内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD⁃L1表达

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squa⁃mous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT⁃qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R⁃like endoplas⁃mic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素⁃γ(interferon⁃γ,IFN⁃γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT⁃qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体⁃1配体(programmed death receptor ligand 1,PD⁃L1)表达变化。结果HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P<0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR⁃26a⁃5p表达上调(P<0.05);PTEN是miR⁃26a⁃5p的靶基因,miR⁃26a⁃5p升高巨噬细胞PD⁃L1表达水平,并下调PTEN表达(P<0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR⁃26a⁃5p和PD⁃L1表达上升,PTEN表达下降,p⁃AKT表达升高(P<0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD⁃L1表达上升(P<0.01)。结论ERS的HNSCC细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路及PD⁃L1的表达。

miR-29a、PTEN、p53在育龄子宫内膜癌组织中的表达及与其术后复发转移的关系分析

目的探讨育龄子宫内膜癌(EC)患者癌组织中微小RNA-29a(miR-29a)、张力蛋白同源物(PTEN)、肿瘤抑制基因(p53)表达与术后复发转移的关系。方法回顾性分析因EC进行手术治疗42例病理组织标本作为观察组,选取21例正常子宫内膜组织作为对照组。根据术后3年复发转移情况将观察组分为复发转移组19例和未复发转移组23例。荧光定量PCR检测EC癌组织和正常子宫内膜组织中miR-29a相对表达量;免疫组织化学技术检测EC癌组织和正常子宫内膜组织中PTEN、p53阳性表达率。结果观察组miR-29a相对表达量、PTEN阳性表达率低于对照组,p53阳性表达率高于对照组(P<0.05);育龄EC患者术后复发转移与肿瘤直径、浸润深度、远处转移、淋巴结转移和淋巴脉管转移有关(P<0.05);复发转移组miR-29a相对表达量、PTEN阳性表达率低于未复发转移组,p53阳性表达率高于未复发转移组(P<0.05);远处转移、miR-29a<1.92、PTEN阳性和P53阳性均为影响育龄EC患者术后复发转移的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-29a、PTEN、p53在育龄EC患者癌组织中呈现表达异常,其异常表达是患者术后复发转移的独立危险因素。

青蒿琥酯通过调节miR-21/PTEN/AKT轴对甲状腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 观察青蒿琥酯对甲状腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响及微小RNA(miRNA)-21在该过程中的作用,并探讨相关机制。方法 取TPC-1细胞,将miR-21过表达质粒miR-21 mimics转染至TPC-1细胞,随机分为mimics组、联合组,mimics组常规培养,联合组加入青蒿琥酯(320μg/mL)。另取TPC-1细胞分为空白组、青蒿琥酯组,空白组常规培养,青蒿琥酯组加入青蒿琥酯(320μg/mL)。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞miR-21表达量;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶实验验证miR-21与第十染色体同源丢失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN)的靶向关系;免疫印迹法检测细胞PTEN、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达。结果 与空白组比较,青蒿琥酯组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT降低,凋亡率、PTEN蛋白表达量升高(P<0.05),mimics组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT升高,凋亡率、PTEN蛋白表达量降低(P<0.05);与青蒿琥酯组比较,联合组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT升高,凋亡率、PTEN蛋白表达量降低(P<0.05);与mimics组比较,联合组miR-21表达量,24、48、72 h吸光度值,迁移率,p-AKT/AKT降低,凋亡率、PTEN蛋白表达量升高(P<0.05);双荧光素酶结果显示,PTEN是miR-21的靶基因。结论 青蒿琥酯可抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移,并促进其凋亡,其作用机制可能与下调miR-21进一步靶向调控下游PTEN/AKT轴表达有关。

PTEN基因编码产物与子宫内膜癌发生发展的相关性研究

背景与目的:第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphataseandtensionhomologydeletedonchromosometen,PTEN)是迄今发现的第一个具有磷脂酶活性的抑癌基因,该基因突变或缺失及蛋白表达异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨抑癌基因PTEN与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)方法测定24例子宫内膜癌组织、10例子宫内膜非典型增生组织、10例子宫内膜增生组织和10例正常子宫内膜组织的PTENmRNA表达水平;SP免疫组化法测定73例子宫内膜癌组织(其中腺癌57例)、25例子宫内膜非典型增生组织、71例子宫内膜增生组织和31例正常子宫内膜组织的PTEN蛋白表达水平,并将结果与各病例的组织学类型、组织学分级、肌层浸润深度和临床分期等生物学行为进行相关性分析。结果:在转录水平和蛋白水平,子宫内膜腺癌组和癌前病变组中PTEN的表达均明显低于内膜增生症组和正常子宫内膜组,各组组织中PTENmRNA相对含量分别为0.35±0.13、0.46±0.11、2.32±0.32、2.45±0.51;PTEN蛋白表达缺失率分别为66.67%(38/57)、76.00%(19/25)、5.63%(4/71)和0%(0/31)。PTEN蛋白表达缺失率与其组织学类型和组织学分级有关(P均<0.01),?

甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡

研究甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)对肝癌细胞内PTEN/AKT信息通路信号传递的影响.用Western blotting法分析全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)处理人肝癌Bel 7402和HepG2细胞24 h后PTEN表达的变化.免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用.激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN在细胞共定位.RNA干扰(RNAi)技术抑制AFP表达,再用ATRA处理24 h后检测细胞内PTEN表达的变化,并分析蛋白激酶B(AKT)的磷酸化.用pcDNA3.1质粒和人afp基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌HLE细胞.结果显示,人肝癌Bel 7402和HepG2细胞均有PTEN的表达,ATRA(160μmol/L)处理24 h后能促进这些细胞的PTEN表达.Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合.共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆.干扰AFP表达后,PTEN表达明显提高.抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内PTEN的表达,并能抑制AKT的磷酸化.转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内有AFP表达,并与PTEN结合,且发现pcDNA3.1-afp载体能增加AKT的磷酸化[p-AKT(Ser473)],对抗ATRA抑制HLE细胞增殖.研究的结论是:肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活AKT信息通路.胞浆内的AFP是肝癌细胞耐受ATRA的重要因子.

子宫内膜增生中PTEN、ER、PR的表达与子宫内膜切除术预后的相关性

目的探讨子宫内膜增生患者中第10号染色体同源丢失性磷酸酶—张力蛋白基因(PTEN)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达与宫腔镜子宫内膜切除术(TCRE)预后的相关性。方法采用免疫组化法对78例因功能失调性子宫出血行TCRE患者的子宫内膜行PTEN、ER、PR测定,其中增殖期内膜15例、单纯性增生内膜27例、复杂性增生内膜17例、不典型增生内膜19例。结果 PTEN、ER、PR在增殖期、单纯性增生、复杂性增生及不典型增生内膜中均有阳性表达,其阳性表达均呈递减趋势。等级相关分析结果显示PTEN、ER、PR表达异常与子宫内膜组织学分级均呈负相关。PTEN、ER、PR阳性表达的不同与TCRE预后有关,随着PTEN、ER、PR阳性表达强度的逐渐降低,TCRE术后复发率呈递增趋势。结论 PTEN、ER、PR与子宫内膜病变的发生发展密切相关,PTEN、ER、PR的表达减低与TCRE预后相关。

微小RNA-92a-3p靶向PTEN调控胰腺癌细胞增殖和转移

目的:探讨微小RNA-92a-3p(microRNA-92a-3p,miR-92a-3p)靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)调控胰腺癌细胞增殖和转移的作用机制。方法:采用Real-time PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞株(HPDE6-C7)与胰腺癌细胞株(Panc-1,BxPC-3,AsPC-1,MIA Paca-2,Capan-2)中的miR-92a-3p表达;同时,采用蛋白质印迹法检测上述细胞中PTEN的表达。选取胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1的细胞进行实验,分为转染对照模拟物组(NC mimics组)、miR-92a-3p模拟物组(miR-92a-3p mimics组)、对照拮抗剂组(NC inhibitor组)、miR-92a-3p拮抗剂(miR-92a-3p inhibitor组),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白表达水平。将野生型PTEN的3’-非编码区(untranslated regions,UTR)(wt-PTEN 3’UTR)或突变体PTEN的3’-UTR(mutPTEN 3’UTR)分别与NC mimics,miR-92a-3p mimics,NC inhibitor,miR-92a-3p inhibitor共转染293T细胞,采用双萤光素酶报告实验检测miR-92a-3p与PTEN的靶向结合关系。在BxPC-3细胞的回复实验中,实验又分NC inhibitor+siNC组、miR-92a-3p inhibitor+si-NC组、NC inhibitor+si-PTEN组和miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组;在Panc-1细胞的回复实验中,实验又分为NC mimics+NC组、miR-92a-3p mimics+NC组、NC mimics+PTEN组和miR-92a-3p mimics+PTEN组,再分别采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白的表达。结果:与HPDE6-C7细胞相比,miR-92a-3p在胰腺癌细胞株中均呈高表达(均P<0.01),PTEN在胰腺癌细胞株中均呈低表达(均P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组BxPC-3和Panc-1细胞活力均升高(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组BxPC-3和Panc-1细胞活力均降低(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均增多(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均减少(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组的wtPTEN 3’UTR荧光素酶活性被抑制(P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组的wt-PTEN 3’UTR荧光素酶活性被增强(P<0.01)。与miR-92a-3p inhibitor+si-NC组相比,miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组恢复了miR-92a-3p inhibitor对BxPC-3细胞增殖和转移的影响;与miR-92a-3p mimics+NC组相比,miR-92a-3p mimics+PTEN组恢复了miR-92a-3p mimics对Panc-1细胞增殖和转移的影响。结论:MiR-92a-3p可靶向抑制PTEN的表达,促进胰腺癌细胞的增殖和转移。

肺癌及癌前病变组织芯片中PTEN的表达及其意义

目的检测肺癌组织中PTEN蛋白的表达,并探讨其在肺癌发生、发展中的作用和意义。方法利用组织芯片技术和免疫组化方法,检测原发性肺癌89例、淋巴结转移性肺癌12例、癌前病变12例和正常肺标本10例中PTEN蛋白的表达情况。结果原发性肺癌中PTEN阳性率为44.9%,显著低于正常组(90.0%)(P<0.05);PTEN的表达与分化程度、淋巴结转移和临床分期相关(P<0.05)。结论PTEN蛋白在肺癌中的表达阳性率降低,并且与病情进展程度相关,PTEN的失活促进了肿瘤的发生和发展,与预后不良相关。

miR-489-3p靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

喉鳞状细胞癌中p73、PTEN基因的表达及其临床意义

背景与目的:目前尚缺乏有效评价喉鳞癌预后的理想指标。本研究旨在探讨喉鳞状细胞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)中p73、PTEN(phosphatesandtensionhomologdeletedonchromosometen,PTEN)基因的表达与患者临床、病理参数和预后的关系。方法:采用免疫组化SABC技术检测65例喉鳞癌组织及23例癌旁组织中p73、PTEN基因的表达情况。结果:P73、PTEN蛋白在65例喉鳞癌组织及23例癌旁组织中的表达存在显著性差异(P<0.05),P73蛋白阳性率分别为58.5%(38/65)与17.4%(4/23),PTEN蛋白阳性率分别为49.2%(32/65)与95.7%(22/23)。65例喉鳞癌组织中,P73蛋白在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、远处转移及复发患者中的表达水平较Ⅰ～Ⅱ期、无转移及初发患者高(P<0.05);PTEN蛋白的表达在TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化癌和无颈淋巴结转移及远处转移患者中的表田慎之,等.喉鳞状细胞癌中p7达水平较Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有转移患者高(P<0.05)。术后生存5年以上者的PTEN蛋白阳性率(66.7%)较生存时间不超过5年者(27.3%)高(P<0.05)。喉鳞癌组织中p73、PTEN基因的表达未见显著性相关(P>0.05)。结论:PTEN蛋白的表达对预测喉鳞癌的预后有一定参考价值。

绝经后服用他莫西芬的乳腺癌患者子宫内膜中PTEN的表达

目的探讨他莫西芬对绝经后妇女子宫内膜腺细胞PTEN表达的影响,从分子生物学上研究绝经后乳腺癌术后妇女应用他莫西芬有否引起子宫内膜癌的可能。方法应用免疫组织化学LSAB二步法,检测PTEN在绝经后妇女服用2年他莫西芬后子宫内膜中及绝经后子宫内膜腺癌中的表达,以脱垂子宫的子宫内膜为对照。结果他莫西芬组与对照脱垂组、子宫内膜腺癌组与对照脱垂组之间差异具有统计学意义(P<0.01);他莫西芬组与子宫内膜癌组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝经后每日服用他莫西芬40mg延续2年以上的患者,由于他莫西芬对低雌激素水平的子宫内膜起到弱雌激素样作用,导致子宫内膜腺细胞中PTEN存在严重减少或缺失,可能是他莫西芬导致子宫内膜癌的早期的分子学水平的重要事件。

VEGF/PTEN及下游信号通路在侵袭性垂体瘤中的表达及其临床意义

目的探讨侵袭性垂体瘤中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与人第10号染色体缺失的磷酸酶(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)表达水平及其下游信号通路的变化的临床意义。方法收集医院神经外科手术后垂体瘤标本62例(侵袭组32例,非侵袭组30例)和60例正常垂体组织标本(对照组)。通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测比较VEGF、PTEN、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphate-Serine/threonine Kinase,p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphate-mitogen-activated protein kinase,p-MAPK)在垂体瘤和正常垂体组织之间的表达差异。结果垂体瘤标本中VEGF的表达水平显著高于对照组(P<0.05),在侵袭组(3.61±0.16)中的表达高于非侵袭组(2.06±0.13),差异有统计学意义(t=10.60,P<0.05),而PTEN在垂体瘤标本中的表达显著低于对照组(P<0.05),尤其在侵袭组(0.42±0.10)中的表达显著降低(t=6.31,P<0.05)。垂体瘤标本中p-Akt和p-MAPK水平显著高于对照组(P<0.05),且侵袭组(p-Akt 3.90±0.14;p-MAPK 2.52±0.11)明显高于非侵袭组(p-Akt 2.27±0.11;p-MAPK 1.89±0.05)(p-Akt,t=12.95,P<0.05;p-MAPK t=7.29,P<0.05)。结论侵袭性垂体瘤中VEGF、p-Akt及p-MAPK水平明显增高,而PTEN表达水平显著降低,提示上述变化可能与垂体瘤的侵袭性相关,其可能为诊断并治疗侵袭性垂体瘤靶点的选择提供新方向。

MMP-9、ERK与PTEN在舌癌组织中的表达及临床意义

目的观察基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞外信号调节激酶(ERK)与张力蛋白同源基(PTEN)在舌癌组织中的表达,探讨其临床意义。方法选择2012年5月—2018年6月秦皇岛市海港医院及秦皇岛市第四医院收治65例舌癌患者的术后病理组织为舌癌组,同时选取癌旁正常组织25例作为癌旁组织组。观察不同组织中MMP-9、ERK与PTEN表达情况,及其与临床病理学参数的关系。结果舌癌组ERK、MMP-9阳性表达率均高于癌旁组织组,PTEN低于癌旁组织组(P <0. 05)。临床分期越高、有淋巴结转移者的PTEN阳性表达越低、ERK阳性率越高(P <0. 05),临床分期越高、分化程度越低、有淋巴结转移者的MMP-9的阳性表达率越高(P <0. 05)。结论 MMP-9、ERK与PTEN可能参与舌癌发生与发展过程。

miR-21和PTEN在肺癌脑转移患者血清中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探究微小RNA-21(miR-21)和第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在肺癌脑转移患者血清中表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法以238例肺癌患者为研究对象,根据诊断结果将患者分为肺癌脑转移组78例和肺癌非脑转移组160例,检测两组患者血清中miR-21、PTEN水平,并分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果肺癌脑转移组患者血清miR-21表达水平显著高于肺癌非脑转移组(P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著低于肺癌非脑转移组(P<0.05)。miR-21、PTEN表达水平与肺癌脑转移组患者组织分化程度、脑转移病灶数有关(P<0.05)。miR-21低表达、PTEN高表达肺癌脑转移患者无进展生存率和总生存率分别高于miR-21高表达患者、PTEN低表达患者(P<0.05);COX分析结果显示miR-21、PTEN表达水平、组织分化程度是肺癌脑转移患者不良预后发生的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-21在肺癌脑转移患者血清中表达上调,PTEN蛋白表达下调。

敲降miR-222-3p靶向PTEN对甲状腺癌^(131)Ⅰ放疗抵抗的影响及其机制

目的:探讨miR-222-3p通过人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白合同源基因(PTEN)对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-222-3p在甲状腺癌131Ⅰ放疗抵抗中的作用及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人甲状腺癌细胞和人正常甲状腺滤泡上皮Nth-ori 3-1细胞中miR-222-3p表达水平。以人甲状腺癌K1细胞和放射抗性K1(K1R)细胞为研究对象,实验分为空白对照组、131Ⅰ处理组、131Ⅰ+miR-222-3p敲降组、131Ⅰ+PTEN过表达组和131Ⅰ+PTEN过表达+miR-222-3p过表达组。空白对照组K1和K1R细胞不经任何处理,131Ⅰ处理组K1和K1R细胞经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+miR-222-3p敲降组K1和K1R细胞转染miR-222-3p inhibitor后再经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+PTEN过表达组K1和K1R细胞转染PTEN过表达载体后再经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+PTEN过表达+miR-222-3p过表达组K1和K1R细胞同时转染PTEN过表达载体和miR-222-3p mimic后再经1和3 Gy131Ⅰ处理。克隆形成实验检测K1和K1R细胞克隆形成数,CCK-8实验检测K1和K1R细胞增殖活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测K1和K1R细胞凋亡率,Western blotting检测K1和K1R细胞中PTEN蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-222-3p与PTEN的靶向关系。结果:与Nth-ori 3-1细胞比较,甲状腺癌细胞中miR-222-3p表达水平升高(P<0.01);且甲状腺癌K1R细胞中miR-222-3p表达水平高于甲状腺癌K1细胞(P<0.01)。与131Ⅰ处理组比较,131Ⅰ+miR-222-3p敲降组K1和K1R细胞克隆形成数减少(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01)。与miR-NC-PTEN-WT组比较,miR-222-3p-PTEN-WT组HEK-293细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01)。与敲降前比较,敲降miR-222-3p后K1和K1R细胞中PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01)。与131Ⅰ+PTEN过表达组比较,131Ⅰ+PTEN+miR-222-3p过表达组K1和K1R细胞克隆形成数增加(P<0.01),细胞增殖活性升高(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲降miR-222-3p靶向PTEN并上调其表达水平可以缓解甲状腺癌131Ⅰ的放疗抵抗。

PTEN与P-AKT在胃癌中的表达及意义

目的:检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)与磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(P-AKT)在胃癌和癌旁组织中的表达,探讨它们在胃癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EliVision法,检测68例胃癌及其癌旁组织中PTEN和P-AKT蛋白表达水平,同时对68例胃癌和癌旁组织采用反转录-聚合酶链反应检测其中PTEN mRNA的表达。结果:PTEN蛋白在胃癌组织中表达低于癌旁组织(P<0.01),P-AKT蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.01),两者呈负相关关系(P<0.05)。胃癌组织中PTEN蛋白的表达在性别和年龄间差异均无统计学意义(P>0.05),但在分化程度、肿瘤大小、临床分期和淋巴结转移表达差异均有统计意义(P<0.01)。胃癌组织中P-AKT蛋白表达在性别、年龄和肿瘤大小间差异均无统计学意义(P>0.05),但在分化程度、临床分期和淋巴结转移间表达差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织PTEN mRNA的半定量表达明显低于癌旁组织PTEN mRNA的半定量表达(P<0.01)。结论:PTEN基因在胃癌组织中低表达,癌旁组织蛋白表达也明显高于胃癌组织,P-AKT蛋白在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,两者在胃癌中的表达呈负相关。

左西孟旦对缺氧复氧诱导的H9c2细胞凋亡、PTEN和PI3K/Akt信号通路的影响

[目的]研究左西孟旦对缺氧复氧(H/R)条件下H9c2细胞凋亡的影响及相关机制。[方法]体外培养H9c2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组。采用四甲基偶氮噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性及MDA含量;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,H/R组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著降低,Bax显著升高(P<0.05)。与H/R组比较,左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高,Bax显著降低(P<0.05);且左西孟旦剂量越高,上述指标的相应变化越明显。[结论]左西孟旦可能通过抑制PTEN并激活PI3K/Akt信号通路,促进H/R条件下H9c2细胞增殖,抑制细胞氧化应激和凋亡。

PTEN和p53在肝细胞癌中的表达及其相关性

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)和p53蛋白的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学EliVision方法测定70例HCC组织和40例相应的癌旁组织中PTEN和p53蛋白的表达,分析两个指标与临床病理特征之间的关系以及它们之间的相关性。结果:PTEN在HCC组织中的阳性率为57.1%,显著低于癌旁组织的95.0%(P<0.01)。在肿瘤分期晚和有淋巴结转移的患者中,PTEN表达均降低(P<0.01)。p53蛋白在HCC组织中表达率为60.0%,显著高于癌旁组织的15.0%(P<0.01)。在肿瘤大小、病理分级、TNM分期和淋巴结转移等临床病理指标上,p53蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。PTEN与p53蛋白表达在HCC组织中呈负相关关系(P<0.05)。结论:PTEN低表达与HCC进展有关,有可能作为评价肝癌预后的指标。

乳腺癌组织中血管内皮生长因子-D和PTEN的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子-D(VEGF-D)和10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白异常表达的作用及其临床意义。方法:应用免疫组织化学S-P法检测90例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺良性增生性病变组织中VEGF-D蛋白和PTEN蛋白的表达;结合临床病理指标进行分析。结果:乳腺癌组织中VEGF-D蛋白和PTEN蛋白表达与良性增生性病变组织中表达差异均有统计学意义(P<0.01)。VEGF-D蛋白阳性表达在淋巴结有无转移、雌激素受体阳性与阴性表达间差异均有统计学意义(P=0.03和P<0.05)。PTEN蛋白的阴性表达在淋巴结有无转移、雌激素受体阳性及阴性表达间差异均有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌组织中VEGF-D蛋白与PTEN蛋白表达呈显著负相关关系(P<0.01)。结论:VEGF-D和PTEN蛋白异常表达参与了乳腺癌的浸润和转移;VEGF-D和PTEN表达存在相关性。

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P<0.05)。结论在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。