原核表达家蝇抗菌肽Phormicin A,B蛋白对大肠杆菌标准株的影响

抗菌肽是近年来新型的抗菌剂药物候选者。以家蝇防御素家族Phormicin A、B抗菌肽为研究对象,探究了其对大肠杆菌的作用效果。采用原核表达法获得二者蛋白,将其作用于大肠杆菌标准株,通过微量液体稀释法测定其最小抑菌浓度分别为20和7.5 mmol/L,并绘制了二者作用于大肠杆菌标准株的时间生长曲线。结果显示:家蝇Phormicin A、B原核表达蛋白对于大肠杆菌标准株的生长具有一定的抑制作用,此研究为应用于抗临床大肠杆菌感染药物的研发提供了一定的参考。

原核表达家蝇Phormicin蛋白对金黄色葡萄球菌的抑菌活性分析

家蝇Phormicin是一类具有广普抗菌活性的抗菌肽,属于防御素家族。本研究采用原核表达法纯化并获得家蝇Phormicin A、Phormicin B蛋白,将其作用于金黄色葡萄球菌标准株,通过微量液体稀释法测定其最小抑菌浓度分别为0.625 mmol/L和0.469 mmol/L。进一步绘制了二者对金黄色葡萄球菌的时间杀菌曲线,并利用牛津杯法进一步验证了二者的抗菌效果。结果显示,二者对金黄色葡萄球菌都具有一定的抑菌效果。本研究为进一步探索Phormicin在家蝇天然免疫和防御中的机制提供理论参考。

家蝇Phormicin蛋白表达及对白色念珠菌的抑菌活性分析

防御素是一类具有广普抗菌活性的阳离子抗菌肽,而家蝇(Musca domestica)的Phormicin属于防御素超家族。白色念珠菌(Candida albicans)是临床上常见的引起人体感染的条件致病真菌。随着免疫缺陷病、糖尿病等疾病发生率的增加,在病人体内植入设备的白色念珠菌残留及附带感染日益成为临床感染的常见类型。本研究制备了家蝇Phormicin A、Phormicin B的原核表达蛋白,将其作用于白色念珠菌。微量液体稀释法测定了其最小抑菌浓度为2.5mmol/L和1.875mmol/L。进一步绘制了其对白色念珠菌的时间杀菌曲线。结果显示,二者对白色念珠菌都具有一定的抑菌效果。本研究为进一步探索Phormicin参与家蝇天然免疫和揭示家蝇抗真菌防御中的机制提供理论参考,为开发多肽类抗真菌药物提供线索。

家蝇Phormicin A多克隆抗体的制备及效价检测

家蝇Phormicin作为防御素家族的成员,是一类具有广普抗菌活性的抗菌肽。本研究采用原核表达法表达并纯化获得了家蝇Phormicin A蛋白。将家蝇Phormicin A原核表达蛋白与完全佐剂和不完全佐剂乳化混匀,先后免疫新西兰白兔获得其多克隆抗体。通过原核表达蛋白中和吸附实验,以及Western blot实验验证了抗体的特异性。进一步用金黄色葡萄球菌刺激家蝇三龄幼虫样品,进行内源性验证并测定抗体的效价。结果显示,该多克隆抗体既可以识别家蝇Phormicin A原核表达蛋白,也可以识别金黄色葡萄球菌刺激家蝇三龄幼虫产生的内源性Phormicin A蛋白。本研究为进一步探索Phormicin在家蝇天然免疫和防御中的机制等后续工作打下基础。

人工合成绿蝇防御素及其活性研究

采用人工合成的方法研究绿蝇防御素 (phormicin A)对细菌及肿瘤细胞作用效果 .实验结果发现 ,人工合成的绿蝇防御素可以在较低浓度下抑制革兰氏阳性菌的生长 (MIC=5～ 75μg/ m L ) ,其中以金黄色葡萄球菌的反应最为敏感 ,MIC为 5 μg/ m L.而且当人工合成的绿蝇防御素浓度升至30 0 μg/ m L时可以抑制大肠杆菌的生长 ,但无法抑制绿脓杆菌的生长 .此外 ,它还能抑制 MDA4 35乳腺癌细胞及 TSU前列腺癌细胞的体外增殖 ,抑制率分别为 2 2 .2 1% (P<0 .0 5 )和 35 .5 3% (P<0 .0 1) .