胶质瘤中MKK7与c-Jun磷酸化的表达及其相关性

目的探讨胶质瘤中MKK7和c-Jun磷酸化(p-c-Jun)的表达及意义,分析两者表达的相关性。方法选取弥漫型星形细胞瘤(15例)、少突胶质细胞瘤(5例)、间变性星形细胞瘤(11例)、间变性少突胶质细胞瘤(8例)、胶质母细胞瘤(53例)及其瘤旁正常脑组织(25例)共117例,采用免疫组织化学法检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达。体外培养神经胶质瘤细胞株U87,用脂质体转染MKK4-siRNA、MKK7-siRNA和对照siRNA,48h后Westernblot检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达水平。结果胶质母细胞瘤中p-c-Jun及MKK7的表达均明显高于其他组织学类型胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中的表达(P=0.000,P=0.000)。随着胶质瘤WHO分级的升高,p-c-Jun及MKK7的表达增高,且与WHO分级呈明显正相关(r=0.494,P=0.000;r=0.606,P=0.000)。胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中MKK7与p-c-Jun的表达存在正相关关系(r=0.387,P=0.000)。沉默神经胶质瘤细胞株U87MKK7表达抑制了c-Jun磷酸化水平。结论MKK7可以通过调控JNK/c-Jun活性进而促进胶质母细胞瘤的发生。

冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1及磷酸化c-Jun蛋白表达改变与冠状动脉病变特征的相关性

目的结合冠状动脉造影结果,探讨冠心病患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平改变与冠状动脉病变特征的关系。方法40例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者分为急性冠状动脉综合征组(n=24)和稳定型心绞痛组(n=16),另选取同期经冠状动脉造影证实无冠状动脉病变患者15例为对照组。采用免疫印迹法分别检测外周血单个核细胞基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1和磷酸化c-Jun蛋白表达水平,计算基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值,并结合Gensini冠状动脉病变积分标准评价其与冠状动脉管腔病变程度的线性关系及其在反映冠状动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用。结果①急性冠状动脉综合征组基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1、磷酸化c-Jun蛋白表达水平及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值较稳定型心绞痛组和对照组明显增高(均P<0.001)。②基质金属蛋白酶9、磷酸化c-Jun及基质金属蛋白酶9/组织型金属蛋白酶抑制剂1比值与Gensini冠状动脉病变积分呈正相关(r分别为0.433、0.476和0.457,均P<0.01);组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平与Gensini冠状动脉病变积分无相关性。③磷酸化c-Jun与基质金属蛋白酶9蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.839,P<0.001)。结论①急性冠状动脉综合征患者基质金属蛋白酶9、组织型金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平较稳定型心绞痛患者明显增高,其比例严重失调,反映了急性冠状动脉综合征患者冠状动脉管腔病变程度更为复杂且血管壁具有更多易损斑块;②核转录因子c-Jun活化可能参与了动脉粥样硬化中基质金属蛋白酶9表达的调控。

IgA肾病中磷酸化c-Jun氨基末端激酶与肾小管上皮细胞转分化关系的研究

目的检测IgA肾病(IgAN)患者肾小管间质中转化生长因子β(1TGF-β1)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用。方法参考IgAN病理类型HASS分级标准,把39例IgAN患者的肾活检标本,分为轻度增生组(HaasⅠ、Ⅱ型)、局灶增生组(HaasⅢ型)和增生硬化组(HaasⅣ、Ⅴ型)。据Katafuchi半定量积分标准评估肾小管间质损伤指数,用免疫组织化学技术检测TGF-β1、p-JNK、α-SMA在肾小管间质的表达。结果 IgAN各病变组肾小管间质损伤指数和TGF-β1、p-JNK、α-SMA表达均增高,且p-JNK与TGF-β1、α-SMA表达和肾小管间质损伤指数正相关。结论在IgAN患者肾组织中,JNK可能是调控TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化的关键细胞内信号。

小檗碱对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨小檗碱（berberine，BBR）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的人脐静脉血管内皮细胞humanumbilical vein endothelial cells，HUVECs）损伤的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞，不同浓度（1．25、2．5、5．0μmol／L）da檗碱预孵24h后加入5μg／mLLPS再刺激24h，采用EDU染色法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率，Westernblot法检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平。结果LPS作用后HUVECs损伤明显，细胞活性明显降低，G2/M期细胞比例减少，凋亡细胞增加，p-JNK的表达增加；经过BBR预处理后，细胞活性恢复，G2/M期细胞比例增加，凋亡细胞减少，p-JNK的表达下降，并呈剂量依赖关系。结论小檗碱可有效地减轻LPS诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤，其机制可能与减少凋亡和降低JNK的磷酸化水平有关。

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层p-JNK表达及神经细胞凋亡的影响

目的研究活化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的表达和垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)的影响、抑制细胞凋亡的机制。方法制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。72只大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注对照组、PACAP治疗组。缺血开始时治疗组静脉注射PACAP 2.5μg。再灌注后各时间点处死取脑,进行HE染色、p-JNK免疫组化染色和TUNEL法检测神经元凋亡。结果不同时间点PACAP组神经细胞缺血性损伤较缺血再灌注对照组减轻。缺血再灌注对照组p-JNK分别在2、48h成2次表达高峰,凋亡细胞较多;PACAP组再灌注后p-JNK表达下降,凋亡细胞减少。结论PACAP对局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,可抑制细胞凋亡,部分依赖于其可下调p-JNK表达。

脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶表达的影响

探讨脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶 (P -C -Jun)表达的影响和治疗机理。根据Roserberg法复制大鼠脑出血模型 ,采用免疫组织化学方法观察脑出血后梨状皮质内P -C -Jun的表达变化 ,并用组织病理学方法分析脑皮质内神经元的损伤状况。结果 :脑溢安治疗组较模型组脑内P -C -Jun蛋白表达弱 ,神经元受损状况轻。结论 :脑溢安下调脑内P -C -Jun蛋白表达 ,从而干预了丝裂原活化的蛋白激酶 (MAPK)信号转导通路。

吡格列酮对谷氨酸诱导皮质神经元损伤保护作用及其抑制JNK信号的机制

目的观察吡格列酮对谷氨酸所致培养皮质神经元损伤的保护作用及作用机制。方法大鼠乳鼠大脑皮质神经元,培养7d后用于实验。实验分为对照组、谷氨酸组、谷氨酸+吡格列酮组、谷氨酸+SP600125组、SP600125组。用MTT法测定细胞活力;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;免疫荧光染色法检测磷酸化活化转录因子2(phospho-ATF2)的表达;Western blot检测磷酸化JNK1和JNK1总量的蛋白表达水平。结果谷氨酸(100μmol.L-1)作用24h可使体外培养的皮质神经元细胞活力明显下降,细胞凋亡百分比明显增加,磷酸化JNK1蛋白水平(谷氨酸作用2h后检测)和磷酸化ATF2表达明显增加。吡格列酮明显对抗谷氨酸引起的皮质神经元损伤,同时明显抑制谷氨酸引起的磷酸化JNK1及磷酸化ATF2表达增多。JNK抑制剂SP600125明显对抗谷氨酸引起的神经元损伤及phos-pho-ATF2表达增多。结论吡格列酮对谷氨酸引起的培养皮质神经元损伤具有明显的保护作用,吡格列酮的保护作用与抑制JNK信号转导通路有关。

磷酸化C-JUN不参与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡

观察磷酸化 C- JUN与谷氨酸诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关系。在培养的小脑颗粒神经元建立谷氨酸凋亡模型 ;采用 MTT法分析细胞存活率 ,相差显微镜观察形态学 ,DNA凝胶电泳法分析细胞凋亡和原位细胞荧光免疫组织化学法检测磷酸化 C- JUN。结果显示 ,谷氨酸诱导大鼠小脑颗粒神经元细胞体积缩小 ,突触断裂、消失 ,DNA电泳呈典型的“梯状”条带 ;谷氨酸处理 2 4 h后细胞存活率为 2 8.6%± 5.2 %。神经元在谷氨酸处理 5,30 min及 1 ,2 ,4,8,1 6和 2 4 h后均未检测到有磷酸化 C- JUN阳性细胞 ,与去极化组 ( 2 5mmol/L KCl)相同。而复极化组 ( 5mmol/L KCl)则在 30 min检测到大量的磷酸化 C- JUN阳性细胞 ,4h荧光最强并持续。处理 4h后 ,40 0倍荧光显微镜下 ,复极化组、去极化组和谷氨酸组的磷酸化 C- JUN阳性细胞数分别为 1 2 4± 1 7,8± 3,5± 3。上述结果提示 ,谷氨酸诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,磷酸化 C- JUN不参与谷氨酸诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡。

皮肤烧伤愈合过程中磷酸化c-Jun的表达

目的观察烧伤后人皮肤磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的变化特点,初步探讨烧伤后创面愈合的分子机制。方法取12例烧伤后住院植皮患者的烧伤周边区皮肤为实验组;另取正常皮肤12例为对照组。应用免疫组织化学方法和常规HE染色检测p-c-Jun在皮肤烧伤周边区和正常皮肤组织中的变化情况。结果对照组p-c-Jun阳性颗粒主要定位于表皮细胞和内皮细胞中,阳性细胞率为(13.9±2.7)%;实验组p-c-Jun阳性颗粒主要定位于表皮细胞和部分炎细胞中,阳性细胞率上升至(47.2±8.6)%,明显高于对照组(P<0.01)。结论烧伤后人皮肤p-c-Jun的表达可能与创面愈合有关。

改良三甲散含药脑脊液对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症模型相关因子及蛋白表达的影响

目的探讨改良三甲散含药脑脊液对脂多糖(LPS)所诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响。方法将BV2细胞分为空白对照组,模型组,10.0%、5.0%、2.5%改良三甲散组,石杉碱甲组。细胞培养贴壁后,改良三甲散各组及石杉碱甲组分别加入10.0%、5.0%、2.5%、10.0%含药脑脊液,37℃孵育2 h后除空白对照组均加入LPS(终浓度为1 mg/L),继续孵育24 h后收集培养上清,提取蛋白样品。应用硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;ELISA法检测各组细胞培养上清中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;Western blot法检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果模型组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显升高,p-JNK表达上调;10%、5%改良三甲散组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显下降,p-JNK表达下调。结论改良三甲散含药脑脊液对LPS所致的BV2小胶质细胞的炎性反应具有调节作用,其作用机制可能与调控p-JNK的表达、减少炎性介质的产生有关。

脊髓碱性成纤维细胞生长因子-2／c-Jun氨基末端激酶通路在大鼠骨癌痛中的作用

目的研究碱性成纤维细胞生长因子-2／c4un氨基末端激酶（fibroblastgrowthfactorbasic-2／cIlunN-terrninalkinase，FGF-2／JNK）通路在大鼠骨癌痛（bonecancerpain，BCP）中的作用。方法雌性sD大鼠32只，体重180g-200g，采用随机数字表法分为4组，每组8只：假手术组（S组）、BCP组（B组）、BCP＋磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline，PBS）组（BP组）、BCP＋FGF-2中和抗体组（BA组）。B组在大鼠胫骨平台注入Walker256乳腺癌细胞5μl（4×10^5个／ml），s组注入等量的生理盐水，术后10、11、12d，BA组鞘内注射FGF-2中和抗体（10μg，10μl），BP组鞘内注射等量的PBS。分别于注射肿瘤细胞前1d（T0）及注射肿瘤细胞后3、5、7、10、12、14d（T1～T6）测定大鼠的机械缩足反射阈值（pawwithdrawalmechanicalthreshold，PWMT）；术后14d处死大鼠，取脊髓腰膨大，采用Westernblot检测脊髓磷酸化JNK（phospho-JNK，p-JNK）的表达。结果与s组比较，B组T2～k时[（9．4±1．4）、（7．9±1．4）、（6．0±1．5）、（2．8±1．2）、（2．5±1.3）g]、BP组T2-T6时[（9．4±1．4）、（6．9±1．7）、（5．4±1．7）、（2．5±0．9）、（2．3±0．8）g]、BA组T1～T4时[（10．3±1．9）、（7．7±1.3）、（4．8±1．1）g]大鼠PWMT均明显下降（P〈0．05）；与B组和BP组比较，T5-6时，BA组大鼠PWMT明显升高（P〈0．05），分别为T5（9．0±1．0）g、T6（9．6±1．2）g。与S组比较，B组和BP组p-INK的表达量明显升高（P〈0．05），分别为（2．17±0．08）、（1．89±0．07）g；与B组比较，BA组p-INK的表达量（1．12±0．03）g明显降低（P〈0．05）。结论脊髓FGF-2／JNK通路参与了大鼠BCP的调控。