游基因FOXO1及VEGF的表达量增加进而在激素性股骨头坏死的治疗中发挥作用。

微小RNA-203b-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 观察微小RNA-203b-3p(miR-203b-3p)通过调节肿瘤坏死因子超家族成员13b(TNFSF13B)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,探讨miR-203b-3p抑制MM的相关机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹分析(Western blot)检测miR-203b-3p和TNFSF13B在骨髓瘤肿瘤和细胞中的表达情况。miR-203b-3p与TNFSF13B的关系采用双荧光素酶报告实验进行验证。Lipofectamine 2000试剂用于MM细胞转染。miR-203b-3p和TNFSF13B对MM细胞生物功能的影响采用克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验进行分析。结果 与癌旁组织及正常细胞比较,MM组织和细胞中miR-203b-3p的表达量相对较低,而TNFSF13B在MM肿瘤和细胞中的表达量与正常组织和细胞相比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果表明,TNFSF13B是miR-203b-3p的直接靶点。miR-203b-3p在MM细胞中的过量表达能够抑制细胞的增殖和转移,差异有统计学意义(P<0.05),而TNFSF13B的表达上调则促进了MM细胞的增殖、迁移和侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-203b-3p可能通过下调TNFSF13B抑制MM细胞的增殖、侵袭和转移。

LncRNA LUCAT1靶向调控miR-937-5p/MMP13轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的 探究长链非编码核糖核酸(LncRNA)肺癌相关转录物1(LUCAT1)靶向调控微小RNA-937-5p(miR-937-5p)/基质金属蛋白酶13(MMP-13)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移的影响。方法 采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NSCLC组织和细胞中LUCAT1、miR-937-5p和MMP-13 mRNA相对表达水平。将A549细胞分为Control组、sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+anti-miR-937-5P组、sh-LUCAT1+OE-MMP-13组。并进行相应转染处理后,qRT-PCR和蛋白印迹检测转染效率,CCK-8和BrdU检测细胞活力和增殖;Transwell检测细胞迁移。双荧光素酶用于验证LUCAT1、miR-937-5p和MMP-13之间关系。异种移植肿瘤实验用于证实LUCAT1对肿瘤生长的影响,分为sh-NC组和sh-LUCAT1组。结果 LUCAT1和MMP-13 mRNA在NSCLC组织和细胞系中高表达,而miR-937-5p表达下调(P<0.05)。敲低LUCAT1在体外抑制A549细胞增殖和迁移,并在体内抑制肿瘤生长(P<0.05)。miR-937-5p被预测并被鉴定为LUCAT1的直接靶标,MMP-13被预测并被鉴定为miR-937-5p的靶基因,LUCAT1可通过miR-937-5p调控MMP-13表达(P<0.05)。抑制miR-937-5p或过表达MMP-13可部分逆转敲低LUCAT1在体外对细胞增殖和迁移的抑制作用(P<0.05)。结论 敲低LUCAT1通过靶向miR-937-5p间接下调MMP-13表达,抑制NSCLC细胞增殖和迁移。

Overview and progress of X-nuclei magnetic resonance imaging in biomedical studies

Proton nuclear(^(1)H)is the observed nucleus on which most magnetic resonance imaging(MRI)applications depend.Most traditional^(1)H MRI can provide structural and functional information about organisms,while various non-proton nuclei(X-nuclei)MRI can provide more metabolic information.However,due to the relatively poor signal-to-noise ratio(SNR)of X-nuclei MRI,their applications are quite rare compared to^(1)H.Benefit from the rapid developments of MRI hardware and software technologies,X-nuclei MRI has recently attracted increasing interests in biomedical research.This review firstly introduces some current methods to improve the SNR of X-nuclei MRI.Secondly,this review describes biomedical applications of X-nuclei MRI,especially focusing on the current use of X-nuclei(^(13)C,^(17)O,^(19)F,^(23)Na and^(31)P)MRI to study related diseases in different organs,including the brain,liver,kidney,heart and bone.Finally,perspectives studies on X-nuclei imaging and its potential applications are described in biomedical research.

瓶霉Phialophora sp.P13木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析

从瓶霉Phialophora sp.P13菌株中克隆得到一个11家族的木聚糖酶基因,命名为xyn11P13。该基因ORF全长705 bp,共编码234个氨基酸和一个终止密码子,N端19个氨基酸为预测的信号肽序列。成熟蛋白在毕赤酵母中进行了重组表达,在摇床水平上木聚糖酶XYN11P13的表达量为11.8 U/mL。XYN11P13的最适pH为5.5,在pH 3.5～7.0可以保持80%以上的酶活性,在pH 4.0～10.0具有良好的pH稳定性。最适作用温度为65℃,并在60℃条件下保持稳定。以榉木木聚糖为底物,XYN11P13的比活,Km及Vmax值分别为205.3 U/mg,2.73 mg/mL,399.6μmol/min/mg。多数金属离子对XYN11P13酶活力没有明显的影响。因此,XYN11P13具潜在优势应用于食品与动物饲料工业。

PI3K/Akt信号途径抑制烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡

目的探讨PI3K/Akt信号途径在烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡中的作用及机制。方法首先建立模拟烧伤的动物模型,通过Western blot观察PI3K/Akt信号途径的活化规律,TUNEL实验观察烧伤大鼠心肌凋亡。然后建立离体培养的缺血缺氧心肌细胞模型,并分为对照组、单纯缺血缺氧组、LY294002处理组或IGF-1处理组,应用ELISA观察缺血缺氧心肌细胞凋亡。并通过DEVD荧光检测caspase-3酶活性,RT-PCR检测p53、Bax的转录活性。结果烧伤后大鼠心肌组织内PI3K和pAkt表达逐渐增加,伤后3h达高峰;烧伤3h后,大鼠心肌细胞凋亡率显著增加;应用LY294002特异性抑制PI3K/Akt通路后,大鼠心肌细胞凋亡率较对照组增加更为显著(P<0.05)。缺血缺氧导致体外培养心肌细胞凋亡增加,caspase-3活性逐渐增强,p53、Bax mRNA表达量逐渐升高;与单纯缺血缺氧组相比,应用LY294002阻断PI3K/Akt途径活化后,心肌细胞凋亡数量增加更显著(P<0.05),caspase-3活性增高更为明显(P<0.05),p53、Bax mRNA表达量均显著升高(P<0.05);用IGF-1预先激活PI3K/Akt途径后,与单纯缺血缺氧组比较,心肌细胞caspase-3活性明显降低(P<0.05)。结论PI3K/Akt信号途径在缺血缺氧心肌细胞中具有抗凋亡作用,该作用与PI3K/Akt调控促凋亡基因p53、Bax的表达,抑制caspase-3凋亡反应有关,并为心肌缺血缺氧损害的临床防治提供新思路及实验依据。

PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

核磁共振技术在生物质转化中的应用

生物质结构的精确分析研究有利于其各个组分的转化利用,而核磁共振(NMR)技术是生物质解聚及结构演变分析中重要的表征技术.本文主要介绍了^(1)H NMR、^(13)C NMR、^(31)P NMR和2D HSQC四种NMR技术在生物质结构、产物定性和定量分析、反应路径和催化解聚机理探究中的应用,然后讨论了NMR技术应用于生物质研究中存在的主要问题,并进行了展望.