响应面Box-Behnken设计优化野金柴老叶复合酶处理工艺研究

为提高野金柴老叶中根皮苷的浸出率,对其复合酶预处理工艺进行了研究。在构成复合酶的纤维素酶、果胶酶和淀粉酶单因素试验基础上,将纤维素酶量(A)、果胶酶量(B)以及淀粉酶量(C)的使用量作为影响因子,以经过酶处理后的干叶用沸水冲泡后其根皮苷的释放量(R1)为响应值,通过Design Expert 10软件的响应面Box-Behnken试验设计,对上述3因子及其交互作用进行了研究。结果表明:A,B的交互作用对R1影响均达到了极显著水平,C的交互作用不显著;野金柴老叶干叶复合酶预处理最佳工艺为纤维素酶的用量为干叶重量的0.2%、果胶酶的用量为1.0%、α-淀粉酶的用量为0.97%,经此处理后的野金柴干叶用沸水冲泡后其根皮苷释放量可达18423 mg/kg,与最高预测值18933 mg/kg比较接近,表明该模型能较好地预测实际处理情况。

变温杀青工艺对野金柴老叶特性和品质的影响

为提高野金柴老叶饮品根皮苷的浸出率,省去鲜叶揉捻工序,降低鲜叶干燥能耗,对其进行了干热变温破蜡被杀青干燥工艺的研究;在单因素试验基础上,以鲜叶杀青温度(A)、杀青时长(B)及变温次数(C)作为影响因子,以经过该干燥工艺处理后的干叶沸水冲泡后其根皮苷的释放量(R1)为响应值,通过Design Expert 10软件的响应面Box-Behnken试验设计对上述3因子及其交互作用进行了研究。结果表明,C,B的交互作用对R1影响均达到了极显著水平,A的交互作用不显著。野金柴老叶预处理最佳工艺为:野金柴老叶(鲜叶)杀青破蜡被破细胞温度设定在85℃,杀青时长定在100 min、其间变温3次,即:烘25 min时取出、立即风冷2 min,再放入烘干箱继续加热杀青,在50 min和75 min时又如法“取出—风冷—放回—杀青烘干”操作2次。优化处理后的野金柴老叶干叶沸水冲泡后其根皮苷释放量可达11969 mg/kg,与最高预测值12285 mg/kg比较接近,表明该模型能较好地预测实际处理情况。同时,为大量野金柴老叶(鲜叶)的处理、加工和保藏缩短了所需时间,节省了大量的人工成本,并可使野金柴产品加工生产标准化、产品质量有所保障。

根皮苷对糖基化低密度脂蛋白诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表达乳脂肪球表皮生长因子8的影响

目的研究根皮苷(PHL)对糖基化低密度脂蛋白(gly-LDL)诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMVEC)表达乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)的影响,探讨PHL治疗糖尿病视网膜病变(DR)的作用及其机制。方法体外培养大鼠RMVEC,分别进行不同浓度的gly-LDL与联合PHL+gly-LDL的处理。采用TUNEL方法观察不同处理条件下大鼠RMVEC的细胞凋亡。利用蛋白质免疫印迹方法(Western blotting)检测大鼠RMVEC表达MFG-E8的变化。结果与对照组相比,gly-LDL诱导大鼠RMVEC发生明显的细胞凋亡形态学变化,凋亡细胞的比例显著增多达到36.52%(P<0.01),预先经PHL(800μmmol/L)孵育后,细胞凋亡明显减少至20.45%(P<0.01);与对照组(蛋白表达灰度值0.290±0.008)比较,gly-LDL诱导组蛋白MFG-E8表达明显降低,并呈现浓度依赖性(蛋白表达灰度值分别为0.215±0.009、0.165±0.002、0.117±0.014与0.092±0.004,P<0.01);经PHL预处理后,gly-LDL诱导的MFG-E8表达明显升高,伴随PHL给药浓度的增加,MFG-E8的表达逐渐上调,差异有统计学意义(蛋白表达灰度值分别为0.343±0.008、0.373±0.002与0.404±0.006,P<0.01)。结论 PHL可能通过显著改善蛋白MFG-E8的表达,从而抑制gly-LDL诱导的大鼠RMVEC的细胞凋亡,实现对DR的保护作用。

根皮苷的微生物转化筛选及消耗率的测定

利用反相高效液相法测定24种真菌对根皮苷的转化产物中根皮苷的含量,并对有转化能力的真菌菌种进行底物消耗率的测定。RP-HPLC色谱条件:PhenomenexLunaC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相A相:冰醋酸:水=1∶99(V/V),B相∶乙腈∶水∶冰醋酸=70∶29.8∶0.2(体积比),进行梯度洗脱:0(0%B)-20(25%B)-50(35%B)-80(60%B)-85 min(0%B);流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm。根皮苷质量浓度在0.0984 0 mg/mL^0.787 2 mg/mL内线性关系良好,回归方程为Y=4×107X+44 514(R2=0.999)。经HPLC检测,3种真菌对根皮苷有转化作用,当培养基中根皮苷质量浓度为0.3 mg/mL时,测得培养后底物消耗率分别为45.31%,59.01%,55.60%。结果表明RP-HPLC法方法简单准确、重现性好,可适用于根皮苷微生物转化研究中非单一转化产物的定性和定量分析。

苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选

为筛选能够有效降解苹果主要自毒物质——根皮苷的降解菌,采用分光光度法选取对根皮苷具有较高降解效果的菌株,并进行盆栽试验以验证其实际生产效果。结果表明,筛选到的菌株6-3属于粘质沙雷菌属,能够有效降解根皮苷,且对平邑甜茶的根系及地上部无明显负面作用,对其生长发育有一定的促进作用。

木姜叶柯中根皮苷的提取工艺优选

目的:以木姜叶柯为原料,优选其根皮苷的提取工艺。方法:分别提取木姜叶柯中的根皮苷,比较提取物得率。结果:热水提取法所获得的根皮苷纯度及含量最高。以1:20料液比,提取2h,提取3次为热水提取法最佳工艺。结论:热水提取法是木姜叶柯中根皮苷的最优提取方法。

高效液相色谱法测定木姜叶柯水提取物中根皮苷的含量

目的:建立木姜叶柯水提取物中根皮苷的高效液相检测方法。方法:取木姜叶柯水提取物以甲醇溶解后,用高效液相色谱法测定。色谱条件:Kromosi-C18色谱柱;紫外检测波长286 nm;流动相:甲醇-水(47:53);流速:1 mL/min;定量环进样20μL;柱温32℃。结果:根皮苷浓度在6.4~102.4 ug/mL范围内线性良好,r=0.9998,其平均回收率分别为98.83±0.94%。结论:该法专属性好,回收率高,适合于木姜叶柯中根皮苷的质量控制。