调控HER4-PI3K/AKt轴对骨肉瘤恶性生物学行为和干性表达的影响

目的探讨HER4基因操控对骨肉瘤细胞的恶性生物学特征和干细胞样特点的影响以及可能的机制。方法用Qrt-PCR、western blotting方法分析HER4 mRNA以及蛋白水平。MTT法和集落形成法被用来评价MG-63细胞活性和增殖能力。短发夹RNA(shRNA)干扰预处理、菌落形成、迁移、侵袭和western blotting实验确定HER-4调节骨肉瘤细胞增殖和侵袭/迁移的机制。采用球形成实验和CD133+细胞群检测HER-4诱导的干细胞样特征。结果HER4在骨肉瘤细胞中过表达。Sh-HER4表现出明显的细胞活力、集落形成和侵袭/迁移抑制能力。此外,HER4的敲除显著降低了CD133阳性细胞的球形大小和比例,以及干细胞标志物的表达。从机制上看,HER4通过失活PI3K/AKT通路促进骨肉瘤进展。结论综上所述,这些结果表明HER4是骨肉瘤进展和干细胞调节的一个新靶点,可能对开发治疗骨肉瘤的方法有价值。

CHMP4C通过调控PI3K/AKT信号通路影响NSCLC细胞增殖与凋亡

目的:探究染色质修饰蛋白4C(CHMP4C)对非小细胞肺癌(NSCLC)进展及顺铂敏感性的影响及其机制。方法:通过免疫组化检测CHMP4C在NSCLC癌组织和癌旁组织中的表达情况。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CHMP4C在NSCLC细胞系中的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和细胞克隆实验检测细胞活力及半数抑制浓度IC50;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Western blot分析细胞凋亡相关蛋白(caspase 3、Bad)及PI3K/AKT信号通路中关键蛋白的表达水平。另外,我们采用动物模型进一步验证CHMP4C对体内肿瘤生长的影响。结果:CHMP4C在NSCLC癌组织和细胞系中高表达,与肿瘤T分期显著相关(P<0.05)。敲低CHMP4C抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并将细胞阻滞在S期(P<0.05)。敲低CHMP4C可抑制PI3K/AKT信号通路活化,然而激活PI3K/AKT信号通路逆转了CHMP4C敲低对NSCLC细胞的影响(P<0.05)。利用顺铂处理细胞后发现NSCLC细胞生长受抑制,且CHMP4C表达降低;敲低CHMP4C联合顺铂治疗明显诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05)。在动物实验中,CHMP4C敲低的肿瘤体积小于对照组,其ki67表达显著降低,而caspase 3表达升高(P<0.05)。结论:CHMP4C在NSCLC癌组织及细胞系中高表达,在体内及体外实验中敲低CHMP4C可抑制NSCLC细胞增殖,促进细胞凋亡,增强顺铂治疗的敏感性;CHMP4C可能通过PI3K/AKT信号通路参与NSCLC进展与顺铂耐药。

生理病理状态下PI4KⅢβ的调控机制

磷脂酰肌醇4激酶是磷脂酰肌醇信号通路的起始和关键分子。其中,Ⅲ型磷脂酰肌醇4-激酶β亚型(PI4KⅢβ)参与合成高尔基体PI4P库,在众多生理过程中发挥重要作用;同时,该酶是介导一些致病性RNA病毒复制的重要宿主因子,也参与了细菌感染以及疟疾等病理过程。研究表明,PI4KⅢβ的功能受众多因素调控,包括宿主和病毒蛋白结合伴侣等。该综述将对PI4KⅢβ的结构及其生理病理调控机制进行探讨。

绿原酸联合连翘苷调控细胞因子风暴的网络药理分析及基于TLR4/TRAF6/PI3KC3通路的协同抗炎作用

目的基于网络药理学和体外实验探究绿原酸联合连翘苷调控细胞因子风暴的机制。方法利用Swiss Target Prediction、PharmMapper、SEA和TCMSP数据库预测绿原酸和连翘苷的靶点,在GeneCards、OMIM、DRUGBANK和DisGeNET数据库获取细胞因子风暴的靶点,筛选交集靶点绘制Venn图,以STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络,采用DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。以脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞构建细胞因子风暴模型;采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测巨噬细胞存活率;采用Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TNF受体相关因子(TRAF4)、TNF受体相关因子6(TRAF6)、磷酸肌醇-3-激酶3(PIK3C3)蛋白表达。结果网络药理分析获得绿原酸联合连翘苷治疗细胞因子风暴的8个核心网络靶点[丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、白蛋白(ALB)、低氧诱导因子1α(HIF1A)、IL-6、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、酪氨酸激酶(SRC)、Toll样受体4(TLR4)];富集关键通路包括PI3K/AKT信号通路等。体外实验结果显示,与对照组比较,模型组中NO、TNF-α、IL-6的释放量和iNOS、COX-2蛋白表达量均显著升高(P<0.001)。与模型组比较,给药后NO、TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2的水平均显著降低(P<0.001)。与单药给药组比较,绿原酸和连翘苷(1∶1)联合用药组炎症指标下降更明显(P<0.001)。与模型组比较,给药组TLR4、TRAF6、PI3K3C的蛋白表达和PI3K3C的磷酸化水平显著下降。结论绿原酸联合连翘苷能协同抑制促炎细胞因子的表达,调控细胞因子风暴,可能通过TLR4/TRAF6/PI3K3C信号通路实现。

miR-361介导PI3K/Akt/Ca^(2+)通路对大鼠肥大细胞增殖情况及组胺与IL-4表达水平的影响

目的:探讨miR-361介导PI3K/AKt/Ca^(2+)通路对活化大鼠肥大细胞增殖情况及组胺与白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将大鼠肥大细胞(RBL-2H3细胞)分为miR-361过表达组、miR-361抑制组、miR-361对照组和正常对照组,miR-361过表达组、miR-361抑制组、miR-361对照组细胞分别转染miR-361过表达、miR-361抑制及miR-361无义序列寡核苷酸片段,测定并比较各组细胞miR-361 mRNA、组胺、IL-4及PI3K/AKt/Ca^(2+)通路相关蛋白水平。结果:miR-361过表达组细胞miR-361 mRNA相对表达水平高于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,miR-361过表达组24、48、72 h细胞增值率均低于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测结果显示,miR-361过表达组细胞组胺和IL-4水平的表达水平低于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,miR-361过表达组细胞p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K蛋白表达水平均高于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-361过表达可抑制大鼠肥大细胞的增殖,降低组胺与IL-4的表达水平,其作用机制可能与其能够提高PI3K/AKt/Ca^(2+)通路活性有关。

木犀草素通过TLR4/PI3K/AKT通路对子痫前期大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响

目的:探究木犀草素通过Toll样受体4(TLR4)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对子痫前期(PE)大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(40 mg/kg)组、TLR4过表达载体组、TLR4空载组、木犀草素(40 mg/kg)+TLR4过表达载体组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯(LNAME)制备PE模型,以药物分组处理后,测定各组大鼠妊娠晚期平均动脉压及24 h尿蛋白含量,检测各组大鼠平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31(血管标志物)阳性细胞比例、胎盘细胞凋亡比例,血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17水平及胎盘组织凋亡相关蛋白、TLR4/PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、BCL2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、木犀草素+TLR4过表达载体组分别相比,木犀草素组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05),TLR4过表达载体组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,TLR4空载组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:木犀草素可通过下调TLR4/PI3K/AKT通路表达,降低PE大鼠平均动脉压,缓解妊娠后期高血压与蛋白尿症状,抑制炎症,增强胎盘血管生成,减轻胎盘组织损伤及细胞凋亡,提高妊娠大鼠子代存活率。

Polo样激酶4抑制剂Centrinone通过调控PI3K/AKT通路影响胃癌细胞增殖和凋亡

目的:探讨Polo样激酶4(PLK4)抑制剂Centrinone对胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响并进一步研究其抗肿瘤机制。方法:在TCGA数据库中分析PLK4基因在胃癌及癌旁组织的表达及对预后的影响;在人类蛋白组数据库中分析PLK4在胃癌组织中的定位;利用不同浓度(0、1、2、5μmol/L)的Centrinone处理不同胃癌细胞系,再通过CCK8法检测细胞生长情况;用transwell小室检测Centrinone对AGS细胞迁移能力的影响;用流式细胞术检测AGS细胞凋亡的情况;通过Western blot检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)、BCL-2、BAX等的变化。结果:通过TCGA数据库分析发现PLK4在胃癌中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05),且与胃癌预后相关(P=0.001)。细胞生长实验显示Centrinone对AGS、BGC和SGC均有显著的生长抑制作用,其中AGS最敏感(IC50=1.386μmol/L)。细胞迁移实验提示Centrinone浓度越大,胃癌细胞迁移的数量越少(P<0.05)。流式细胞术实验结果显示Centrinone浓度越大,细胞凋亡比例越高(P<0.05)。Western blot结果显示Centrinone浓度越大,凋亡相关蛋白PARP和Caspase-3的裂解体表达量增多越明显(P<0.05),BCL-2蛋白表达量减少越明显(P<0.05),而BAX的蛋白表达量变化不明显(P>0.05),同时检测发现PI3K和AKT的磷酸化蛋白表达量显著减少(P<0.05)。结论:PLK4抑制剂Centrinone可以显著抑制胃癌细胞增殖和迁移,并诱导细胞凋亡,可能通过抑制BCL-2表达及对PI3K/AKT信号通路调控发挥作用。

C1q样蛋白4通过PI3K/Akt信号通路调节乳腺癌干细胞特性和上皮间质转化

目的:初步探讨C1q样蛋白4(C1ql4)对乳腺癌干细胞特性及上皮间质转化的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调细胞株BT549中C1ql4的表达,采用RT-qPCR法及Western blot法验证C1ql4的沉默,并将后续实验分为空白组、对照组(si-NC组)及C1ql4沉默组(si-C1ql4组)。采用RT-qPCR法及Western blot法分别对各组细胞干性相关指标(CD44、Nanog、OCT4)及EMT相关指标(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin)的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况、CD44^(+)CD24^(-/low)细胞含量变化,成球试验比较各组细胞成球能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力。Western blot法检测信号通路蛋白表达水平,探索C1ql4影响乳腺癌细胞干性及对上皮间质转化可能的机制。结果:下调C1ql4表达后,si-C1ql4组CD44、Nanog、OCT4、Vimentin及N-cadherin的mRNA和蛋白表达量,乳腺癌干细胞含量、迁移能力及成球能力均低于空白组和si-NC组;E-cadherin mRNA和蛋白表达量、细胞凋亡率均高于其他两组;PI3K和Akt的蛋白表达水平及磷酸化水平也明显低于空白组和si-NC组,差异均具有统计学意义(P<0.05),而空白组和si-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:C1ql4可促进乳腺癌细胞干性表达及乳腺癌细胞的上皮间质转化,还可增强乳腺癌细胞成球、迁移能力,抑制瘤细胞凋亡,且作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。

整合素β4通过PI3K/AKT/mTOR促进HCC增殖和迁移

目的 比较整合素β4(ITGB4)在不同肝癌细胞系和正常肝细胞中的表达差异,探讨ITGB4在肝细胞癌(HCC)中发挥的生物学效应以及调控其生物学效应的机制。方法 选取3种不同的肝癌细胞系SK-HEP-1、Huh7和HepG2以及正常肝细胞系L02,利用Western blot检测ITGB4在不同细胞系中的表达情况,并利用免疫荧光染色方法检测ITGB4在Huh7和HepG2之间的表达情况。选取低表达ITGB4的HepG2细胞和高表达ITGB4的Huh7细胞分别进行过表达ITGB4和RNAi技术敲低ITGB4。通过EdU-594、克隆形成实验探讨ITGB4对HCC增殖能力的影响;利用划痕愈合实验和Transwell等实验探讨ITGB4对HCC迁移和侵袭能力的影响。通过Western blot探讨ITGB4调控的信号通路的激活与抑制对HCC增殖、迁移等生物学效应的影响。结果 HCC中ITGB4表达升高(P<0.01),上调ITGB4激活HCC细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路,并促进HCC细胞的增殖和迁移(P<0.01),沉默ITGB4则显著下调PI3K/AKT/mTOR信号通路活化水平,加入PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制剂PKI-587后逆转了ITGB4介导的HCC增殖、迁移和侵袭等效应(P<0.01)。结论 与正常肝细胞相比,ITGB4在肝癌细胞系中高表达,并且ITGB4通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进HCC的发生发展。

电针对代谢综合征大鼠糖脂代谢和IRS-1/PI3K/Akt/GLUT4信号通路的影响

【目的】探讨电针对代谢综合征(MS)大鼠糖脂代谢和胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路的影响。【方法】采用高脂高糖高盐饲料喂养方法构建代谢综合征大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、二甲双胍组和电针组,另设正常组。二甲双胍组大鼠给予盐酸二甲双胍片的生理盐水混悬液灌胃,电针组大鼠给予关元、中脘、足三里、丰隆穴电针治疗,正常组和模型组大鼠只固定,不针刺。连续干预21 d后,测量大鼠体质量、腹腔脂肪质量和血压,计算Lee’s指数和体脂比,检测空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂、脂肪酸(FFA)、脂联素(APN),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);分别采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western Blot法检测肝脏组织IRS-1、PI3K、Akt、GLUT4的mRNA和蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色法观察肝脏和胸主动脉病理变化。【结果】与正常组比较,模型组大鼠体质量、Lee’s指数、腹腔脂肪质量、体脂比、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、FPG、FINS、HOMA-IR、总胆固醇(TG)、甘油三酯(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FFA水平升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、APN水平降低(P<0.05),肝脏IRS-1、PI3K、Akt、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),HE染色结果显示肝脏脂肪变性和胸主动脉粥样硬化。与模型组比较,电针组和二甲双胍组大鼠体质量、Lee’s指数、腹腔脂肪质量、体脂比、SBP、DBP、FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C、FFA水平降低(P<0.05),HDL-C、APN水平升高(P<0.05),肝脏IRS-1、PI3K、Akt、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),HE染色结果显示肝脏脂肪变性和胸主动脉粥样硬化明显减轻。电针组和二甲双胍组上述指标改变差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】电针可以改善代谢综合征大鼠的糖脂代谢,其机制可能与上调IRS-1/PI3K/Akt/GLUT4通路蛋白表达有关。

基于PI3K/Akt/AS160/GLUT4通路探讨芪丹颗粒改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用机制

【目的】探讨芪丹颗粒对2型糖尿病(T2DM)大鼠模型胰岛素抵抗(IR)的治疗作用与机制。【方法】实验分5组:正常组、模型组、芪丹颗粒低剂量组、芪丹颗粒高剂量组及二甲双胍组。除正常组,其他各组采用高糖高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立2型糖尿病大鼠模型。对应给药后,检查各组大鼠体质量,空腹血糖,血脂谱[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMAIR),分别采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western Blot法对应检测肝脏组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、160 kDa的Akt底物(AS160)和葡萄糖转运体4(GLUT4)的mRNA、蛋白表达变化。【结果】芪丹颗粒干预后可降低2型糖尿病大鼠体质量、空腹血糖值,改善TC、TG、HDL-C、LDL-C水平,降低HOMA-IR值,上调肝脏组织PI3K、Akt、GLUT4的mRNA表达量,上调肝脏组织p-PI3K、Akt、p-Akt、p-AS160、GLUT4的蛋白表达量,差异均有统计学意义(P<0.05),且对指标的改善作用与二甲双胍相当(P>0.05)。【结论】芪丹颗粒可改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,其机制与促进PI3K/Akt/AS160/GLUT4信号通路激活有关。

基于IRS-1/PI3K/AKT/GLUT4通路探讨二苯乙烯类化合物改善胰岛素抵抗作用机制

[目的]探讨3种中药(虎杖、桑白皮、何首乌)来源的二苯乙烯类化合物改善胰岛素抵抗(IR)的作用机制。[方法]利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于3T3-L1脂肪细胞96 h建立IR细胞模型;采用噻唑蓝(MTT)法检测二苯乙烯类化合物白藜芦醇(RES)、虎杖苷(PD)、桑皮苷A(Mul A)、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡糖糖苷(THSG)对脂肪细胞生存率的影响;葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基上清液中葡萄糖含量;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷酸化IRS-1(p-IRS-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、葡萄糖转运体4(GLUT4)的蛋白表达水平;采用实时定量荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GLUT4 mRNA表达水平。[结果]与空白对照组相比,模型组的葡萄糖消耗量显著下降,模型组的p-IRS-1(Ser307)蛋白表达显著增加,p-PI3K、p-AKT(Ser473)、GLUT4蛋白表达显著下降,模型组GLUT4 mRNA表达显著降低;与模型组相比,RES、Mul A、THSG组的葡萄糖消耗量显著增加,PD组的葡萄糖消耗量无明显变化,Mul A、THSG组均能显著逆转p-IRS-1(Ser307)、p-PI3K、p-AKT(Ser473)、GLUT4的蛋白表达,RES仅能够逆转p-IRS-1(Ser307)、GLUT4的蛋白表达;与模型组相比,THSG组GLUT4 mRNA表达显著增加。[结论]Mul A、THSG能够通过IRS-1/PI3K/AKT/GLUT4信号通路改善脂肪细胞IR,而RES则通过激活IRS-1和GLUT4,但不通过PI3K/AKT途径发挥改善脂肪细胞IR的作用。PD无降糖活性。

胃癌患者外周血INPP4B表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及PI3K/AKT通路的关系

目的探讨胃癌患者外周血Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(INPP4B)表达水平与临床病理特征、化疗敏感性及磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的关系。方法选取2018年12月至2019年12月医院收治的79例晚期胃癌患者作为研究组,另外选取同期于医院体检的健康体检者40例作为对照组。比较研究组与对照组外周血INPP4B表达水平,分析外周血INPP4B与晚期胃癌患者临床病理特征之间的关系。研究组接受含奥沙利铂的方案化疗,根据化疗2个周期后的临床疗效将研究组患者分为敏感组和抵抗组,比较两组外周血INPP4B及外周血PI3K和AKT mRNA表达水平,采用Pearson分析外周血INPP4B与PI3K和AKT mRNA水平的相关性。以INPP4B mRNA水平的中位数将研究组患者分为高表达组(≥0.25)与低表达组(<0.25),采用Kaplan-Meier分析生存曲线。结果研究组外周血中INPP4B mRNA的相对表达量低于对照组(P<0.05)。Ⅳ期胃癌患者外周血INPP4B mRNA低表达占比高于ⅢB期患者(P<0.05)。抵抗组的INPP4B mRNA表达水平低于敏感组,抵抗组PI3K和AKT mRNA表达水平高于敏感组(P<0.05)。化疗前研究组胃癌患者外周血INPP4B mRNA表达水平与PI3K和AKT mRNA表达水平呈负相关(r=-0.551、-0.312,P<0.05)。高表达组与低表达组的中位生存时间为12.00个月(95%CI:10.515~13.954)和11.00个月(95%CI:10.046~12.794),2组中位累积生存曲线比较,差异具有统计学意义(Log rankχ^(2)=7.669,P=0.006)。结论外周血INPP4B与胃癌晚期TNM分期、化疗敏感程度及预后生存有关,且INPP4B调控化疗抗性的机制可能与负调控PI3K/AKT通路有关。

TRPV4激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对PI3K/AKT/eNOS通路的影响

【目的】探讨瞬时受体电位香草素受体亚型4(TRPV4)激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及相关机制。【方法】72只大鼠随机分为Sham组、I/R组、4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4α-PDD)组、LY294002组,每组18只。建模前30 min,4α-PDD组尾静脉注射4α-PDD 0.2 mg/kg,LY294002组尾静脉注射4α-PDD 0.2 mg/kg和LY2940020.5 mg/kg,Sham组、I/R组尾静脉注射等体积生理盐水,均为一次性给药。I/R后24 h检测大鼠神经功能和脑梗死体积;检测离体脑基底动脉(CBA)舒张功能;免疫印迹法检测脑组织蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p-eNOS蛋白表达。【结果】与I/R组比较,4α-PDD组神经功能评分降低,脑梗死体积减小(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组神经功能评分升高,脑梗死体积增大(P<0.05)。与Sham组比较,I/R组CBA舒张率增加(P<0.05);与I/R组比较,4α-PDD组CBA舒张率增加(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组CBA舒张率降低(P<0.05)。HE染色结果显示,Sham组海马神经元核仁清晰、着色均匀、染色质少,排列整齐、胞体表现为椭圆形或圆形;I/R组神经元大量变形、坏死,胞核浓缩、固染,排列杂乱;4α-PDD组、LY294002组神经元数量较I/R组增加,坏死程度改善,其中4α-PDD组改善程度优于LY294002组。与Sham组比较,I/R组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与I/R组比较,4α-PDD组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与4α-PDD组比较,LY294002组p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS降低(P<0.05)。【结论】TRPV4激动剂可改善脑I/R大鼠神经功能及海马区病理变化,促进CBA舒张,减小脑梗死体积,其可能通过激活PI3K/AKT/eNOS通路来实现。

Inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinases:functions and regulations

Inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase (IP3 3-kinase/IP3K) plays an important role in signal transduction in animal cellsby phosphorylating inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) to inositol 1,3,4,5-tetrakisphosphate (IP4). Both IP3 and IP4 arecritical second messengers which regulate calcium (Ca2+) homeostasis. Mammalian IP3Ks are involved in many biologicalprocesses, including brain development, memory, learning and so on. It is widely reported that Ca2+ is a canonicalsecond messenger in higher plants. Therefore, plant IP3K should also play a crucial role in plant development. Recently,we reported the identification of plant IP3K gene (AtIpk2β/AtIP3K) from Arabidopsis thaliana and its characterization.Here, we summarize the molecular cloning, biochemical properties and biological functions of IP3Ks from animal, yeastand plant. This review also discusses potential functions of IP3Ks in signaling crosstalk, inositol phosphate metabolism,gene transcriptional control and so on.

小檗碱改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗与PI-3K、GLUT4蛋白相关性的研究

目的观察小檗碱对2型糖尿病大鼠骨骼肌组织磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI-3K)之p85亚基、葡萄糖转运子4(glucose transporter4,GLUT4)蛋白表达的影响,以探讨小檗碱改善胰岛素抵抗,防治2型糖尿病的分子机制。方法采用尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,30mg.kg-1)加高脂高热量饲料喂养的方法建立2型糖尿病大鼠模型,以小檗碱干预10wk,检测血糖和血清胰岛素,用Western blot方法检测小檗碱干预后2型糖尿病大鼠骨骼肌组织PI-3K之p85亚基、GLUT4蛋白表达水平。结果小檗碱干预的2型糖尿病大鼠骨骼肌组织PI-3K之p85亚基、GLUT4蛋白表达水平均较模型组显著增加。结论小檗碱对2型糖尿病的治疗效应可能与提高骨骼肌组织中PI-3K之p85亚基、GLUT4蛋白表达水平有关。

MicroRNA-155通过调节CXCR4/PI3K/AKT途径影响滋养细胞的侵袭与迁移

目的:以人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞为研究对象,结合该细胞侵袭和迁移能力的变化情况,研究转染miR-155 mimics和miR-155 inhibitor之后CXCR4的表达变化及其对下游PI3K/AKT信号通路的影响作用,从而探讨miR-155参与子痫前期发生发展的分子机制。方法:设计miR-155 mimics和miR-155 inhibitor,对JEG-3进行转染,通过Transwell侵袭实验、划痕实验,观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化;利用Real-time PCR检测CXCR4 mRNA的表达;利用Western blot检测CXCR4及下游p-AKT蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR结果显示,miR-155 mimics转染组CXCR4 mRNA相对表达量(0.589±0.096)明显低于空白对照组(1.503±0.090)和阴性对照组(1.146±0.153),差异有统计学意义(P<0.05);miR-155 inhibitor转染组CXCR4 mRNA相对表达量(1.739±0.083)与两组对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示miR-155 mimics转染组CXCR4蛋白和下游p-AKT蛋白表达水平均明显降低,而miR-155 inhibitor转染组CXCR4和p-AKT蛋白水平则升高,与空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,与空白对照组(63.46±2.37)和阴性对照组(49.29±5.81)侵袭细胞数相比,miR-155 mimics转染组侵袭细胞数(22.89±9.42)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,miR-155 inhibitor转染组侵袭细胞数(81.50±11.25)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,转染miR-155 mimics后,JEG-3细胞相对迁移距离(0.159±0.058)低于空白对照组(1.080±0.045)和阴性对照组(0.823±0.201),差异有统计学意义(P<0.05);而miR-155 inhibitor转染组,JEG-3细胞相对迁移距离(1.640±0.078)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155可能通过抑制CXCR4的表达进而抑制其下游PI3K/AKT信号通路的活化,从而影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,最终导致子痫前期的发生发展。

急、慢性运动对2型糖尿病大鼠脂肪PI3K/AKT/GLUT4通路的影响

目的:探讨急性和慢性运动对2型糖尿病(T2DM)大鼠脂肪组织明磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/葡萄糖运载体4(GLUT4)信号通路的影响。方法:15月龄SD雄性大鼠52只随机分为正常对照组(n=13)和高脂组(n=39),分别喂养普通和高脂饲料。8周后,高脂组体重>正常对照组20%,注射小剂量STZ后,血糖>16.7 mmol/l,造模成功。将糖尿病模型组随机分为糖尿病对照组(DC,n=13),糖尿病慢性运动组(DCE,n=13),糖尿病急性运动组(DAE,n=13)。DCE组进行8周的游泳运动,DAE组进行一次性游泳运动。测定血脂,血糖和血清胰岛素,Western blot法测定脂肪PI3K、AKT和GLUT4蛋白含量。结果:糖尿病组体重、血脂、血糖、胰岛素显著高于正常对照组(P均<0.01);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平降低(P<0.05),脂肪组织中PI3K、AKT和GLUT4蛋白表达下降(P均<0.01)。糖尿病慢性运动组体重、血脂、血糖、胰岛素均出现显著性下降(P均<0.01);HDL-C升高(P<0.05),脂肪PI3K、AKT和GLUT4蛋白表达上升(P<0.01)。糖尿病急性运动组血脂、血糖、胰岛素下降(P均<0.05);HDL-C升高(P<0.05),脂肪PI3K、AKT和GLUT4含量显著上升(P均<0.05)。结论:①高脂饮食结合小剂量STZ诱导的T2DM大鼠脂肪组织PI3K/AKT通路受损,降低了胰岛素的敏感性。②急性、慢性有氧运动,均可以通过PI3K/AKT通路,改善糖脂代谢紊乱,慢性运动略优于急性运动。

加味温胆汤调控INSR/PI3K/Akt/GLUT4信号通路抗雄性幼鼠营养性肥胖机制研究

目的通过观察加味温胆汤对雄性营养性肥胖幼鼠INSR/PI3K/Akt/GLUT4信号通路相关指标含量及mRNA表达的影响,探讨该方抗雄性幼鼠营养性肥胖的机制。方法 60只SD雄性幼鼠按体质量随机分为正常对照组、模型对照组、加味温胆汤高、中、低剂量组(8.6、4.3、2.15 g·kg^(-1));采用"高脂乳剂+拌油饲料"喂养复制幼鼠营养性肥胖模型,灌胃给药,连续5周,分离血清和骨骼肌组织,采用酶联免疫法(ELisa)检测血清甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素(INS)及骨骼肌INS、胰岛素受体(INSR)、葡萄糖转运体4(GLUT4)含量,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测骨骼肌胰岛素受体底物2(IRS2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B2(Akt2)和GLUT4 mRNA表达水平。结果与模型对照组比较,加味温胆汤高剂量组可显著降低幼鼠Lee’s指数、血清TG水平,升高血清HDL-C、骨骼肌GLUT4含量,上调骨骼肌IRS2 mRNA表达水平;加味温胆汤中剂量组可降低幼鼠血清LDL-C水平,升高骨骼肌组织INSR、GLUT4含量,上调骨骼肌IRS2、PI3K、Akt2和GLUT4 mRNA表达;加味温胆汤低剂量组可升高骨骼肌INSR水平,并上调骨骼肌PI3K mRNA的表达水平。以上结果均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论加味温胆汤抗雄性幼鼠营养性肥胖的机制与上调幼鼠骨骼肌INSR及IRS2 mRNA表达水平,激活胰岛素受体后PI3K/Akt/GLUT4信号通路,调节脂肪、葡萄糖等代谢有关,其中高、中剂量组作用突出。

三硝基苯磺酸/乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及电针的干预作用

目的探讨三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及电针的干预作用。方法雄性Wistar大鼠240只,随机分为正常对照组、模型组、电针组、TLR4单克隆抗体(TLR4mAb)组、LY294002组和TLR4mAb-LY294002联合治疗(T&L)组。以TNBS/乙醇溶液灌肠诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,电针组造模同时给予电针足三里穴治疗,TLR4mAb组给予TLR4mAb腹腔注射,LY294002组则予LY294002注射液腹腔注射,T&L组则同时给与上述TLR4mAb和LY294002腹腔注射,共4周,每日行疾病活动指数(DAI)评分。造模4周后处死大鼠取结肠组织标本,评价结肠黏膜损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI);免疫印迹法测定结肠黏膜磷酸化AKT(P-AKT)和活化NF-κB含量;RT-PCR法检测结肠组织中TLR4mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、NF-κB mRNA、TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组结肠组织TLR4mRNA、PI3K mRNA、P-AKT、活化NF-κB、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达和DAI、CMDI及TDI均显著升高(P<0.01);与模型组比较,TLR4mAb组TLR4mRNA表达显著下降(P<0.01),LY294002组PI3K mRNA、P-AKT表达显著下降(P<0.01),而在电针组和T&L组TLR4mRNA、PI3K mRNA及P-AKT表达均明显降低(P<0.01);与上述变化相对应,与模型组相比,各治疗组活化NF-κB、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达和DAI、CMDI及TDI均明显降低(P<0.05或P<0.01),电针组和T&L组上述6指标优于TLR4mAb组和LY294002组,活化NF-κB与TNF-αmRNA及IL-1βmRNA表达呈正相关(r1=0.579,P<0.05;r2=0.561,P<0.05)。结论电针足三里穴能显著降低实验性溃疡性结肠炎大鼠的NF-κB活性及TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达,从而减轻结肠组织损害程度,这与其阻断TLR4/NF-κB和PI3K/AKT/NF-κB信号通路有密切关系。