自噬基因pULK、PI3KC3在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的：探讨自噬基因pULK、PI3KC3在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及相关性。方法随机抽取NSCLC患者（肺癌组）77例（鳞癌31例、腺癌31例、大细胞未分化癌15例）及其癌旁正常组织21例作为对照。采用免疫组织化学染色及免疫印迹方法定性、定量检测pULK、PI3KC3在NSCLC和癌旁正常肺组织中的表达情况，并采用SPSS 13.0统计软件进行病理因素及相关性分析。结果免疫组化结果显示pULK和PI3KC3阳性表达定位于细胞质。pULK和PI3KC3在肺癌组中的阳性表达（35.1%、40.3%）显著低于癌旁正常肺组织（81.0%、76.2%，P＜0.01）。NSCLC中无淋巴结转移、TNM分期的Ⅰ～Ⅱ期和中高分化患者的pULK和PI3KC3蛋白表达阳性率均较高（P＜0.01），而不同年龄、性别、肿瘤直径大小的NSCLC的表达差异无统计学意义。相关性分析显示pULK与PI3KC3表达呈正相关关系。结论 pULK、PI3KC3在NSCLC中呈低表达。其表达与患者的临床分期、分化程度及淋巴结转移有关，而与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型及大小无关。

Association of the phosphatidylinositol signal pathway with prolonged myocardial ischemia

OBJECTIVE: To study the changes in activity of phosphatidylinositol 4 kinase (PI 4 kinase), phosphatidylinositol 4 phosphate 5 kinase (PIP 5 kinase) and protein kinase C (PKC) during myocardial ischemia and elucidate the relationship between phosphatidylinositol signal pathways and prolonged myocardial ischemia. METHODS: In vivo an ischemic rat model was used. Activity of PI 4 kinase, PIP 5 kinase and PKC were measured at different times in postischemic heart cells using isotope analysis. RESULTS: The activity of PI kinase, PIP kinase and PKC in the myocardium increased to peak at 1 hour postischemia, with activities 6.1, 3.0 and 4.0 fold over control levels, respectively. Their activities declined to normal levels with time. CONCLUSION: The phosphatidylinositol signal pathway is involved in prolonged myocardial ischemia, but its mechanism needs further study.

人巨细胞病毒UL97基因耐更昔洛韦突变检测的研究

目的了解造血干细胞移植受者人巨细胞病毒（HCMV）UL97基因耐更昔洛韦（GCV）突变情况。方法前瞻性收集2008至2010年在北京大学人民医院血液病研究所行骨髓干细胞移植术后血浆HCMVDNA阳性时间至少持续2周的患者43例，其中男29例，女14例，平均年龄21岁。利用实时荧光定量PCR检测HCMVDNA的负荷，收集49份血浆标本检测UL97耐GCV突变。应用改进的聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析方法（PCR—RFLP）检测UL97M460V／I、H520Q、A591V、A594V、L595S／F及C603W共8种常见耐GCV突变；使用PCR直接测序法（PCR—DS）检测UL97耐GCV突变；建立扩增阻滞突变系统实时PCR方法（ARMSRT—PCR）检测UL97A594V耐药突变。结果PCR—RFLP分析方法未检测出8种已知的UL97耐GCV突变。PCR—DS方法未检测到已知的uL97耐GCV突变，新发现UL97R494P、T502A、N558D及G561S突变。成功建立UL97A594VARMSRT—PCR检测方法，结合核酸提取试剂的使用，其检测下限至少达7．5×10^2拷贝数／ml，检测筛选的临床标本发现2例患者为阳性，UL97A594V耐药突变率为4．7％（2／43）。结论构建的ARMSRT—PCR方法具有较高的敏感性，可用于临床监测UL97A594V耐药突变。

XYLB基因rs17118多态性与中国汉族人群缺血性卒中关联研究

目的验证木酮糖激酶（xylulokinasehomolog,XYLB）基因rsl7118多态性与中国汉族人群缺血性卒中发病风险的关联性。方法采用病例对照研究设计，病例组为首发缺血性卒中患者，对照组为医院体检者，采用Taqman探针荧光定量聚合酶链反应技术检测rsl7118C／A多态性的基因型分布。结果共纳入475例缺血性卒中患者和483例对照者。病例组高血压（67．9％对22．2％；z。=292．982，P〈0．001）、糖尿病（24．2％对7．3％；X2=25．864，P〈0．001）的患者比例以及三酰甘油[（1．649±1．126）mmol／L对（1．157±1．480）mmol／L）；t=3．592，P〈0．001]和低密度脂蛋白胆固醇[（3．499±1．163）mmol／L对（3．105±0．627）mmol／L；t=-6．227，P〈0．001]水平显著高于对照组，但总胆固醇水平显著低于对照组[（5．144±1．296）mmol／L对（5．491±1．335）mmol／L；t=4．650，P〈0．001]。病例组AA基因型（11．4％对7．5％；X2=6．136，P=0．016）以及A等位基因（32．3％对26．4％；X2=8．093，P=0．005）频率均显著高于对照组。多变量logistic回归分析显示，在校正传统危险因素后，AA基因型携带者的缺血性卒中患病风险是CC基因型携带者的1．971倍（优势比1．971，95％可信区间1．040～3．736；P=0．038）。结论XYLB基因rsl87118C／A多态性与中国汉族人群缺血性卒中的发病风险有关。

小头畸形-癫痫-发育迟缓综合征1家系遗传学分析并文献复习

目的探讨小头畸形-癫痫-发育迟缓(microcephaly-seizures-development delay,MCSZ)综合征的临床表现和遗传学病因。方法对2018年6月在本院就诊的1个MCSZ家系中患儿及其父母行全基因外显子组测序和生物信息学分析,将所得的致病性变异用Sanger测序法验证。明确患儿的分子诊断后,对该家系2020年再妊娠胎儿行产前基因诊断。并通过文献复习,总结和分析国内外已报道的MCSZ综合征病例的临床特征及遗传学特点。结果(1)本病例:患儿女性,8月龄,因“头围小,反复抽搐”收入院,临床表现为小头畸形、多发性癫痫、精神发育迟缓。听觉诱发电位示左侧耳神经通路中度损害,全外显子组测序发现患儿存在PNKP基因复合杂合变异。其中致病性c.199-10_203delinsTCTGAGGGGT变异遗传自父亲,可能致病性c.1505C>T(p.P502>L)变异遗传自母亲,两变异均为文献未报道的变异。结合临床表现考虑遗传学病因为PNKP基因复合杂合变异。该家系再孕胎儿未遗传来自父母的PNKP基因变异,夫妇选择继续妊娠。随访至2021年12月,再孕胎儿为女性,现13月龄,枕额围测值、语言、运动发育正常。(2)文献复习:共检索到相关文献12篇、MCSZ综合征患者38例,合并本例共39例。39例患儿的临床表型包括:小头畸形(91.7%,33/36)、癫痫(88.2%,30/34)、发育迟缓(96.4%,27/28)、多动症(25.6%,10/39)、胃食管反流(10.3%,4/39)和听力丧失(7.7%,3/39)。其中癫痫首发年龄集中在婴幼儿期(96.3%,26/27),头颅MRI检查异常比例为91.2%(31/34)。结论对于产前发现胎儿头围偏小,且进行性缩小表现,出生后伴有小头畸形、癫痫、发育迟缓、多动症、胃食管反流和听力丧失等临床特征的患者,应当考虑MCSZ综合征可能。此类患儿临床预后差异大,基因检测有助于早期诊断和遗传咨询。